Методическая рекомендация для студентов к практическому занятию 16
Тема: Реакции иммунитета:
реакция агглютинации, реакция преципитации.
Цель: Владеть техникой постановки реакции агглютинации и реакции
преципитации для диагностики инфекционных заболеваний.
Модуль 1. Морфология и физиология микроорганизмов. Инфекция.
Иммунитет.
Смысловой модуль 9. Реакции иммунитета.
Тема 16: Реакция агглютинации. Реакция преципитации.
Актуальность темы. Под иммунитетом подразумевают невосприимчивость организма к инфекционным и неинфекционным агентам (патогенных микроорганизмов, чужеродных белков и др. веществ). Эти агенты получили названия антигенов. Иммунитет бывает врожденным и приобретенным. Врожденный – когда формируются тканевые и гуморальные защитные приспособления, обуславливающие невосприимчивость к инфекционным заболеваниям, передающимся по наследству.
Приобретенный – осуществляется иммунной системой организма в виде выработки антител или накопления сенсибилизированных лимфоцитов. Он подразделяется на естественный и искусственный. По механизму действия разделяется на активный и пассивный. Во всех иммунологических реакциях основным компонентом является антиген.
Основной функцией иммунной системы, которая состоит из лимфоидной ткани, является распознавание чужеродных агентов (антигенов) и обезвреживание их.
Антигены могут попадать в организм через дыхательные пути, пищеварительный тракт, через кожные и слизистые покровы. Каждый антиген стимулирует образование особых белковых веществ – антител.
Антигены подразделяются на полноценные и неполноценные (гаптены). Полноценные антигены вызывают полный иммунный ответ. Неполноценные антигены самостоятельно не вызывают иммунного ответа, но иногда приобретают эту способность при конъюгации с высокомолекулярными белковыми носителями. Кроме того, бывают антигены: полугаптены, проантигены, гетероантигены и изоантигены.
Антитела представляют собой иммуноглобулины сыворотки крови человека или животного. Образуются антитела после перенесенной инфекции, и в результате иммунизации ослабленными или убитыми бактериями, риккетсиями, вирусами, токсинами и другими агентами. Антитела – белки иммуноглобулинов по химическому составу относятся к гликопротеидам. По структуре и иммунобиологическим свойствам иммуноглобулины подразделяются на 5 классов: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.
Нормальные антитела обнаруживают у людей и животных не иммунизированных. Специфические антитела образуются в результате перенесенной инфекции или же иммунизации.
Реакции взаимодействия антитела с антигеном называются серологическими. Серологические реакции отличаются высокой специфичностью и применяются при диагностике многих инфекционных заболеваний. Различают реакции агглютинации и преципитации.
1. Реакция агглютинации (РА) основана на взаимодействии антигена (агглютиногена) и антитела (агглютинина), при котором происходит склеивание и выпадение в осадок микробных тел в присутствии электролита. Существуют различные модификации постановки реакции агглютинации.
Наибольшее значение имеют:
- Макроскопическая (развернутая) агглютинация в пробирках. К сыворотке больного добавляют взвесь микробов (диагностикум) и через 1 час в термостате при температуре 37 градусов отмечают разведение (титр) сыворотки, при котором произошла реакция. Положительной считают реакцию агглютинации тогда, когда на дне пробирки образуется осадок с выраженным просветлением надосадочной жидкости. Этот осадок называется агглютинатом.
По характеру агглютината различают мелкозернистую (О) и крупнозернистую (Н) агглютинацию. Для выявления мелкозернистого агглютината пользуются агглютиноскопом. Учет результатов начинают с контрольных пробирок. Последнее разведение сыворотки, в которой наблюдается агглютинация, считают ее титром.
Цель реакции: обнаружение антител в сыворотке больного.
- Микроскопическая (ускоренная) ориентировочная агглютинация на стекле. К капле диагностической иммунной сыворотки вносят каплю бактериальной культуры и равномерно перемешивают. Реакция протекает при комнатной температуре через 5-10 минут. Затем производят учет. При положительной реакции в капле с сывороткой отмечают скопление бактерий в виде зернышек или хлопьев. Цель реакции: определение вида возбудителя по известной диагностической сыворотке.
- Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА). Сущность этой реакции заключается в том, что эритроциты барана способны адсорбировать на своей поверхности антигены. Под воздействием специфических антител, эритроциты склеиваются и выпадают в осадок, образуя на дне гемагглютинат. Реакция отличается высокой чувствительностью и специфичностью. РНГА позволяет обнаружить минимальное количество антител и неполноценные антигены полисахаридной природы. Эту реакцию применяют при диагностики многих инфекционных заболеваний (брюшного и сыпного тифа, паратифов, туберкулеза и др.).
2. Реакция преципитации (РП) – осаждение комплекса антиген-антитело. Основным отличием РП от РА является то, что при РА применяется корпускулярный антиген, а при РП – антиген представляет собой коллоидное вещество белковой или полисахаридной природы. В этой реакции антиген называется преципитиноген, а антитела – преципитины. Реакцию ставят в пробирках наслоением раствора антигена на иммунную сыворотку. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе
этих растворов образуется кольцо преципитата. Если в качестве антигена используют прокипяченные и профильтрованные экстракты органов и тканей, реакция называется реакцией термопреципитации (реакция Асколи, которую ставят при диагностике сибирской язвы, чумы, туляремии и др.).
Широкое распространение получили реакции преципитации в агаре: метод простой диффузии, метод двойной диффузии.
Разновидностью преципитации является реакция флокуляции – для определение активности анатоксина или антитоксической сыворотки. Кроме того, можно использовать эту реакцию для определения токсигенности штаммов Corynebacterium diphtheriae.
Конкретные цели:
-
Объяснить роль антигенов, как индукторов иммунного ответа;
-
Описать структуру антигенов, в том числе антигенов микроорганизмов;
-
Описать структуру антител (разных классов иммуноглобулинов);
-
Проанализировать механизм взаимодействия антител с антигенами;
-
Описать механизм реакции агглютинации;
-
Описать механизм реакции преципитации.
Уметь:
-
Пояснить роль антигенов, как индукторов иммунного ответа;
-
Описать структуру антител (разных классов иммуноглобулинов);
-
Проанализировать механизм взаимодействия антител с антигенами;
-
Трактовать результаты реакции агглютинации;
-
Трактовать результаты реакции преципитации;
-
Анализировать полученные результаты.
Теоретические вопросы:
-
Определение понятия «антигены», «антитела».
-
Роль антигенов как индукторов иммунного ответа.
-
Структура антител (разных классов иммуноглобулинов).
-
Механизм взаимодействия антител с антигенами.
-
Реакции иммунитета, их роль в иммунном ответе и диагностике инфек-ционных болезней.
-
Механизм реакции агглютинации.
-
Механизм реакции преципитации.
Практические задания, которые выполняются на занятии:
-
Постановка реакции агглютинации для выявления антител в сыворотке больного.
-
Постановка реакции микроагглютинации на стекле с диагностическими сыворотками для идентификации чистой культуры бактерий.
-
Оценка результатов реакции агглютинации.
-
Постановка реакции преципитации для выявления антигена бактерий.
-
Оценка результатов реакции преципитации.
-
Оценка результатов реакции непрямой гемагглютинации.
-
Оформление протокола.
Литература:
1. Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и имму-нологией.– Киев: Высшая школа, 1992.- 431с.
2. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиоло-гия.- М.: Медицина, 1998.- 336с.
3. Медицинская микробиология /Под редакцией В.П. Покровского.– М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001.– 768с.
4. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммуноло-гия и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с.
5. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.- 2-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1983.- 512с.
6. Конспект лекции.
Дополнительная литература:
1. Титов М.В. Инфекционные болезни.- К., 1995.– 321с.
2. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.– М.: Медицина, 1990.- 559с.
3. БМЭ, Т. 1,2,7.
Краткие методические указания для работы на практическом занятии.
В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию. Самостоятельная работа состоит из:
а) постановки реакции агглютинации для выявления антител в сыво-ротке больного и оценки результатов реакции;
б) постановки реакции микроагглютинации на стекле и оценки резуль-татов реакции;
в) постановки реакции преципитации и оценки результатов реакции;
г) оценки результатов реакции непрямой гемагглютинации.
После анализа результатов реакций, записывают в протокол.
В конце занятия проводится оформление протокола, тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.