- •1. Общая микробиология
- •1.1 Микроскопический (бактериоскопический) метод исследования
- •1.2. Противомикробные мероприятия
- •1.3.Классификация питательных сред
- •1.4.Культуральный метод исследования
- •1.5. Методы выделения чистых культур микроорганизмов
- •1. Метод механического разобщения микроорганизмов:
- •2. Метод заражения чувствительных лабораторных животных (биологический):
- •3. Методы, основанные на избирательной чувствительности микроорганизмов к воздействию внешних факторов:
- •1.6. Определение биохимических свойств микробов
- •1.11. Биологический (экспериментальный) метод исследования
- •1.12. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
- •1.13. Методы генетического анализа микроорганизмов
- •1.14. Методы изучения нормальной микрофлоры
- •2. Частная микробиология
- •2.1. Микробиологическая диагностика пневмококковых инфекций
- •II. Культуральный (бактериологический) метод:
- •2.2. Общие принципы диагностики острых кишечных
- •2.3 Диагностика кишечных эшерихиозов (колиэнтеритов)
- •2.4. Диагностика брюшного тифа, паратифов а и в, сальмонеллезов
- •2.5. Лабораторная диагностика кишечного иерсиниоза
- •2.6. Клебсиеллы. Лабораторная диагоностика склеромы и озены
- •2.7. Лабораторная диагностика холеры
- •2.8. Кампилобактерии. Методы диагностики кампилобактериоза
- •2.9. Диагностика пищевых отравлений бактериальной природы
- •2.10. Лабораторная диагностика газовой гангрены
- •2.11. Лабораторная диагностика столбняка
- •2.12. Лабораторная диагностика ботулизма
- •2.13. Серологическая диагностика сифилиса
- •2.14. Лабораторная диагностика хламидиозов
- •2.15. Микоплазмы, микоплазмозы
- •3. Общая и частная вирусология
- •3.1. Методы культивирования вирусов
- •I. Культуры клеток
- •3.2. Принципы диагностики вирусных инфекций
- •3.3. Лабораторная диагностика вирусных гепатитов
- •3.4. Лабораторная диагностика спиДа
- •4. Другие инфекции
- •4.1. Классификация грибов. Методы диагностики микозов
- •Методы диагностики микозов
- •Лабораторная диагностика кандидомикоза
- •Лабораторная диагностика глубоких микозов,
- •4.2. Возбудители мадуромикоза
- •4.3. Возбудитель пневмоцистоза
- •4.4. Возбудитель донованоза
- •4.5. Возбудитель язвы Бурули
- •4.6. Возбудитель мелиоидоза
- •Лабораторная диагностика
2.14. Лабораторная диагностика хламидиозов
Хламидиозы - разнообразные по патогенезу и клиническим проявлениям распространенные заболевания человека и животных. Хламидии - грамотрицательные бактерии с облигатным внутриклеточным паразитизмом. Биологическое своеобразие хламидий, выражающееся в энергозависимом паразитизме и уникальном цикле развития, определяет самостоятельное положение этих микроорганизмов в системе прокариотов. Хламидии выделены в отдельный порядок Chlamydiales, включающий одно семейство Chlamydiaceae, содержащее один род Chlamydia, состоящий из 3 видов: C.trachomatis, C.psittaci, С. pneumoniae.
Хламидии имеют две стадии жизненного цикла: одна - инфекционная стадия элементарного тельца (ЭТ), она приспособлена к внеклеточному существованию; другая - ретикулярное тельце (РТ) - внутриклеточная практически неинфекционная стадия, лабильна, обладает выраженной метаболической активностью. ЭТ имеют размеры 0,3 мкм, содержат нуклеоид, в клеточной стенке имеется длой - аналог пептидогликана грам-бактерий. Форма проникает в клетку при фагоцитозе. Из поверхностных мембран клетки хозяина вокруг ЭТ образуется вакуоль и ЭТ превращается в крупное ретикулярное тельце (РТ) - диаметр 0,5-1 мкм. Внутри образованной вакуоли РТ многократно делится. В конечном счете, вакуоль через 8-12 циклов деления заполняется этими частицами и превращается во включение (микроколонию). На последней генерации РТ образуются ЭТ нового поколения. Затем мембрана, ограничивающая микроколонию, повреждается и хламидий выходят в цитоплазму и далее за пределы клетки. Помимо ЭТ и РТ имеются промежуточные или переходные формы хламидий, которые образуются на двух стадиях цикла развития, на ранней при преобразовании ЭТ в РТ и на поздней - РТ в ЭТ, а также аномальные формы.
Хламидии чувствительны к антибиотикам тетрациклинового ряда,
макролидам (эритромицин, рифампицин).
Хламидии имеют сложную антигенную структуру. Выделяют три основных антигенных комплекса. Родоспецифический термостабильный, липополисахаридный комплекс, характерный для представителей рода, видоспецифические и типоспецифические термолабильные белковые фракции. Видоспецифический антиген определяет принадлежность штаммов к соответствующему виду. Типоспецифические антигены позволяют дифференцировать различные серовары (серотипы) хламидии внутри вида.
