Gosudarstvennaya_farmakopeya_RB

Рисунок 2.8.12.-4. – Прибор для определения содержания эфирного масла методами C и D.

Перед каждым определением через прибор пропускают пар в течение 15-20 мин. После 6-8 определений прибор необходимо промыть последовательно ацетоном Р и водой Р.

Навеску измельчённого сырья помещают в колбу, приливают 300 мл воды Р, колбу соединяют с паропроводной трубкой и заполняют водой Р градуированную и сливную трубки через кран при помощи трубки, оканчивающейся воронкой. Колбу с содержимым нагревают и кипятят с интенсивностью, при которой скорость стекания дистиллята составляет 60-65 капель в 1 мин в течение времени, указанного в соответствующей нормативной документации на лекарственное растительное сырьё. Через 5 мин после окончания перегонки открывают кран, постепенно спуская дистиллят так, чтобы эфирное масло заняло градуированную часть трубки приёмника и ещё через 5 мин замеряют объём эфирного масла.

Объём эфирного масла в 100 г лекарственного препарата (лекарственного растительного сырья) в пересчёте на абсолютно сухое лекарственное растительное средство (лекарственное растительное сырьё) рассчитывают по формуле:

V ´100´100 ;

м´(100 -W )

где:

м– масса сырья в граммах;

W – потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

Метод D. Используют прибор, изображённый на рисунке 2.8.12.-4. Навеску измельчённого сырья помещают в колбу, приливают 300 мл воды Р, колбу соединяют с паропроводной трубкой и заполняют водой Р градуированную и сливную трубки через кран при помощи резиновой трубки, оканчивающейся воронкой. Затем через боковую трубку при помощи пипетки вливают в приёмник около 0,5 мл декалина Р и точно замеряют его объём, опуская для этого уровень жидкости в градуированную часть трубки. Далее поступают, как описано в методике В.

Объём эфирного масла в 100 г лекарственного препарата (лекарственного растительного сырья) в пересчёте на абсолютно сухое лекарственное растительное средство (лекарственное растительное сырьё) рассчитывают по формуле:

(V1 -V2 ) ×100×100 ,

м× (100 -W )

2.8.13. ОСТАТОЧНОЕ КОЛИЧЕСТВО ПЕСТИЦИДОВ

Определение Под пестицидами понимают любые вещества или смесь веществ, предназначенных для предотвращения появления, уничтожения или контроля численности любых вредителей, нежелаемых видов растений или животных, вызывающих повреждение или каким-либо другим образом оказывающих негативное влияние на производство, обработку, хранение, транспортировку или реализацию лекарственных растительных средств (лекарственного растительного сырья). Также это понятие включает в себя вещества, предназначенные для использования в качестве регуляторов роста, дефолиантов или осушителей и любые вещества, используемые

для обработки растений перед сбором урожая или после него для защиты от ухудшения качества во время хранения или транспортировки.

Пределы. Если иного не указано в частной статье, лекарственное растительное

сырьё должно быть исследовано на наличие следов пестицидов в пределах как минимум списка, представленного в таблице 2.8.13.-1. Пределы пестицидов, не обозначенных в таблице, наличие которых предполагается по каким-либо причинам, должны соответствовать директивам Европейского Сообщества 76/895 и 90/642, включая их дополнения и изменения. Пределы содержания пестицидов, которые не указаны ни в таблице 2.8.13.-1 ни в директивах ЕС высчитывают исходя из следующего выражения:

Если лекарственное растительное сырьё предназначено для приготовления экстрактов, настоек или других лекарственных форм, при приготовлении которых происходит изменение содержания пестицидов в конечном продукте, пределы содержания пестицидов высчитывают исходя из следующего выражения:

метилпентахлорфенилсульфида)

Компетентный уполномоченный орган может частично или полностью освободить от проведения испытаний на содержание пестицидов при условии, что известна и может быть проверена полная история (природа и количество использованных пестицидов, дата каждой обработки во время выращивания и после сбора урожая) данной партии.

