Gosudarstvennaya_farmakopeya_RB

Определяют по отдельности нейтрализующие титры против всех трех типов

полиовируса с использованием в качестве провокационных вирусов 100 CCID50 штаммов Sabin, в качестве индикаторных клеток – Vero или Hep2 в условиях

нейтрализации, состоящих в инкубации в течение трех часов при 35–370С и 18 часов при 2–80С. Для получения результатов производят фиксацию и окрашивание после

семидневной инкубации при 350С. Для признания определения достоверным необходимо показать, что титр провокационных вирусов находится в пределах от 10 до 1000 CCID50, а титр нейтрализующих антител в контрольной сыворотке должен

находиться в пределах двух двукратных разведений среднего геометрического титра

сыворотки. Активность вакцины вычисляют путем сопоставления количества респондеров на испытуемую вакцину и вакцину сравнения. Анализ выполняют с

использованием пробит-метода или, после проверки достоверности, метода параллельных линий. В случае пробит-метода для определения респондера

необходимо установить граничный титр нейтрализующих антител для каждого из типов полиовируса. В связи с изменчивостью результатов в разных лабораториях,

определить общепринятые граничные значения не представляется возможным. Вместо этого граничные значения определяют в каждой лаборатории, основываясь не менее, чем на трех результатах испытаний вакцины сравнения. За граничное значение принимают среднюю точку в шкале log2 минимального и максимального значений среднего геометрического титров, вычисленных для ряда из трех или

более испытаний. Для каждого из трех типов полиовируса активность вакцины не должна быть существенно ниже такой же активности препарата сравнения.

Результаты испытания являются достоверными, если:

-как для испытуемой вакцины, так и для препарата сравнения, ED50 заключена в интервале между наибольшей и наименьшей дозами препарата, введенными животным,

-при статистическом анализе не выявляется отклонений от линейности и параллельности,

-границы доверительного интервала относительной активности находятся между

25% и 400% от оцененного значения активности.

2.7.22. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФАКТОРА СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА XI

Активность фактора свертывания крови человека XI определяют путем сравнения количества испытуемого препарата, необходимого для уменьшения

времени свертывания испытуемой смеси, содержащей вещества, отличные от фактора XI, принимающие участие в процессе коагуляции крови, и количества

нормальной человеческой плазмы, которое требуется для получения такого же эффекта. 1 единица фактора XI равна активности 1 мл нормальной человеческой

плазмы.

Восстанавливают по отдельности испытуемый препарат и препарат сравнения

в соответствии с указаниями на этикетке и используют немедленно. В случае необходимости, определяют количество присутствующего гепарина (2.7.12) и

нейтрализуют гепарин добавлением протамина сульфата R (10 мкг протамина сульфата нейтрализуют 1 МЕ гепарина). Испытуемый препарат и препарат сравнения разбавляют количеством имидазольного буферного раствора рН 7,3 R,

содержащего 1% альбумина, достаточным для получения растворов с содержанием

от 0,5 до 2,0 единиц в миллилитре. Готовят двукратные разведения в диапазоне от

1:10 до 1:80 с использованием имидазольного буферного раствора рН 7,3 R.

Разведения производят с высокой точностью и используют немедленно.

В определении могут использоваться, например, инкубационные пробирки,

температура которых поддерживается с помощью водяной бани на уровне 370С. В каждую пробирку помещают по 0,1 мл субстрата плазмы R3 и по 0,1 мл одного из

разведений испытуемого препарата или препарата сравнения. К содержимому каждой пробирки добавляют по 0,1 мл подходящего разведения цефалина R или

заменителя тромбоцитов R и 0,1 мл суспензии 0,5 г легкого каолина R в 100 мл раствора натрия хлорида R концентрацией 3,7 г/л. Пробирки выдерживают около 10

минут, время от времени переворачивая. К содержимому каждой пробирки добавляют по 0,1 мл раствора хлорида кальция R концентрацией 7,4 г/л. С

использованием таймера измеряют время коагуляции, т.е. интервал времени между добавлением хлорида кальция и первыми признаками образования фибрина,

которые можно определять либо визуально, либо с применением соответствующей аппаратуры. Вычисляют активность с использованием обычных статистических

методов (например, 5.3. Статистический анализ результатов биологических испытаний и количественных определений).

