- •Занятие № 1 Бактериологическая лаборатория и оборудование рабочего места. Техника безопасности при работе в лаборатории. Устройство современных микроскопов. Морфология бактерий и методы ее изучения.
- •Электронная микроскопия.
- •Список литературы:
- •Занятие № 2 Морфология бактерий. Тинкториальные свойства бактерий. Окраска по методу Грама.
- •Методические указания:
- •Список литературы:
- •Информационный материал.
- •Список литературы:
- •Занятие № 4 Физиология микроорганизмов.Бактериологический метод диагностики.Питание бактерий. Питательные среды. Методы выделения чистых культур микроорганизмов.
- •Информационный материал.
- •Список литературы:
- •Занятие № 5 Физиология микроорганизмов. Биохимические свойства микроорганизмов.
- •Методические указания:
- •Список литературы:
- •Занятие № 6 Физиология микроорганизмов. Дыхание микроорганизмов. Анаэробы. Методы культивирования. Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы. Дезинфекция. Стерилизация.
- •Методические указания:
- •Список литературы:
- •Занятие № 7 Антагонизм микробов и антибиотики.
- •Информационный материал
- •Список литературы:
- •Занятие №8 Бактериофагия.
- •2. Работа с развивающимися куриными эмбрионами
- •3. Работа с культурами клеток
- •1.Классификация бактериофагов по морфологическому строению:
- •2.Классификация бактериофагов по характеру взаимодействия с микробной клеткой.
- •Список литературы:
- •Занятие № 9 Генетика микроорганизмов.
- •Информационный материал.
- •Список литературы:
- •Занятие № 10. Контрольное занятие по теме «Морфология и физиология микроорганизмов».
- •Список литературы:
Информационный материал
В природных условиях различные виды микроорганизмов живут в ассоциациях, оказывая взаимное влияние друг на друга, зависящее свойств микробов и от окружающих условий. Одной из форм взаимодействия микробов является антагонизм.
Антагонизм - взаимоотношения между микроорганизмами, которые проявляются в бактериостатическом или бактериоцидном действии друг на друга (задержка развития и гибели микроорганизмов, на которых микроб-антагонист оказывает свое действие)
Явление антагонизма в мире микробов известно давно (Мечников); антагонизм наблюдается среди многочисленных групп микробов и в настоящее время широко используется в медицинской практике в виде применения антибиотиков для лечения и профилактики инфекционных болезней. Антагонисты обнаруживаются в почве, воздухе, воде. При посеве исследуемого материала или смесей микробов присутствие микробов-антагонистов обнаруживается по светлым зонам, окружающим их колонии; эти зоны свидетельствуют о подавлении роста угнетаемого микроба, причем величина зоны угнетения определяет ту или иную степень активности антагониста.
1. Чашку с мясо-пептонным агаром равномерно засевают шпателем суточной бульонной культурой угнетаемого микроба (например, стафилококка). Затем из чашки с агаром, предварительно засеянной антагонистом (например, актиномицетом), вырезают вместе с агаром колонию антагониста и накладывают на первую засеянную чашку (колонией кверху). Эту чашку ставят в термостат при 37°. Результат учитывают через сутки — образуется стерильная зона.
2. На чашку с мясо-пептонным агаром посредине широкой полосой засевают суточную бульонную культуру антагониста (например, В. coli M-17). Через сутки перпендикулярно к посеву вплотную подсевают суточную бульонную культуру угнетаемого микроба (стафилококк, шигелла). Результат учитывают через сутки пребывания в термостате — рост угнетаемого микроба отступает от полосы, засеянной антагонистом.
Антибиотики – специфические продукты жизнедеятельности микроорганизмов, обладающие активностью по отношению к определенным организмам – бактериям, грибам, актиномицетам. Антибиотики задерживают либо подавляют их рост.
Существует несколько классификаций, основанных на разных признаках и свойствах антибиотических препаратов.
Основные классификации следующие:
По происхождению; по химической структуре; по механизму действия; по спектру действия; по конечному эффекту.
Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам определяют различными методами. Наиболее распространены следующие.
Метод серийных разведений.
Готовят основной раствор препарата, содержащий определенное количество единиц. Затем в ряд пробирок наливают 1 мл. МПБ. В первую пробирку последовательно переносят по1 мл. основного раствора препарата, затем во 2-ю, 3-ю и т.д.при этом каждое следующее разведение содержит вдвое меньше антибиотика, чем в предыдущем разведении. Затем в каждую пробирку вносят одинаковое количество испытуемой культуры. Контролем являются 2 пробирки. В одной из них МПБ и микроорганизм, в другой МПБ и антибиотик. Посевы инкубируют 18-24 ч. в термостате. Минимальная концентрация антибиотика, при которой не проявляется размножение бактерий, называется бактериостатической дозой.
Метод дисков.
На поверхность питательной среды (АГВ) в чашки Петри засевают «газоном» исследуемую культуру микроорганизмов. Посев проводят, затем на поверхность посева на расстоянии друг от друга накладывают бумажные диски одинакового диаметра, пропитанные различными антибиотиками. Посевы выдерживают в термостате в течение суток. Вокруг дисков образуется зоны задержки роста. Ее измеряют и делают вывод об антиботической активности препарата. Если диаметр зоны задержки роста до11мм, микроорганизм устойчив к действию данного антибиотика, если составляет от 11 до 15 мм, микроорганизм считается умеренно устойчивым, от 15 до 25мм – чувствителен, и свыше 25 – высоко чувствителен.
Методические указания:
Таблица:Принципы классификации микроорганизмов.
Классификация |
Примеры |
|
По химическому строению |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
По происхождению |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
По способу получения |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
По группам чувствительных микроорганизмов |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
По конечному эффекту |
||
|
|
|
|
|
|
По спектру действия |
||
|
|
|
|
|
|
По механизму действия |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Методика посева методом бактериального «газона»:
1.Приготовить 2 мл. взвеси исследуемой культуры.
2. Вылить 1 мл. взвеси на поверхность питательной среды при помощи пипетки.
3. «Прокачать» чашку Петри для равномерного распределения материала по поверхности среды.
4. Убрать избыток жидкости с поверхности среды при помощи пипетки.
5. Пипетку с оставшейся взвесью поместить в дезраствор.
Оценка действия на бактерии антимикробных препаратов методом дисков.
1.Исследуемую культуру засевают газоном на чашку Петри с плотной питательной средой (чаще всего на МПА).
2.На засеянную поверхность среды сразу же раскладывают (не более 6 на чашку) стандартные бумажные диски, содержащие антибиотики (30 мкг). Каждый диск маркирован тремя буквами от названия соответствующего антибиотика.
3.Засеянные чашки помещают в термостат.
4.Через 24 часа учитывают результат, измеряя диаметр зоны задержки роста. Чувствительность культуры к антибиотику определяют по таблице, но ориентировочно можно считать: до 12 мм - устойчив, до 20 – умеренно устойчив, более 20 - чувствителен.
Контрольные вопросы:
1.Что такое антибиотики? Какова история их открытия?
2. На чем основан механизм действия пенициллинов?
3. Дайте характеристику диффузионному методу постановки теста на антибиотикорезистентность. Назовите его достоинства и недостатки.
4. Каковы требования к антимикробным препаратам?
5. Какие осложнения могут вызывать антибиотики?