Газожидкостная хроматография (гжх)

Теоретические основы метода и его возможности были рассмотрены ранее в лекции «Группа «летучих» ядов». ГЖХ нашла применение в анализе лекарственных веществ в качестве скринингового метода благодаря своей универсальности.

Необходимым условием является переведение исследуемого вещества в летучее состояние. Метод используется в анализе барбитуратов, алкалоидов и других лекарственных веществ в качестве общего и частного скрининга

Идентификация веществ проводится по относительным временам удерживания (или по индексам удерживания Ковача). Количественное определение - по высоте или площади пика с использованием метода внутреннего стандарта.

Достоверность определения повышается за счет хроматографирования на колонках, обладающих различной полярностью. Комитет по судебной токсикологии предлагает использовать колонки с неподвижными жидкими фазами - SE - 30 и OV 17 и 225. Детектор - пламенно-ионизационный.

Подтверждающие исследования лучше проводить методами, отличающимися от скринингового, с равной или большей чувствительностью: тонкослойной хроматографии, масс-спектрометрии.

Высокоэффективная жидкостная хроматография (вэжх)

ВЭЖХ, или жидкостная хроматография высокого давления, является вариантом колоночной жидкостной хроматографии, где элюент подается на колонку под большим давлением, что ускоряет проведение анализа. Разделение веществ проводится на колонках, заполненных мелкодисперсным сорбентом (силикагель, окись алюминия) или полимерным сорбентом.

При работе с колонками, заполненными силикагелем, в качестве элюента используются углеводороды, иногда с добавлением небольшого количества спирта или других растворителей (нормальнофазный вариант).

В обращеннофазном варианте к силикагелю прививают гидрофобную фазу - обычно это углеводороды с большим числом углеродных атомов, например, С₁₈ (торговые названия сорбента - Сепарон С_18, Силасорб С₁₈). В этом случае в качестве элюента используют смеси метанола или ацетонитрила с водой или буферными растворами.

В качестве детекторов обычно применяют спектрофотометрический детектор с переменной (от 190 до 900 нм) или с фиксированной (чаще 254 нм) длиной волны. Могут быть использованы и другие детекторы - рефрактометрический, флуорометрический, ионизационно-пламенный, масс-спектрометрический, электрохимический и т.д.

Выходящие из колонки вещества регистрируются на хроматограмме в виде ряда хроматографических пиков. Идентификацию веществ проводят по параметрам удерживания и спектрам (при детекторе с переменной длиной волны). Количественное определение - по площади пика, которая пропорциональна количеству вещества в пробе. При этом предварительно строится калибровочный график с использованием методов абсолютной калибровки или внутреннего стандарта.

Метод ВЭЖХ может быть использован в качестве общего и частного скрининга. Он позволяет сочетать изолирование и очистку вещества с его идентификацией и количественным определением.

Значительным преимуществом этого метода перед ГЖХ является возможность анализа термолабильных нелетучих соединений как с малой, так и с большой молекулярной массой. Особенно удобен метод ВЭЖХ для работы в клинических лабораториях токсикологических центров при исследовании биологических жидкостей.