Для подтверждения отсутствия в субстрате плазмы R3 существенного количества фактора XI выполняют контрольный опыт с использованием вместо

испытуемого препарата соответствующего объема имидазольного буферного

раствора рН 7,3 R. Результаты испытания считают достоверными, если время коагуляции в контрольном опыте составляет от 100 до 200 секунд.

# 2.7.23 ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ИНСУЛИНА

Активность испытуемого препарата инсулина определят путем сопоставления его гипогликемического (сахаропонижающего) действия с гипогликемическим действием стандартного образца инсулина.

Стандартный образец и единица действия инсулина.

Стандартный образец инсулина представляет собой препарат высокоочищенного

инсулина, активность которого определена путем многократного сопоставления с

активностью Международного Стандарта и составляет не менее 25 ЕД в 1 мг. За единицу действия (ЕД) принимают специфическую активность количества массы

стандартного образца, эквивалентного по биологическому действию 1

Международной Единице инсулина.

Примечание. Приготовление растворов стандартного образца и испытуемого

препарата инсулина. Точную навеску стандартного образца инсулина растворяют

в растворе хлористоводородной кислоты (0,003 моль/л) с рН 2,7 – 3,0, содержащем консервант в такой же концентрации, как испытуемый препарат.

Срок годности основного раствора стандартного образца инсулина 4 месяца при температуре 4 0С.

Перед опытом основной раствор стандартного образца инсулина разводят раствором хлористоводородной кислоты (0,003 моль/л) до концентрации 1 ЕД в 1

мл. Испытуемый препарат инсулина разводят этим же раствором

хлористоводородной кислоты до концентрации 1 ЕД в 1 мл, исходя из его предполагаемой активности.

Метод определения биологической активности.

Определение биологической активности инсулина проводят на здоровых

кроликах массой 2,5 – 3,5 кг. Животных массой 1,8 – 2,3 кг предварительно не менее 14 суток содержат в условиях вивария, где они получают овес, сено или свежую

траву, корнеплоды, комбинированный корм и воду. По истечении этого срока определяют чувствительность кроликов к инсулину. Для этого кроликам дважды с

интервалом 7 – 8 суток после 18 часов голодания вводят подкожно раствор стандартного образца инсулина из расчета 0,5 ЕД на 1 кг массы тела животного и определяют величину снижения концентрации сахара в крови в процентах. Кровь

для исследования берут из краевой вены уха животных до введения инсулина и

через 1,5 и 2,5 часа после его введения (для расчета берут среднюю концентрацию сахара в крови из двух определений после введения инсулина). Кровь берут в

условиях, не допускающих чрезмерного волнения кроликов. Из опытов исключают животных с исходной концентрацией сахара в крови ниже и выше пределов,

установленных для используемого метода определения содержания сахара в крови (ниже 75 мг % и выше 120 мг % для феррицианидного метода, ниже 52 мг % и выше

94 мг % для глюкозооксидазного метода), а также тех животных, которые реагируют

на введение инсулина судорогами или у которых снижение концентрации сахара в крови составляет менее 15 % по отношению к исходной концентрации. Определение биологической активности инсулина проводят не ранее чем через 7 – 8 суток после испытания на чувствительность.

Отобранных для опытов кроликов лишают корма (но не воды) на 18 часов, предшествующих введению инсулина. Животных распределяют на две группы

способом случайного выбора (в каждой группе должно быть не менее 9 кроликов).

Непосредственно перед введением инсулина кроликов взвешивают и определяют исходную концентрацию сахара в крови. Кроликам одной группы вводят подкожно по 0,5 ЕД стандартного образца инсулина (S) на 1 кг массы тела, кроликам другой группы – такую же дозу испытуемого препарата инсулина (Т). Через 1,5 и 2,5 часа

после введения инсулина у животных снова определяют концентрацию сахара в крови.

