Методическое указание для студентов к практическому занятию 10 Тема: Выделение чистых культур аэробов. Элективные питатель-ные среды.

Цель: Изучение принципов и методов выделения чистых культур аэробов, определение типов роста на МПА и МПБ и свойства элективных и селективных питательных сред.

Модуль 1. Морфология и физиология микроорганизмов.

Содержательный модуль 2. Физиология микроорганизмов.

Тема 10: Выделение чистых культур аэробов. Элективные питательные среды.

Актуальность темы. Не всегда возможно поставить диагноз или идентифицировать микроорганизм - возбудитель инфекционной болезни, используя изучение только морфологических свойств. Весьма важно выделить возбудитель инфекционной болезни в чистой культуре и идентифицировать его.

В клинической бактериологической лаборатории необходимо:

1. Выделить бактерии в чистой культуре;

2. Изучит их свойства;

3. Получить достаточно бактерий для приготовления антигенов и для других исследований;

4. Идентифицировать выделенные микроорганизмы, изучая их биохимические, антигенные свойства и определяя чувствительность их к бактериофагам (фаготипирование) и бактериоцинам;

5. Определить чувствительность выделенных культур бактерий к антибиотикам;

6. Оценить количество возбудителей инфекции в инфицированном материале;

7. Сохранить выделенный штамм бактерий.

Чистой культурой называют сосредоточение микробов одного вида на питательной среде.

Существует несколько методов выделения чистой культуры аэробов:

1. Физический (использование высокой температуры ~ 80⁰С – для выделения спорообразующих бактерий).

2. Химический (использование щелочей или кислот - для кислоторезистентных бактерий).

3. Биологический (использование экспериментальных животные - для выделения бактерий - возбудителей зоонозных инфекций).

4. Механический (используется для выделения практически всех видов бактерий):

а) согласно Дригальского или

б) Коха

5. Использование выборочных (элективных или селективных) питательных сред, на которые хорошо развиваются только определенные виды бактерий и плохо или совсем не растут другие виды.

Так, например, щелочная пептонная вода и щелочной МПБ являются элективными средами для холерного вибриона. Питательные среды, содержащие определенные концентрации пенициллина или других антибиотиков, элективны для устойчивых к ним штаммов и вместе с тем селективны к антибиотикочувствительным культурам.

Как правило, особенно если бактерии не имеют свойств, позволяющих применить один из способов первичной обработки исследуемого материала, применяют механический метод разъединения особей смеси микроорганизмов, делая посев на плотную питательную среду для получения изолированных колоний каждого вида. Согласно методу Дригальского используют 3 чашки Петри с плотной питательной средой, на которые засевают шпателем или пастеровской петлей смесь постепенно, не стерилизуя, используя всю поверхность чашки, для того чтобы получить изолированные колонии. Соответственно методу Коха смесь на первых этапах разводят в расплавленной и охлажденной плотной среде до нужной концентрации, а потом заливают чашки Петри, чтобы также получить изолированные колонии. Колонии тщательно изучают, отбирают нужные и пересевают на МПА для получения достаточного материала.

Конкретные цели:

• Знать принципы и методы выделения чистой культуры аэробов.

• Знать состав и свойства элективных и селективных питательных сред.

• Уметь идентифицировать и описать типы роста чистых культур аэробов S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides:

а) на МПБ

б) на МПА

• Уметь посеять смесь бактерий на чашку Петри с МПА для получения изолированных колоний, используя метод Дригальского.

Уметь:

1. Приготовить мазки из посевов чистых культур S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides на МПБ и МПА и окрасит их по Граму.

2. Описать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides в мазках из чистых культур.

3. Приготовить мазок из смеси бактерий, которая содержит S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides и окрасить по Граму.

4. Описать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides в мазках из их смеси.

5. Посеять смесь бактерий на плотную питательную среду (МПА), используя метод Дригальского для получения изолированных колоний каждого вида.

Теоретические вопросы:

1. Бактериологический метод в лабораторной диагностике инфекционных болезней.

2. Понятие: штамм, колония, чистая культура, элективная (селективная) питательная среда.

3. Принципы и методы выделения чистой культуры аэробов.

4. Состав и свойства элективных, селективных питательных сред.

5. Техника посева бактерий на редкие и плотные питательные среды.

6. Характер роста бактерий на редких и плотных питательных средах.

Практические задачи, которые выполняют на занятии:

1. Промикроскопировать, описать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides в демонстрационных препаратах чистых культур и смеси.

2. Приготовить мазки из посевов S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides на МПБ и МПА.

3. Окрасит мазки по Граму.

4. Промикроскопировать, описать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides в мазках чистых культур.

5. Приготовить мазок из смеси бактерий, которая содержит S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides.

6. Окрасить мазок из смеси бактерий по Граму.

7. Промикроскопировать, описать и идентифицировать S. epidermidis, E. coli и B. аnthracoides в мазках из их смеси.

8. Посеять смесь бактерий на чашку Петри с МПА, используя метод Дригальского.

9. Оформить протокол в альбоме, зарисовывая демонстрационные микрослайды и препараты, которые были приготовлены студентами.

Литература:

1. Коротяев А.И., Бабичев С.О. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология.- С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 579с.

2. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбаков А.М. Микробиология.- М.: Медицина, 1998.- 336с.

3. Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.- М.: ГЕОТАФ-МЕД, 2001.- 768с.

4. Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія.- К.: "Вища школа", 1992.– 431с.

5. Конспект лекций.

Короткие методические указания к работе на практическом занятии:

В начале практического занятия преподаватель должен проверить уровень подготовки студентов к практическому занятию.

Самостоятельная работа студентов состоит из приготовления мазков из посевов чистых культур S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides на МПБ и МПА и окраски их по Граму. Студенты также готовят мазки из смеси бактерий, которая содержит S. epidermidis, E. coli и B. anthracoides.

В дальнейшем студенты микроскопируют демонстрационные препараты чистых культур указанных видов микроорганизмов и их смеси, а также препаратов, которые были приготовлены самыми студентами. Описывают морфологические и тинкториальные свойства каждого вида, сравнивают препараты, которые они приготовили, с демонстрационными и на этом основании идентифицируют виды микробов.

Практическая работа студентов заканчивается выполнением посевов смеси 3-х видов микроорганизмов на чашку Петри с МПА, используя метод Дригальского.

Каждый студент должен зарисовать все микропрепараты в альбом и оформить протокол практического занятия.

В конце практического занятия преподаватель проводит исходный тестовый контроль и анализирует итоговые результаты самостоятельной работы каждого студента.