3. Принципы и методы санитарной микробиологии. Этапы и варианты бактериологического метода количественного определения микроорганизмов в объектах внешней среды.

Принципы санитарно-микробиологических исследований

• На результаты анализов могут существенно повлиять различные факторы.

Поэтому при проведении санитарно-микробиологических исследований следует помнить о следующих основных принципах.

1. Правильный забор проб.

• Его проводят с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта.

• Забор проб проводят с соблюдением правил стерильности; при транспортировке следует создать оптимальные условия, позволяющие избежать искажения результатов.

• Исследования необходимо проводить быстро; при невозможности немедленного проведения анализа материал сохраняют в холодильнике не дольше 6-8 ч.

2. Серийность проводимых анализов.

• Большинство исследуемых объектов содержит самые разнообразные микроорганизмы, распределённые крайне неравномерно и пребывающие в антагонистических взаимоотношениях. Соответственно для получения адекватных результатов проводят забор серии проб из разных участков объекта. В лаборатории образцы, смешивают, затем точно отмеряют необходимое количество материала (обычно среднее по отношению к исследуемому материалу в целом).

3. Повторность отбора проб.

• Как правило, в исследуемых объектах состав микрофлоры меняется достаточно быстро и патогенные микроорганизмы распределяются в них неравномерно.

• Повторный отбор проб позволяет получить более адекватную информацию по контаминации объектов.

4.Применение только стандартных и унифицированных методов исследования.

• Использование подходов, утверждённых ГОСТ и инструкциями

• Это даёт возможность получать сравнимые результаты в различных лабораториях.

5. Использование комплекса тестов.

• Получение более адекватной информации возможно при привлечении прямых (выявляющих возбудителей) и косвенных (указывающих на загрязнение объектов окружающей среды выделениями человека и животных и его степени) методов.

6. Проведение оценки объектов по совокупности полученных результатов.

• Интерпретацию результатов санитарно-микробиологических исследований следует проводить с учётом других гигиенических показателей (органолептических, химических, физических и т.д.).

Методы санитарной микробиологии:

1. Микроскопический

2. Культуральный (основной)

Этапы и варианты бактериологического метода:

Этапы бактериологического метода:

1.Забор образца для исследования

2.Подготовка образца (гомогенизация, десорбция)

3.Приготовление разведений исследуемого образца

4.Выращивание микроорганизмов на питательных средах после посева приготовленных разведений

5.Идентификация выделенных микроорганизмов и их количественный учет

6.Заключение

4. Методы культивирования микроорганизмов (глубинный метод посева в плотные среды, поверхностный метод посева на плотные среды метод мембранных фильтров, метод посева на жидкие среды)

Глубинный метод посева в плотные среды. Жидкий продукт или разведение навески вносят параллельно в две чашки Петри и заливают не позднее чем через 15 мин расплавленной и охлажденной до температуры 45±0,5ºС питательной средой. Высота слоя питательной среды должна быть 4—5 мм.

Среду немедленно равномерно перемешивают с посевным материалом круговыми движениями чашки так, чтобы среда не вытекла из чашки и не загрязнила крышку. После застывания среды чашки с посевами вверх дном помещают в термостат.

Поверхностный метод посева на плотные среды. Среду наливают в чашку Петри и после застывания подсушивают. Для удаления влаги с поверхности среды чашки открывают, переворачивают вверх дном и выдерживают в течение 30 мин при 48-50ºС.

На подсушенную среду наносят жидкий продукт или разведение навески и равномерно растирают по поверхности шпателем — изогнутой стеклянной палочкой.

Засеянную поверхность подсушивают, выдерживая чашки в горизонтальном положении в течение 15 мин.

Метод посева в жидкие среды. В колбу или пробирки с питательной средой вносят навеску продукта или разведения навески. При определении количества микроорганизмов питательные среды засевают продуктом и(или) разведениями навесок так, чтобы последовательно выдерживалась заданная кратность количества посевного материала.

Метод мембранных фильтров. Мембранные фильтры применяют для анализа легко фильтруемых жидких продуктов или продуктов, дающих растворы с высоким осмотическим давлением. При фильтрации раствора с высоким осмотическим давлением раствор предварительно разводят дистиллированной или пептонной водой в соотношении, позволяющем легко профильтровать разведенные растворы.

Жидкий продукт, содержащий небольшое число взвешенных частиц, фильтруют в два этапа. Для освобождения от частиц его фильтруют через фильтр со средним диаметром пор 4 мкм, а затем — через фильтр, диаметр и размеры пор которого выбраны в соответствии с группой или видом выявляемых микроорганизмов. Оба фильтра культивируют в аналогичных условиях.

После осаждения микроорганизмов на фильтре из растворов с высоким осмотическим давлением или из растворов, содержащих антимикробные вещества, его промывают дистиллированной водой или пептонно-солевым раствором.

Фильтрацию заканчивают в момент исчезновения влаги на поверхности фильтра. Немедленно после окончания фильтрации фильтр переносят на плотные или в жидкие питательные среды. На плотную среду фильтр накладывают нижней стороной так, чтобы она полностью соприкасалась с поверхностью среды. Посевы термостатируют в условиях, благоприятных для роста определяемых микроорганизмов.