Поставщик культивируемого лекарственного растительного сырья должен предоставить протокол исследований на поставляемую партию лекарственного растительного сырья, в котором указываются использованные пестициды и их остаточное количество.

Для дикорастущих лекарственных растений исследование на остаточное количество пестицидов не требуется.

Отбор проб

Методика. Из тары вместимостью до 1 кг берут 1 пробу, достаточную для проведения всех испытаний, из тщательно перемешенного общего количества. Из тары вместимостью от 1 кг до 5 кг берут три равные пробы из верхней, средней и нижней частей тары, каждая проба должна быть достаточная для проведения всех испытаний. Пробы тщательно перемешивают, и из полученной массы берут пробу, достаточную для проведения всех испытаний. Из тары вместимостью более 5 кг берут три пробы по 250 г из верхней, средней и нижней части тары. Пробы тщательно смешивают, и из полученной массы берут пробу, необходимую для проведения испытаний.

Количество проб. Если количество тарных мест (n) составляет 3 и менее, пробы отбираются из каждого тарного места так, как указано выше. Если количество тарных мест более трёх, то пробы отбирают так, как описано выше из n + 1 мест, округляя, если необходимо, полученное число до целого значения.

Пробы должны анализироваться немедленно во избежание возможного разрушения остатков пестицидов. Если это невозможно, пробы сохраняют в герметичных

контейнерах, пригодных для контакта с пищевыми продуктами, при температуре ниже 0ºС в защищённом от света месте.

Реактивы. Все реактивы и растворители не должны содержать примесей, особенно пестицидов, которые могут влиять на результат анализа. Как правило, должны использоваться растворители специального качества или, если это невозможно, свежеперегнанные в приборах, сделанных из стекла. Во всех случаях должен проводиться контрольный опыт.

Оборудование. Чтобы гарантировать чистоту оборудования, и особенно изделий из стекла, от пестицидов, его тщательно очищают, например, отмачивают в течение минимум 16 ч в растворе детергентов, не содержащих фосфор, ополаскивают их большим количеством дистиллированной воды Р и промывают ацетоном Р и гексаном Р или гептаном Р.

Качественное и количественное определение остатков пестицидов.

Используемые аналитические методики должны быть валидированы. В частности, они должны удовлетворять следующим критериям:

-выбранный метод, особенно стадии очистки, должен быть подходящим для комбинации пестицид-матрица и не должен быть чувствительным на наличие коэкстрактивных веществ; пределы обнаружения и количественного определения должны быть измерены для каждой комбинации пестицид-матрица;

-должно определяться от 70 до 110% каждого анализируемого пестицида;

-сходимость определения метода должна быть не менее значений, обозначенных в таблице 2.8.13.-2;

-воспроизводимость метода должна быть не менее значения, указанного в таблице

2.8.13.-2;

-концентрация испытуемых и эталонных растворов и параметры приборов должны

быть такими, чтобы попадать в диапазон линейности ответа используемого детектора.

ИСПЫТАНИЯ НА СОДЕРЖАНИЕ ПЕСТИЦИДОВ

ИНСЕКТИЦИДЫ: ХЛОРОРГАНИЧЕСКИЕ, ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИЕ И ИРЕТРОИДНЫЕ

(Раздел носит информационный характер)

Данные методики могут быть использованы вместе с методами, описанными выше. В зависимости от испытуемого вещества, методы, описанные ниже, могут быть при необходимости модифицированы. Возможно использование другой колонки с отличающейся полярностью или другой способ детектирования (масс спектрометрия 2.2.43) или другие методы (иммунохимические методы 2.7.1) для подтверждения полученных результатов.

Данная методика подходит для анализа образцов лекарственных растительных средств (лекарственного растительного сырья) влажностью менее 15 %. Образцы с более высоким содержанием воды должны быть высушены, в условиях минимального воздействия на содержание пестицидов в таких условиях, чтобы процесс сушки не влиял в значительной степени на содержание пестицидов.

