Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Mikrobiologia_metodichka / 12 Методичка рус ФЕРМЕНТЫ БАКТЕРИЙ для студ.doc
Скачиваний:
82
Добавлен:
27.02.2016
Размер:
82.43 Кб
Скачать

Методическое указание для студентов к практическому занятию 12

Тема: Ферменты бактерий. Идентификация выделенной чистой культуры.

Цель: Выучить методы идентификации выделенных чистых культур бактерий.

Модуль 1. Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция. Иммуни-тет.

Содержательный модуль 3. Метаболизм у бактерий. Физиология бактерий.

Тема 12. Ферменты бактерий. Идентификация выделенной чистой культуры.

Актуальность темы. Ферменты - биологические катализаторы высокомолекулярной структуры, которые вырабатываются живой клеткой. Они имеют белковую природу и играют важную роль в обмене веществ микроорганизмов. Ферменты обеспечивают усвоение бактериями питательных веществ и синтез сложных органических соединений.

Основные 6 группы ферментов:

а) гидролазы - расщепляют белки, углеводы, липиды путем присоединения воды;

б) оксидоредуктазы - катализируют окислительно-восстановительные реакции;

в) трансферазы - осуществляют перенос отдельных атомов от молекулы к молекуле;

г) лиазы - отщепляют химические группы негидролизным путем;

д) изомеразы - принимают участие в обмене углеводов;

е) лигазы - оказывают содействие биосинтетическим реакциям клетки.

Различают конститутивные и адаптивные ферменты, а также ферменты агрессии. Ферменты бактерий имеют высокую активность и широко применяются в промышленности, сельском хозяйстве, медицине. В медицинской промышленности благодаря применению ферментов получают алкалоиды, стероиды, полисахариды. В сельском хозяйстве на основе ферментов дрожжей получают белково-витаминные концентраты на продуктах отхода нефти. Для каждого вида бактерий характерны специфические ферменты, поэтому в микробиологии ферментативная активность бактерий используется для идентификации бактерий. Изучение биохимических свойств бактерий проводится на дифференциально-диагностических средах (Эндо, Левина, Плоскирева, Ресселя, Гисса и др.).

Дифференциально-диагностические среды делятся на три группы:

  1. среды для выявления протеолитических свойства бактерий (МПБ, мясо-пептонный желатин);

  2. среды для изучения ферментации углеводов (Эндо, Плоскирева, Гисса, Ресселя);

  3. среды для определения гемолитических свойств (кровяной агар).

Изучение протеолитических свойств проводиться с помощью индикаторов, позволяющих обнаруживать образование сероводорода, индола и т.д. при расщеплении белка. Для этого используют индикаторы ацетата свинца (на сероводород) и щавелевой кислоты (на индол). Индикаторы при их использовании изменяют цвет: при выделении сероводорода - чернеют, при выделении индола - краснеют. Для определения ферментации углеводов используются среды Гисса, в состав которых входят глюкоза, лактоза, маннит, мальтоза, сахароза и индикатор Андреде (карболовый фуксин, обесцвеченный содой). При ферментации того или другого углевода среда краснеет.

Конкретные цели:

  • Изучить методы идентификации выделенных чистых культур бактерий.

  • Описывать наиболее употребляемые дифференциально-диагностические питательные среды и их приготовление.

  • Объяснять изменения в дифференциально-диагностических средах при росте бактерий.

  • Трактовать результаты идентификации выделенных чистых культур бактерий и делать вывод.

Уметь:

  • Проводить посев бактерий на дифференциально-диагностические питательные среды.

  • Проводить проверку выделенных культур бактерий на чистоту.

  • Готовить микропрепараты из выделенных культур бактерий.

  • Окрашивать микропрепараты по Граму.

  • Проводить микроскопию микропрепаратов с помощью иммерсионного микроскопа.

  • Анализировать ферментативные свойства выделенных чистых культур.

Теоретические вопросы:

  1. Ферменты бактерий, их классификация.

  2. Использование микробов и их ферментов в биотехнологии.

  3. Методы изучения ферментативной активности бактерий и использование их для идентификации бактерий.

  4. Современные методы ускоренной идентификации бактерий с помощью автоматизированных индикаторов ферментативной активности.

  5. Дифференциально-диагностические питательные среды. Общий принцип их пользования (примеры).

Практические задачи, которые выполняются на занятии:

  1. Продолжение выделения чистых культур бактерий: проверка чистоты культуры.

  2. Приготовление микропрепаратов из выделенной чистой культуры.

  3. Окрашивание микропрепаратов по Граму.

  4. Микроскопия микропрепаратов из чистых культур бактерий, их анализ и зарисовывание в протокол.

  5. Пересев выделенной чистой культуры на среды Гисса, и МПБ для выявления индола и сероводорода.

  6. Оформление протокола.

Литература:

  1. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбаков А.М. Микробиология.- М.: Медицина, 1998.- 336с.

  2. Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.- М.: ГЕОТАФ-МЕД, 2001.- 768с.

  3. Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія.- К.: "Вища школа", 1992.– 431с.

  4. Коротяев А.И., Бабичев С.О. Медицинская микробиология, иммунология и вірусологія /Учебник для медицинских ВУЗов.- С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с.

5. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.– 2-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1983,- 512с.

6. Конспект лекций.

Дополнительная литература:

  1. Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби.- К., 1995.– 321с.

  2. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.- М.: Медицина, 1990.- 559 с.

  3. БМЭ, Т. 1, 2, 7.

Короткие методические указания к работе на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию. Самостоятельная работа состоит из изучение дифференциально-диагностических питательных сред, используемые для идентификации выделенных бактерий. Потом студенты изучают собственные посевы, сделанные на предыдущем занятии: проводится проверка чистоты культуры. Для этого студенты готовят микропрепараты из выделенной чистой культуры, окрашивают их по Граму и проводят микроскопию. После анализа микропрепаратов, их зарисовывают в протокол.

На втором этапе студенты проводят пересев выделенной чистой культуры на среды Гисса и МПБ для выявления индола и сероводорода.

В конце занятие проводится оформление протокола, тестовый контроль и анализ итогов результатов самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия

№ п/п

Этапы

Время в мин.

Средства обучения

Оснащение

Место проведения

1

Проверка и коррекция ис-ходного уров-ня подготовки к занятию

20'

Тестовые задачи исходного уровня

Таблицы, кол-лекция диффе-ренциально-диагностичес-ких сред, чис-тых и засеян-ных бактерия-ми (Левина, Плоскирева, Гисса, кровя-ной агар)

У

Ч

Е

Б

Н

А

Я

К

О

М

Н

А

Т

А

2

Самостоятельная работа

35'

Графы логической структуры.

Иммерсионный микроскоп, краски, пред-метное стекло, бактериологи-ческие петли, собственные посевы чистых культур бакте-рий, среды Гисса, Китт-Тароцци, моло-ко под вазели-новым маслом, МПБ, индика-торы на серо-водород и ин-дол.

3

Самоконтроль и коррекция усвоения материала

15'

Целевые учебные задания

4

Тестовый контроль

15'

Тесты

5

Анализ результатов работы

5'