Для каждого кролика рассчитывают снижение концентрации сахара (X) в крови в

процентах по формуле:

X = a a− b ×100 ,

где а – исходная концентрация сахара в крови в миллиграмм-процентах;

b – средняя концентрация сахара в крови в миллиграмм-процентах из двух

определений, проведенных через 1,5 и 2,5 часа после введения инсулина.

Как и при испытании кроликов на чувствительность к инсулину, при расчетах

не учитывают животных с исходной концентрацией сахара в крови ниже и выше пределов, установленных для используемого метода, а также реагирующих на

указанную дозу инсулина судорогами или дающих снижение концентрации сахара в крови менее 15% по отношению к исходной концентрации.

Через 3 – 5 суток на этих же кроликах проводят повторное испытание с той

разницей, что животным из группы, получавшей стандартный образец инсулина (S), вводят испытуемый препарат инсулина (Т), а животным группы, получавшей (Т), вводят (S).

Рассчитывают среднюю величину снижения концентрации сахара в крови на стандартный образец (% S) и на испытуемый препарат (% Т) по данным всего опыта.

Отношение % Т / %S выражает относительную активность (R) испытуемого

препарата (Т). Для выражения активности испытуемого препарата (Т) в ЕД его предполагаемую активность (А) умножают на R: Т = R • А.

Пример: при определении биологической активности инсулина для инъекций с предполагаемой активностью 40 ЕД в 1 мл получили следующие величины снижения

концентрации сахара в крови в процентах (Y).

∑ YS = 869; % S = 869/18 = 48,28.

R = % T / % S = 45,83 / 48,28= 0,949.

∑ YT = 825; % T = 825 / 18 = 45,83.

Активность Т в ЕД, по данным этого опыта, равна:

Т = 0,949 • 40 = 37,96 ЕД в 1 мл.

Определение проводят не менее 2 раз с каждым испытуемым образцом (Т). Среднюю величину при этом получают, объединяя индивидуальные цифры снижения концентрации сахара в крови в процентах в обоих опытах. При расчете

окончательного результата должны быть использованы данные, полученные не менее чем на 30 кроликах. Если средняя величина R, по данным двух или большего

числа опытов, будет меньше 0,85 или больше 1,15, испытание проводят заново, исходя из новой величины предполагаемой активности испытуемого препарата.

Кролики могут быть использованы повторно для определения биологической активности не ранее чем через 2 недели после окончания предшествующего опыта.

Продолжительность использования кроликов в опытах по определению

биологической активности инсулина не должна превышать 5 месяцев.

ИСПЫТАНИЕ НА ПРОЛОНГИРОВАННОЕ (УДЛИНЕННОЕ) ДЕЙСТВИЕ

ПРЕПАРАТОВ ИНСУЛИНА

Испытание на пролонгированное действие препаратов инсулина основано на

сопоставлении длительности гипогликемического эффекта испытуемого препарата и стандартного образца инсулина.

18 здоровых кроликов массой 3 – 4 кг распределяют на две группы по 9 животных способом случайного выбора. Животных содержат в отдельных клетках, за

18 часов до введения инсулина лишают корма (но не воды). В начале опыта у

кроликов определяют исходное содержание сахара в крови и рассчитывают среднюю концентрацию сахара в крови для каждой группы. Животным первой группы вводят стандартный образец инсулина, а животным второй группы –

испытуемый препарат инсулина. Навеску стандартного образца инсулина растворяют в растворе хлористоводородной кислоты (0,003 моль/л) рН 2,7 – 3,0,

содержащем консервант в такой же концентрации, как и препарат. Доза испытуемого препарата и стандартного образца составляет 0,8 ЕД на 1 кг массы тела животного.

Испытуемый препарат вводят в неразведенном виде. Концентрация (количество ЕД в 1 мл) стандартного образца должна быть равна концентрации неразведенного

испытуемого препарата. Через 1,5; 3,0; 4,5 и 6,0 часов после введения препарата

инсулина и стандартного образца определяют концентрацию сахара в крови у кроликов и подсчитывают среднее содержание сахара для каждой группы.