1. ЭКСТРАКЦИЯ

К 10 г грубо измельчённого образца добавляют 100 мл ацетона Р и оставляют на 20 мин. Добавляют 1 мл раствора, содержащего 1,8 мкг/мл карбофенотиона Р в толуоле Р. Гомогенизируют, используя высокоскоростной смеситель, в течение 3 мин. Отфильтровывают и промывают фильтр дважды порциями ацетона Р по 25 мл.

Фильтрат и промывочный растворитель объединяют и отгоняют, используя ротационный испаритель, при температуре не выше 40ºС, до практически полного испарения растворителя. К остатку добавляют несколько миллилитров толуола Р и нагревают снова до тех пор, пока весь ацетон не будет отогнан. Остаток растворяют в 8 мл толуола Р. Фильтруют через мембранный фильтр (45 мкм), ополаскивают колбу и фильтр толуолом Р и доводят объём фильтрата до 10,0 мл тем же растворителем (раствор А).

2.ОЧИСТКА

2.1.Хлорорганические, фосфорорганические, пиретроидные инсектициды.

Испытание осуществляется с помощью эксклюзионной хроматографии (2.2.30).

При хроматографировании могут использоваться:

-колонка из нержавеющей стали длиной 0,30 м и внутренним диаметром 7,8 мм,

наполненная сополимером стирол-дивинилбензолом Р (5 мкм);

-толуол Р как подвижная фаза при скорости протока 1 мл/мин.

Подготовка колонки. Хроматографируют 100 мкл раствора, содержащего 0,5 г/л

метилового красного Р и 0,5 г/л орацетового синего 2Р Р в толуоле Р. Изменение

цвета элюата с оранжевого на синий должно происходить при объёме элюирования 10,3 мл. Если необходимо откалибровать колонку, используют растворы в толуоле Р инсектицида с наименьшей молекулярной массой (например, дихлофос) и с наибольшей молекулярной массой (например, дельтаметрин). Определяют, какая фракция элюата содержит оба инсектицида.

Очистка испытуемого раствора. Хроматографируют подходящий объём раствора А (от 100 мкл до 500 мкл). Собирают фракцию, как описано выше (фракция, которая содержит оба инсектицида) (раствор В). Фосфорорганические инсектициды обычно элюируются между 8,8 мл и 10,9 мл. Хлорорганические и пиретроидные инсектициды элюируются обычно между 8,5 мл и 10,3 мл.

2.2. Хлорорганические и пиретроидные инсектициды. В хроматографическую колонку длиной 0,10 м и с внутренним диаметром 5 мм помещают немного обезжиренной ваты и 0,5 г силикагеля, обработанного следующим образом: нагревают

силикагель для хроматографии Р при температуре 150 ºС как минимум 4 ч.

Охлаждают и добавляют по каплям воду Р в количестве 1,5 % массы силикагеля, интенсивно перемешивая до полного разрушения агломератов, и продолжают перемешивать 2 ч с помощью механического аппарата для встряхивания. Обрабатывают колонку 1,5 мл гексана Р. Также могут быть использованы набитые колонки, содержащие около 0,50 г силикагеля, при условии, что возможность использования их обоснована.

Концентрируют раствор B в токе гелия для хроматографии Р или бескислородного азота Р практически досуха и растворяют в подходящем объёме толуола Р (от 200 мкл до 1 мл в зависимости от объёма, использованного при приготовлении раствора В). Количественно переносят раствор на колонку и хроматографируют, используя 1,8 мл толуола Р в качестве подвижной фазы. Элюат собирают (раствор С).

3.КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ

3.1.Фосфорорганические инсектициды. Исследование проводят с помощью газовой хроматографии (2.2.28) используя карбофенотион Р в качестве внутреннего

стандарта. Возможно понадобится второй внутренний стандарт в случае идентификации возможных примесей со временем удерживания, которое соответствует карбофенотиону.

Испытуемый раствор. Концентрируют раствор В в токе гелия для хроматографии Р практически досуха и растворяют в 100 мкл толуола Р.

Раствор сравнения. Готовят, по крайней мере, три раствора определяемых инсектицидов и карбофенотиона в толуоле Р с концентрациями, подходящими для построения калибровочного графика.

