Относительное время удерживания является величиной более постоянной, так как на него меньше влияют условия проведения хроматографического процесса.

2. Удерживаемый объем также является качественной характеристикой анализируемого вещества.

Удерживаемый объем V – это объем газа-носителя, необходимый для вымывания всего количества вещества из колонки, который численно равен произведению скорости газа – носителя U на время удерживания t:

V = U · t

Скорость газа измеряется в мл/мин, время удерживания – в минутах.

В зависимости от того, какое используется для расчета время удерживания – абсолютное или исправленное - получаем абсолютный или исправленный (приведенный) удерживаемый объем.

Удерживаемый объем, как абсолютный, так и исправленный, может меняться с изменением хроматографических условий, поэтому более постоянным является относительный удерживаемый объем, который рассчитывается как отношение абсолютного (или исправленного) объема к удерживаемому объему вещества-стандарта: V_отн.= V _{абс.(испр.)} / V_ст.

Качественный анализ проводят, сравнивая время удерживания искомых веществ с временами удерживания стандартных веществ (эталонов). При совпадении этих параметров делают вывод о возможной идентичности этих веществ. Хроматографирование ведут в одинаковых условиях для стандарта и искомого вещества, используя 2-3 колонки различной полярности, что повышает надежность метода. Можно добавить предполагаемое (искомое) вещество в анализируемую смесь, и если при этом произойдет увеличение высоты и площади пика на хроматограмме (но не изменение времени удерживания), то можно предположить их идентичность.

Количественное определение разделенных компонентов смеси проводится по высоте или площади хроматографических пиков. Высоту используют в случае узких и симметричных пиков, а площадь – когда пик широкий и асимметричный. Расчет ведут по калибровочному графику зависимости концентрации от высоты или площади пиков.

Возможны два варианта количественного определения: метод абсолютной калибровки и метод с использованием внутреннего стандарта.

Более стабильные результаты дает метод внутреннего стандарта. При этом наряду с исследуемым веществом вводится вещество-стандарт в известном количестве, а при расчете учитывается соотношение высот (или площадей) соответствующих им пиков. Несмотря на колебания в работе прибора, соотношение высот пиков исследуемого вещества и внутреннего стандарта остается постоянным, что позволяет получать стабильные результаты.

К внутреннему стандарту предъявляется ряд требований:

• Вещество-стандарт не должно входить в состав исследуемой смеси.

• Внутренний стандарт по химическому строению должен быть близок к анализируемому веществу.

• Пик внутреннего стандарта должен хорошо отделяться от пика определяемого вещества, но находиться рядом с ним (иметь близкое время удерживания).

• Внутренний стандарт должен быть стабилен в условиях опыта.

Расчет концентрации вещества проводят по калибровочной кривой, откладывая на оси абсцисс концентрацию, а по оси ординат – отношение высот (или площадей) пиков исследуемого вещества и внутреннего стандарта.

Можно использовать метод расчета по котангенсу угла наклона калибровочной кривой, который рассчитывается заранее по растворам веществ с известной концентрацией.

ctg α = C_і / h_і/h_вн.ст., отсюда С_і = h_і /h_{вн.ст. ·} ctg α

Метод позволяет производить расчет по рассчитанному значению котангенса без построения калибровочного графика, и дает более точное определение.