Требования в отношении пролонгированного действия отдельных препаратов инсулина изложены в соответствующих частных статьях.

2.8. МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ИЗ НЕГО

Методы анализа лекарственного растительного сырья и лекарственных средств из него проводятся с целью установления подлинности и доброкачественности лекарственного растительного сырья.

Подлинность – это соответствие исследуемого сырья наименованию, под которым оно поступило для анализа. Устанавливается методами: макроскопическим, микроскопическим, качественным фитохимическим, хроматографическим, люминисцентным.

Доброкачественность–соответствие лекарственного растительного сырья требованиям нормативной документации. Определяется следующими видами анализа: товароведческим (определение подлинности, измельченности, содержания примесей, степени зараженности амбарными вредителями), количественным фитохимическим анализом (определение влаги, золы, действующих или экстрактивных веществ), определение микробиологический чистоты, содержания пестицидов, токсических веществ, радионуклидов, биологической стандартизацией (для сырья, содержащего сердечные гликозиды).

2.8.1. ЗОЛА, НЕРАСТВОРИМАЯ В ХЛОРИСТОВОДОРОДНОЙ КИСЛОТЕ

Зола нерастворимая в хлористоводородной кислоте – это остаток, полученный после отделения сульфатной или общей золы хлористоводородной кислотой, рассчитанный на 100 г лекарства.

В тигель, содержащий остаток после отделения общей или сульфатной золы,

добавляют 15 мл воды Р и 10 мл кислоты хлористоводородной Р, раствор покрывают часовым стеклом, аккуратно кипятят в течение 10 мин и охлаждают. Фильтруют через обеззоленный фильтр, промывают фильтр горячей водой Р до тех пор, пока фильтрат не станет нейтральным, затем фильтр сушат и сжигают при температуре слабого красного каления (около 500оС), после чего охлаждают в эксикаторе и взвешивают. Процесс сжигания необходимо повторять до тех пор, пока разница между двумя последовательными взвешиваниями будет не более 1 мг.

# Допускается проводить определение золы, нерастворимой в соляной кислоте по следующей методике:

Для получения общей золы берут навеску лекарственного растительного сырья массой около 5 г.

В тигель с общей золой приливают 15 мл кислоты хлористоводородой Р1; тигель покрывают часовым стеклом и нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 мин.

Затем тигель снимают и после остывания содержимое фильтруют через беззольный фильр. Тигель, часовое стекло и фильтр промывают дистиллированной водой до прекращения появления мути в промывных водах от капли 2 г/л раствора нитрата серебра Р. фильтр помещают в тот же тигель, высушивают, осторожно сжигают в тигле, после чего тигель прокаливают до тех пор, пока разница между двумя последовательными взвешиваниями будет не более 0,5 мг.

Прокаливание ведут в муфельной печи при слабом красном калении (при температуре 550-650 ºС) до полного сгорания, избегая сплавления золы и спекания её с тиглем.

Содержание золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте, рассчитывают в процентах на массу абсолютно сухого лекарственного средства (лекарственного растительного сырья).

(м1 - м2 ) ×100×100 , м× (100 -W )

где:

м– масса сырья, г;

W– потеря в массе при высушивании сырья, %.

#2.8.2. ДОПУСТИМЫЕ ПРИМЕСИ

Допустимые примеси – это примеси, включающие в себя:

1) Посторонние части данного растения, утратившие окраску, предусмотренную частной статьей или части данного растения, не являющиеся лекарственным растительным сырьем.

2)Органические примеси – неядовитые части других растений, солома, сено, вата и

т.п.

3)Минеральные примеси – земля, песок, камешки.

4)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ПРИМЕСЕЙ

Образец лекарственного растительного средства (лекарственного растительного сырья) массой 100-500 г (или минимальное количество, указанное в частной статье) рассыпают тонким слоем. Осматривают невооружённым глазом или с помощью лупы (5 - 10х). Каждую группу посторонних примесей отделяют, взвешивают и рассчитывают их процентное содержание:

превышать норм, указанных в частной статье. Если в частной статье не указано иное, то количество посторонних примесей в каждой группе не должно превышать 2%.