При хроматографировании могут использоваться:

-капиллярная колонка длиной 30 м и с внутренним диаметром 0,32 мм, внутренняя стенка которой покрыта слоем в 0,25 мкм поли(диметил)силоксана Р;

-водород для хроматографии Р как газ-носитель; другие газы, такие как гелий для

хроматографии Р или азот для хроматографии Р также могут быть использованы,

при условии, что возможность использования их обоснована; - фосфоро-азотный пламенно-ионизационный детектор или атомно-эмиссионный

детектор, поддерживают температуру колонки 80 ºС в течение 1 мин, затем поднимают её со

скоростью 30 ºС до 150 ºС, при температуре 150 ºС колонку выдерживают 3 мин, после чего поднимают температуру со скоростью 4 ºС до 280 ºС и поддерживают эту температуру 1 мин; температуру инжектора поддерживают 250 ºС, а температуру детектора 275 ºС. Вносят необходимый объём каждого раствора. При условии

соблюдения вышеуказанных условий проведения хроматографии относительное время удерживания веществ будет близким к значениям, указанным в таблице 2.8.13.-3.

Подсчитывают содержание каждого инсектицида исходя из площадей пиков и концентраций растворов.

3.2. Хлорорганические и пиретроидные инсектициды. Исследование проводят с помощью газовой хроматографии (2.2.28), используя карбофенотион как внутренний стандарт. Возможно понадобится второй внутренний стандарт в случае идентификации возможных примесей со временем удерживания, которое соответствует карбофенотиону.

Испытуемый раствор. Концентрируют раствор С в токе гелия для хроматографии Р или бескислородного азота Р практически досуха и растворяют в 500 мкл толуола Р.

Раствор сравнения. Готовят, по крайней мере, три раствора определяемых инсектицидов и карбофенотиона в толуоле Р с концентрациями, подходящими для построения калибровочного графика.

При хроматографировании могут использоваться:

- капиллярная колонка длиной 30 м и с внутренним диаметром 0,32 мм, внутренняя стенка которой покрыта слоем в 0,25 мкм поли(диметил)(дифенил)силоксана Р;

В круглодонную колбу вместимостью 250 мл всыпают указанное в частной статье количество измельчённого образца лекарственного растительного сырья (180) или экстракта и добавляют 150 мл воды Р. Нагревают на водяной бане в течение 30 мин.

Охлаждают под проточной водой и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл. Ополаскивают круглодонную колбу и сливают промывные воды в мерную колбу, после чего объём доводят водой Р до 250,0 мл. Дают осесть твёрдым частичкам и фильтруют жидкость через фильтровальную бумагу диаметром 125 мм. Первые 50 мл фильтрата отбрасывают.

В случае жидкого экстракта или настойки разбавляют указанное количество жидкого экстракта или настойки водой до 250,0 мл. Раствор фильтруют через фильтровальную бумагу диаметром 125 мм. Первые 50 мл фильтрата отбрасывают.

Общее количество полифенолов. Разбавляют 5,0 мл фильтрата до 25,0 мл водой Р.

Смешивают 2,0 мл полученного раствора с 1,0 мл фосфорномолибденовольфрамового реагента Р и 10,0 мл воды Р и доводят объём раствора до 25,0 мл раствором натрия карбоната Р концентрацией 290 г/л. Через 30 мин измеряют оптическую плотность (2.2.25) при длине волны 760 нм (А1), используя воду Р как раствор сравнения.

Полифенолы, не адсорбируемые кожным порошком. К 10,0 мл фильтрата добавляют 0,10 г кожного порошка ФСО и интенсивно перемешивают в течение 60 мин. Отфильтровывают и разбавляют 5,0 мл фильтрата до 25,0 мл водой Р. Смешивают 2

мл этого раствора с 1,0 мл фосфорномолибденовольфрамового реагента Р и 10,0 мл

воды Р и объём доводят до 25,0 мл раствором натрия карбоната Р концентрацией 290 г/л. Через 30 мин измеряют оптическую плотность (2.2.25) при длине волны 760 нм (А2), используя воду Р как раствор сравнения.

