100 г

органа

C₂H₅OH + H₂C₂O₄

pH 2-3, 3 раза

по 24 часа

спиртовые извлечения

(соли алкалоидов, молекулярные формы кислот)

>t

40-50° C

густой остаток

C₂H₅OH абс.

осаждение белков

фильтрат

>t

40-50° C

густой остаток

H₂O горячая

жиры,смолы,

пигменты,

фильтрат

pH~3

NH₄OH

водная фаза

pH 9-10

CHCl₃

3 раза

Выход 20-30%

CHCl₃

3 Раза

pH 2

хлороформный экстракт, фракция А

(молекулярные формы кислот,

нейтральные и слабоосновные вещества)

хлороформный экстракт, фракция Б

(Основания алкалоидов)

Достоинства метода заключаются в следующем:

1. Метод универсален, т.к. этанол является хорошим растворителем для многих веществ этой группы (как ионизированных, так и молекулярных форм).

2. Метод предусматривает очистку извлечения от балластных веществ, в результате чего получаются чистые хлороформные извлечения, не дающие эмульсий при экстрагировании веществ из водной фазы хлороформом. Метод дает возможность изолировать до 30% барбитуратов и 20-25% алкалоидов.

К недостаткам метода следует отнести:

1. Длительность(8-10 рабочих дней) и многостадийность.

Большое количеств операций, связанных с осаждением белков и фильтрованием, ведет к значительным потерям искомых веществ (алкалоиды теряются на 25-50%).

2. Сравнительная дороговизна метода ( на 1 исследование тратится до 500 мл этанола).

Все это приводит к тому, что классический метод Стаса-Отто теряет свое былое значение и постепенно заменяется более быстрыми, эффективными и экономными методами извлечения подкисленной водой.

В настоящее время метод применяется, главным образом, для исследования гнилостно измененного биологического материала.

Изолирование водой, подкисленной щавелевой кислотой (метод Васильевой)

Идея изолирования подкисленной водой высказывалась разными исследователями. Так, еще в 1856 году С.Макадам предложил для подкисления воды использовать щавелевую кислоту, в 1861 г. Усляр и Эрдман -соляную, а в 1865 г. Г.Драгендорф - серную. Вплоть до 1941 г. водный метод не получал широкого распространения. В 1942-43 гг. Степановым А.В. и Швайковой М.Д. был предложен метод изолирования алкалоидов из объектов растительного происхождения водой, подкисленной щавелевой кислотой (ускоренный метод). В 1947-49 гг. этот метод был применен А.А.Васильевой к трупному материалу, после чего он вошел в практику судебно-химического анализа в отечественных лабораториях.

Схема изолирования по методу Васильевой заключается в следующем:

• Настаивание измельченного объекта с водой, подкисленной щавелевой кислотой до рН2-3, в течение двух часов. Вода берется в количестве 1:2 по отношению к навеске объекта. Водное извлечение фильтруется.

• Экстрагирование веществ кислого, нейтрального и слабоосновного характера из водного фильтрата хлороформом при рН=2 (трехкратная экстракция), отделение органической фазы и концентрирование полученного извлечения упариванием ( фракция А, «кислое» извлечение).

• Подщелачивание оставшегося после разделения фаз водного слоя раствором аммиака до рН 9-10, экстрагирование веществ основного характера трехкратной экстракцией хлороформом, отделение органической фазы и концентрирование упариванием (фракция Б, «щелочное» извлечение).