# 2.8.3. ТЕХНИКА МАКРОСКОПИЧЕСКОГО И МИКРОСКОПИЧЕСКОГО АНАЛИЗА

Макроскопический анализ сводится к изучению внешнего вида лекарственного растительного сырья, определению размеров отдельных частей, органолептических показателей (цвета, запаха, вкуса), морфологических диагностических признаков.

Размеры сырья определяются с помощью измерительной линейки: для крупных объектов ( более 3 см) – 3-5 измерений, для мелких-10-20 измерений. Мелкие семена и плоды измеряют на миллиметровой бумаге и рассчитывают среднее значение.

Определяют цвет сырья поверхности, в изломе или на разрезе при дневном освещении.

Запах определяют при растирании между пальцами, при изломе или растирании в ступке.

Вкус сырья определяют в последнюю очередь, когда выяснено, что оно не ядовито. Небольшие кусочки сырья жуют и, определив вкус, выплевывают. Для ядовитых объектов вкус не определяют.

Морфологические диагностические признаки определяют для всех видов сырья.

Высушенные и смятые части сырья предварительно размягчают во влажной камере или путем погружения на несколько минут в горячую воду, после чего раскладывают на стеклянной пластинке, тщательно расправляя. Рассматривают невооруженным глазом или с помощью лупы (10 х).

Листья (Folia) – лекарственное сырье, представляющее собой высушенные или свежие листья или отдельные листочки сложного листа. Диагностическими признаками являются: тип листьев (простые или сложные), форма и размеры листовой пластинки и черешка, характер края, жилкование, опушенность.

Цветки (Flores) – лекарственное сырье, представляющее собой высушенные отдельные цветки или соцветия, а также их части. Диагностическими признаками являются: тип соцветия, опушенность, форма и размеры цветка, строение околоцветника (число, форму и характер срастания чашелистиков и лепестков), число и строение тычинок и пестиков, характер завязи и цветоложа.

Травы (Herbae) – лекарственное сырье, представляющее собой высушенные или свежие надземные части травянистых растений (стебли с листьями и цветками, отчасти с бутонами и незрелыми плодами). Диагностические признаки для листьев и цветков указаны выше. Для стеблей: тип ветвления, форма поперечного сечения, размеры (длина и диаметр у основания), характер поверхности, опушенность, листорасположение.

Плоды (Fructus) – высушенные или свежие простые или сложные плоды (соплодия) и их части. Диагностическими признаками являются: консистенция околоплодника (перикарпия), характер поверхности, размеры (длина, толщина, поперечник плода), расположение остатков частей цветка и др.

Семена (Semina) - цельные семена или отдельные семядоли. Исследуются сухими. Диагностические признаки: форма, размеры (длина, толщина, поперечник), характер поверхности, цвет, запах, вкус, форма, размеры и расположение зародыша, наличие и форма рубчика или семяшва.

Кора (Cortices) – лекарственное сырье, представляющее собой наружную часть стволов, ветвей и корней деревьев и кустарников, расположенную к периферии от камбия. Диагностические признаки: размеры и форма кусков, особенности наружной и внутренней поверхности и излома.

Корни, корневища, луковицы, клубни, клубнелуковицы (Radices, Rhizomata, Bulbi, Tubera, Bulbotubera) – высушенные или свежие подземные органы многолетних растений, очищенные или отмытые от земли, освобожденные от остатков стеблей и листьев. Диагностические признаки: форма, особенности наружной поверхности и излома, размер, цвет поверхности и на свежем изломе, запах и вкус.

Сборы (Species) – смесь нескольких видов измельченного (реже цельного лекарственного растительного сырья, иногда с добавлением солей, эфирных масел Сырье, используемое для приготовления сборов, должно соответствовать требованиям нормативной документации на каждый вид сырья.

