Граф логической структуры темы: “реакции иммунитета: реакция агглютинации, реакция преципитации”
Методическое указание для студентов к практическому занятию 17
Тема: Реакции иммунитета:
реакция связывания комплемента, реакция лизиса.
Цель: Овладение техникой постановки реакции связывания компле-мента и реакции лизиса.
Модуль1. Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция. Иммуни-тет.
Содержательный модуль 9. Реакции иммунитета.
Тема 17. Реакция связывания комплемента. Реакция лизиса.
Актуальность темы.
Несмотря на значительное количество общепринятых методов диагностики, большинство из них по точности, надежности и чувствительности не в полной мере отвечают современным требованиям. Это связано с биологическими особенностями ряда возбудителей, что ограничивает применение бактериологических и вирусологических методов, и заставляет исследователей вести разработку новых более эффективных диагностических методов.
В связи с этим в последние годы разработан ряд иммунологических тестов, которые отличаются высокой чувствительностью и специфичностью, а также быстротой получения результата. К таким исследованиям относятся ЦПР, иммуноферментный анализ, реакция иммуноблотинга, иммунохроматографический анализ и др.
Успех серологической диагностики зависит от специфичности реакции и соблюдения временных условий взятия крови, необходимых для синтеза организмом антител.
Взаимодействие антигена с антителом вызывает ряд строго специфических явлений в виде феноменов, доступных для наблюдения в пробирках и нашедших практическое применение в лабораторной диагностике в виде иммунологических реакций.
Широкое применение в лабораторной диагностике инфекционных болезней имеют, на ряду с другими, классические реакции: реакция связывания комплемента, реакции лизиса.
Реакции иммунитета используются при диагностических и иммунологических исследованиях у больных и здоровых людей. С этой целью применяют серологические исследования (от лат. serum – сыворотка + logos – учение) – методы изучения антител и антигенов с помощью реакций антиген-антитело в сыворотке крови и других жидкостях, а также тканях организма.
К основным серологическим реакциям относятся реакции агглютинации, преципитации, лизиса, нейтрализации, реакции с участием комплемента, с использованием меченых антител и антигенов (радиоиммунологический, иммуноферментный, иммунофлюоресцентный). Перечисленные реакции отличаются по регистрируемому эффекту и технике постановки, однако все они основаны на реакции взаимодействия антигена с антителом и применяются для выявления как антител, так и антигенов.
Реакции с участием комплемента основаны на активации комплемента в результате присоединения его к антителам, находящимся в комплексе с антигеном.
Реакцию связывания комплемента (РСК) проводят в две фазы:
1-я фаза – инкубация смеси искомого антигена (или антитела) с диагностической сывороткой (или антигеном-диагностикумом) и комплементом;
2-я фаза – индикаторная – определение наличия в смеси свободного комплемента добавлением гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к эритроцитам барана. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген-антитело происходит связывание им комплемента, во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов отсутствует (реакция положительная). При отрицательной реакции, если антиген и антитело не соответствуют друг другу, комплемент остается свободным и во 2-й фазе реакции он присоединяется к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело гемолитической сыворотки, вызывая гемолиз.
РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в частности сифилиса (реакция Вассермана).
Реакцией лизиса называется растворение антигена, соединенного с антителами, в присутствии комплемента. Лизины (антитела, участвующие в реакции) проявляют действие только в присутствии комплемента.
Специфические антитела взаимодействуют с различными клетками, в том числе бактериями и простейшими, что приводит к активации системы комплемента по классическому пути и последующему лизису клеток. Среди них известны реакции вибриолиза и реакции гемолиза.
Большинство микроорганизмов, за исключением холерного вибриона и трепонем, устойчивы к литическому действию антител. Поэтому реакция лизиса не нашла широкого применения в лабораторной практике.
Реакцию лизиса используют в качестве индикаторной системы в реакции связывания комплемента.
Для постановки реакции лизиса и РСК используют комплемент, который содержится в сыворотке крови морских свинок.
Конкретные цели:
Объяснить ценность реакции связывания комплемента (РСК) в диагностике инфекционных болезней.
Объяснить ингредиенты, необходимые для постановки РСК.
Объяснить механизм РСК.
Объяснить учет РСК.
Отметить особенности реакции Вассермана при сифилисе и РСК в модификации Физе при риккетсиозах).
Объяснить реакцию бактериолиза (феномен Исаева-Пфайфера).
Уметь:
Поставить РСК.
Пояснить механизм РСК.
Провести учет реакции.
Пояснить феномен Исаева-Пфейфера.
Теоретические вопросы:
1. Сущность РСК. Необходимость использования индикаторной системы.
2. Характеристика и подготовка ингредиентов РСК.
3. Механизм РСК.
4. Практическое использование РСК, реакции бактериолиза.
Практические задачи, которые выполняются на занятии:
Титрация комплемента для РСК с помощью реакции гемолиза (титр комплемента, рабочая доза).
Постановка РСК.
Учет РСК.
Изучение реакции бактериолиза Исаева-Пфейфера (по таблице).
Оформление протокола.
Литература:
1. Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и имму-нологией.– Киев: Высшая школа, 1992.- 431с.
2. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиоло-гия.- М.: Медицина, 1998.- 336с.
3. Медицинская микробиология /Под редакцией В.П. Покровского.– М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001.– 768с.
4. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммуноло-гия и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с.
5. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.- 2-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1983.- 512с.
6. Конспект лекции.
Дополнительная литература:
1. Титов М.В. Инфекционные болезни.- К., 1995.– 321с.
2. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.– М.: Медицина, 1990.- 559с.
3. БМЭ, Т. 1,2,7.
Краткие методические указания для работы на практическом занятии.
В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию. Самостоятельная работа заключается в:
а) постановке реакции связывания комплемента, оценке результатов реакции;
б) разборе реакции бактериолиза Исаева-пфайфера (по таблице).
После анализа результатов реакций, записывают в протокол.
В конце занятия проводится оформление протокола, тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.