Вид C.psittacci Объединяет возбудителей болезней птиц: орнитоз и пситаккоз (инфицировано до 140 видов птиц) и некоторых млекопитающих
(экзогенные аборты, пневмонии и др.). Возбудитель передается человеку
от птиц и животных, вызывает разнообразную форму патологии (поражения
легких, заболевания нервной системы, гепатолиенальный синдром). Среди
генерализованных форм летальность достигает 20%.
Вид C.trachomatis. Имеет наибольшую социально-медицинскую значимость.
Он весьма неоднороден и представлен 15 серотипами, относящимися к 3
биоварам. Вызывает антропонозные хламидиозы.
Биовар1 - возбудитель трахомы, известной с древности. Это хронический
кератоконьюнктивит, протекающий с воспалением коньюнктивы и роговицы,
образованием рубцов и слепотой. До настоящего времени в ряде стран
трахома интенсивно распространена. На территории бывшего СССР
ликвидирована в 60-е годы. В мире поражено трахомой 400 млн человек.
Биовар 2 - возбудитель венерической лимфогранулемы. Заболевание
передается половым путем. Развивается гнойный паховый лимфаденит.
Активно циркулирует в Юго-Восточной Азии. Выделяется и у нас (завозные
случаи).
Биовар 3 - возбудитель урогенитальных и экстрагенитальных хламидиозов:
пневмоний новорожденных и младенцев, коньюнктивитов у новорожденных,
коньюнктивитов у взрослых (так называемых "бассейновых").
Проблема заболеваний мочеполовых органов, вызываемых C.trachomatis,
за последние десятилетия приобрела чрезвычайно важное значение, что
связано с широким распространением данного вида инфекции и
значительным числом развивающихся после нее осложнений.
Вид C.pneumoniae. Еще недостаточно изучен. Вызывает острую инфекцию
верхних и нижних отделов дыхательного тракта, передающуюся от человека
к человеку.
Бактериоскопический метод исследования: выявление хламидии, их
морфологических структур и антигенов в пораженных клетках (клиническом
материале).
Материал для исследования: соскобные препараты с доступных
исследованию слизистых оболочек мочеполового тракта ( уретра, шейка
матки и т.п.) и других органов (конъюнктива, прямая кишка и пр.) при
экстрагенитальных формах.
Из материала готовят мазки, которые окрашивают по Романовскому-Гимзе.
Цитоплазматические включения хламидии (тельца Гальберштедтера-
Провачека) содержат крупные ретикулярные тельца или мелкие
элементарные тельца. По цвету и внутренней структуре РТ и ЭТ отличаются
от ядра клетки и цитоплазмы. Метод характеризуется сравнительно низкой
чувствительностью, позволяет диагностировать 10-20% случаев
урогенитальной инфекции; при хламидийной патологии глаз его
чувствительность составляет 90-100%.
Применение люминисцирующих поликлональных и моноклональных антител
для выявления антигенов хламидии в цитоплазматических включениях в
соскобных препаратах урогенитального тракта значительно увеличивает
чувствительность и специфичность метода. Используется как прямой, так и
непрямой иммунофлюоресцентный метод. При люминесцентной
микроскопии антигены хламидии выявляют на красном или оранжевом фоне
(при контрастировании синькой Эванса или родамином) цитоплазмы
эпителиальных клеток в виде внутриклеточных включений ярко-зеленого
цвета. По информативности и чувствительности уступает только
бактериологическому методу.
При диагностике орнитоза и других зоонозных хламидиозов
бактериоскопический метод не применяется.
Бактериологический метод исследования: выделение хламидии из
инфекционного материала проводится заражением куриных эмбрионов,
лабораторных животных или клеточных культур с последующей индикацией
возбудителя.
Материал для исследования: - тот же, что и при бактериоскопии. При орнитозе
- кровь или мокрота. Кровь из вены (не менее 5 мл) исследуют в первые 7-10
дней заболевания, мокроту - до 14 дня заболевания. Для удаления
сопутствующей микрофлоры добавляют антибиотики, не действующие на
хламидии. (стрептомицин, нистатин, гентамицин). При заражении куриного
эмбриона исследуемый материал вводят в желточный мешок 6-7-суточного
развивающегося эмбриона.
Индикацию хламидии проводят через 48-72 часа на основании обнаружения
типичных цитоплазматических включений, содержащих элементарные и
ретикулярные тельца (мазки-отпечатки из желточных мешков куриных
эмбрионов и (или) оценка зараженных клеток - окраска по Маккиавелло,
прямая и непрямая РИФ).
При диагностике орнитоза кроме культур клеток можно заражать
пибораторных животных (в мозг или внутрибрюшинно).
Серологический метод исследования: антитела выявляют в сыворотке крови, которую исследуют 2-3 раза с интервалом 10-14 дней, и секретах половых органов. Для диагностики используют РСК, РПГА, РИФ, ИФА. При урогенитальных хламидиозах диагностически значимыми в РИФ являются титры 1:32-1:64. Наиболее достоверным является нарастание титра антител в четыре и более раза.
Аллергологический метод исследования: постановка кожно-аллергических проб. Используется при диагностике орнитоза с орнитозным аллергеном. Внутрикожная проба становится положительной с первых дней заболевания у 87-95% больных, сохраняясь до года и более.