Сырье, входящее в состав сборов, измельчают по отдельности, перемешивают до получения равномерной смеси. Если в состав сбора входит соль, из неё готовя насыщенный раствор и опрыскивают им сбор при перемешивании, после чего высушивают при температуре не выше 60 0С. Сырье гигроскопичное и легко портящееся

от увлажнения следует прибавлять в сбор после опрыскивания других компонентов раствором соли и высушивания с последующим перемешиванием. Эфирное масло вносят в сбор в виде спиртового раствора (1:10) опрыскиванием при перемешивании.

Микроскопический анализ зависит от морфологической группы исследуемого объекта, а также от состояния сырья – цельного, измельчённого (дробленого, резаного) или порошкообразного.

Цельное сырье может быть обмолоченным. Его размер указываются в частных статьях.

Измельченность лекарственного растительного сырья определяется соответствующим размером отверстия сита, через которое полностью проходит измельченное лекарственное растительное сырьё.

По измельченности различают:

Резаное и дробленое Крупный порошок Среднекрупный порошок Среднемелкий порошок Мелкий порошок

Мельчайший порошок Для определения измельченности порошков проводят ситовой анализ с помощью сит с

размерами отверстий, указанными в таблице 2.8.3.-1.

Лекарственное растительное сырьё в количестве 25 – 100 г помещают на соответствующее сито, снабженное плотно пригнанным приемным лотком и крышкой, и просеивают, не допуская дополнительного измельчения. Просеивание измельчённых частиц считается законченным, если количество сырья, прошедшего сквозь сито при дополнительном просеве в течение 1 мин, составляет менее 1 %, оставшегося на сите.

Лекарственное растительное сырьё должно полностью проходить сквозь сито с указанным размером отверстий.

В случае необходимости в частных статьях указывают сито с размером отверстий соответствующим измельченности лекарственного растительного сырья.

Микроскопический анализ может проводиться одновременно с микрохимическим анализом.

ЛИСТЬЯ, ТРАВЫ, ЦВЕТКИ

Цельное и резаное сырье. При исследовании цельного сырья берут кусочки пластинки листа с краем и жилкой; у трав берут лист, иногда также кусочек стебля и цветок, у цветков – чашечку и венчик. При исследовании резаного сырья берут по нескольку различных кусочков.

Просветление можно проводить двумя способами.

I.Несколько кусочков сырья помещают в колбу или пробирку, прибавляют раствор 25 г/л натрия гидроксида Р и кипятят в течение 1 – 2 мин. Затем содержимое выливают

вчашку Петри (или фарфоровую), жидкость сливают и сырье тщательно промывают водой Р. Из воды кусочки сырья вынимают скальпелем или лопаточкой и помещают на предметное стекло в каплю раствора хлоралгидрата Р1 или глицерина Р.

II.Кусочки кипятят в растворе хлоралгидрата Р1, разведенного водой Р (1:1), в

течение 5 – 10 мин (до просветления). Просветленный кусочек сырья помещают на предметное стекло в каплю раствора хлоралгидрата Р1 или глицерина Р, разделяют скальпелем или препаровальной иглой на две части, одну из них осторожно переворачивают. Объект накрывают покровным стеклом, слегка подогревают до

удаления пузырьков воздуха и после охлаждения рассматривают лист с обеих сторон под микроскопом сначала при малом, затем при большом увеличении. При

приготовлении микропрепаратов из толстых листьев их предварительно раздавливают скальпелем.

Для исследования стеблей их отрезки кипятят в растворе 50 г/л натрия гидроксида Р, тщательно промывают водой Р, снимают эпидермис скальпелем или препаровальными иглами и рассматривают его с поверхности; из остальных тканей готовят препарат, раздавливая объект скальпелем на предметном стекле в растворе хлоралгидрата Р1 или глицерина Р.

При необходимости приготовления поперечных срезов листьев и стеблей их кипятят в растворе хлоралгидрата Р1 в течение 10 мин и делают срезы, зажимая кусочки листа в пробку или сердцевину бузины. Готовые срезы помещают в воду Р и далее используют для приготовления микропрепаратов, рассматривая их в растворе хлоралгидрата Р1.