Стандарт. Непосредственно перед использованием растворяют 50,0 мг пирогаллола Р в воде Р и доводят объём раствора до 100,0 мл тем же растворителем. Разбавляют 5,0 мл этого раствора до 100,0 мл водой Р. Смешивают 2,0 мл полученного раствора с 1,0 мл фосфорномолибденовольфрамового реагента Р и 10,0 мл воды и доводят объём до 25,0 мл раствором натрия карбоната Р с концентрацией 290 г/л. Через 30 мин измеряют оптическую плотность при длине волны 760 нм (А3), используя воду Р как раствор сравнения.

Рассчитывают процентное содержание дубильных веществ в пересчёте на пирогаллол по формуле:

62,5× (A1 - A2 ) × м2 ,

А3 × м1

# Допускается проводить определение дубильных веществ по методике, указанной в частной статье.

2.8.15. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЯ ГОРЕЧИ

Показатель горечи обратно пропорционален разбавлению соединения, жидкости или экстракта, при котором всё ещё ощущается горький вкус. Он определяется по отношению к показателю горечи хинина гидрохлорида, значение которого принято за

200 000.

Определение поправочного коэффициента

Дегустационная комиссия должна состоять, по крайней мере, из 6 человек. Перед дегустацией рот необходимо ополаскивать водой Р.

Для того чтобы скорректировать индивидуальные различия среди членов дегустационной комиссии при определении показателя горечи, необходимо определять поправочный коэффициент для каждого члена комиссии.

Основной раствор. Растворяют 0,100 г хинина гидрохлорида Р в небольшом количестве воды Р и доводят объём раствора до 100,0 мл водой Р. Отбирают 1,0 мл полученного раствора и разбавляют его до 100,0 мл водой Р.

Раствор сравнения. Готовят серию разбавлений, поместив в первую пробирку 3,6 мл основного раствора, а в последующих пробирках увеличивают объём основного раствора на 0,2 мл до объёма 5,8 мл. Объём каждой пробирки доводят до 10,0 мл

водой Р.

Находят наименее концентрированный горький раствор. Для этого берут 10 мл

наиболее разбавленного раствора в рот и перекатывают его со стороны в сторону у корня языка в течение 30 с. Если в растворе не чувствуется горького вкуса, его выплёвывают и ждут 1 мин. После этого прополаскивают рот водой Р. Через 10 мин

повторить испытание со следующей по возрастанию концентрацией хинина гидрохлорида.

Рассчитывают поправочный коэффициент для каждого члена дегустационной комиссии по формуле:

k = 5,n00 ,

где:

n– количество миллилитров основного раствора в калибровочном растворе минимальной концентрации, в котором был почувствован горький вкус.

Лица, не почувствовавшие горечь в самом концентрированном растворе, должны быть исключены из состава комиссии.

Пробоподготовка

Если необходимо, измельчают образец в порошок. К 1,0 г образца добавляют 100,0 мл кипящей воды Р. Нагревают на водяной бане в течение 30 мин, постоянно взбалтывая. Дают остыть и доводят объём водой Р до 100,0 мл. Тщательно перемешивают и отфильтровывают, отбрасывая первые 2 мл фильтрата. Этот раствор обозначается как С-1 (К-1) и имеет фактор разбавления (DF, ФР) равный 100.

Если определяется горечь жидкости, 1 мл её разбавляют подходящим растворителем до 100 мл и полученный раствор обозначают как С-1 (К-1).

Начиная с раствора С-4, каждый член комиссии определяет раствор с минимальной концентрацией, который имеет горький вкус. Этот раствор обозначается D и имеет

Определяют объём (в миллилитрах) раствора D, который, будучи разбавленными до 10 мл водой Р, всё ещё имеют горький вкус (X).

Подсчитывают показатель горечи для каждого члена дегустационной комиссии по формуле:

Y × k .

X × 0,1

Показатель горечи образца считается как среднее арифметическое всех полученных результатов.