Порошок. На предметное стекло наносят 1 – 2 капли раствора хлоралгидрата Р1 и небольшое количество исследуемого порошка. Порошок берут кончиком препаровальной иглы, смоченной раствором хлоралгидрата Р1, тщательно размешивают, закрывают покровным стеклом и нагревают до удаления пузырьков воздуха. Затем стекло слегка придавливают ручкой препаровальной иглы, выступившую по краям жидкость удаляют полоской фильтровальной бумаги. Порошки кожистых листьев просветляют кипячением в растворе 50 г/л натрия гидроксида Р.

Диагностическими признаками являются: форма и размеры клеток эпидермы, тип устьиц, наличие и строение трихом, вместилищ, эфиро-масличных железок, кристаллических включений, механической и проводящей тканей, млечников, секреторных каналов.

ПЛОДЫ, СЕМЕНА

Цельное сырье. Готовят препараты кожуры семени и околоплодника с поверхности или поперечные срезы.

П р е п а р а т ы п о в е р х н о с т и к о ж у р ы и о к о л о п л о д н и к а . 2 – 3 семени или плода кипятят в пробирке в растворе 50 г/л натрия гидроксида Р в течение 2 – 3 мин и тщательно промывают водой Р. Объект помещают на предметное стекло,

препаровальными иглами отделяют кожуру семени или ткани околоплодника и рассматривают их в растворе хлоралгидрата Р1 или глицерина Р.

С р е з ы . Для приготовления срезов сухие плоды и семена предварительно размягчают, поместив их на сутки во влажную камеру (влажной камерой служит эксикатор с водой, в которую добавлено несколько капель хлороформа) или водяным паром в течение 15 – 30 мин или более в зависимости от твердости объекта.

Мелкие плоды и семена запаивают в парафиновый блок размером 0,5х0,5х1,5 см.

Кончиком нагретой препаровальной иглы расплавляют парафин и в образовавшуюся ямку быстро погружают объект. Поверхность объекта должна быть сухой. Срезы объекта делают вместе с парафином; срезы выбирают из парафина препаровальной иглой, смоченной жидкостью, и готовят микропрепараты в растворе глицерина Р или

хлоралгидрата Р1.

Диагностические признаки: форма и строение клеток экзокарпия (эпидермиса) , наличие и строении трихом, расположение и форма механических элементов в мезокарпии, число и расположение эфиро-масличных каналов, проводящих пучков, наличие кристаллических включений.

Порошок. Готовят несколько микропрепаратов для выявления диагностических элементов кожуры семени и околоплодника и содержимого эндосперма или зародыша. Препарат готовят так же, как указано в разделе «Листья, травы, цветки». В качестве просветляющей жидкости используют раствор хлоралгидрата Р1 или раствор 500 г/л

натрия гидроксида Р.

К р а х м а л . Готовят два препарата – в растворе Люголя Р и в воде Р; от йода крахмальные зерна окрашиваются в синий цвет. В воде определяют их форму, строение, размеры крахмальных зерен измеряют окулярным микрометром.

Ж и р н о е и э ф и р н о е м а с л о . Для обнаружения жирного и эфирного масла готовят препарат в растворе судана III Р и подогревают; капли жирного или эфирного масла окрашиваются в оранжево-розовый цвет.

С л и з ь . Для обнаружения слизи готовят препарат порошка в растворе черной туши Р и тотчас рассматривают под микроскопом (малое увеличение); слизь заметна в виде бесцветных масс на черном фоне.

При исследовании строения клеток кожуры и околоплодника в порошке из плодов и семян, содержащих крахмал или незначительное количество жирного масла, препарат готовят в растворе хлоралгидрата Р1 при легком подогревании. При необходимости порошок обезжиривают и просветляют.

Для обезжиривания порошок сырья помещают в пробирку с притертой пробкой и заливают 2 – 3 раза смесью спирта Р с эфиром Р (1:3) и после настаивания каждый раз в течение 20 мин растворитель сливают. Вместо смеси спирта с эфиром для обезжиривания можно использовать ксилол Р или эфир Р.