Определение группы крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и стандартными эритроцитами (перекрестный способ).

Ставятся параллельно две реакции: со стандартными сыворотками по описанной выше методике и со стандартными (известной групповой принадлежности) эритроцитами. Станции переливания крови выпускают для этой цели «Стандартные эритроциты».

Как уже указывалось выше, определение группы крови по системе АВО в лечебном учреждении проводится в два этапа – сначала врач в лечебном подразделении проводит определение прямым методом, а затем результат проверяется в лаборатории перекрестным способом. На территории Самарской области переливание компонентов крови без лабораторного определения группы крови АВО перекрестной реакцией и резус- фактора запрещена.

Определение группы крови перекрестным методом у новорожденных и недоношенных детей затруднено, так как у них не сформирована система агглютиногенов.

Оснащение:

1. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп Оαβ(I), Аβ(II), Вα(III) двух серий и сыворотка группы АВо(IV) одной серии.

2. Стандартные эритроциты групп Оαβ(I), Аβ(II), Вα(III).

3. Изотонический раствор хлорида натрия.

4. Белые фарфоровые или любые другие пластинки (тарелки) со смачиваемой поверхностью, разделенные на четыре сектора, обозначенные соответственно группам крови.

5. Пипетки.

6. Стеклянные или пластмассовые палочки с округлыми концами для перемешивания крови.

Техника:

1. Заготавливается сыворотка больного: из вены берется 4-5 мл крови, которая центрифугируется или отстаивается 20-30 минут до образования сгустка и прозрачной сыворотки.

2. На размеченную белую пластинку (см.выше) наносят по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп 0(I), А(II), В(III).

3. На эти капли пипеткой наносится по одной капле (0,1 мл) сыворотки больного.

4. Далее реакция проводится как при прямом способе определения групповой принадлежности см. пункты 4, 5, 6. Реакция с эритроцитами группы АВ(IV) не проводится.

5. Одновременно проводится описанное выше определение группы крови прямым способом. Одной реакции со стандартными эритроцитами не достаточно: по ее результатам нельзя дать заключение о групповой принадлежности.

В результате перекрестной реакции выявляются как агглютиногены, так и агглютинины исследуемой крови, таким образом, получается полная формула группы крови. Перекрестная реакция позволяет избежать ошибок в определении группы крови изогемагглютинирующими сыворотками, связанные с наличием иммунных экстраагглютининов, слабых агглютининов и агглютиногенов, подгрупп.

При совпадении результатов реакции со стандартными сыворотками и стандартными эритроцитами дается заключение о групповой принадлежности высочайшей степени точности.

Определение группы крови с помощью моноклональных антител (цоликлонов).

Определение группы крови с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток может давать ошибки (см. выше). Использование вместо сывороток моноклональных антител снижает число ошибок, хотя не исключает их полностью.

Моноклональные анти-А и анти-В антитела получаются из асцитической жидкости мышей — носителей специфических гибридом, выведенных методами генной инженерии. Цоликлоны выпускаются в жидкой форме, во флаконах по 5-10 мл. Цоликлон анти-А — красного цвета, анти-В — синего, анти-АВ — бесцветный. Флаконы хранятся при температуре +2-4ºС, вскрытые флаконы можно хранить при той же температуре в течение одного месяца.

Техника проведения реакции:

1. На размеченную пластину наносятся по одной капле (0,1 мл) цоликлонов анти-А, анти-В и анти-АВ.

2. Рядом с каплями цоликлонов наносится по одной маленькой капле (0,01-0,03 мл) исследуемой крови.

3. Кровь смешивается с реагентом так же, как при реакции с сыворотками.

4. При легком покачивании пластины реакция продолжается в течение 3 мин. Положительный результат реакции выражается в наступлении агглютинации в виде мелких красных агрегатов и более крупных хлопьев. При отрицательной реакции агглютинантов нет, капля остается окрашенной в розовый цвет.

5. Окончательно принадлежность крови к группе АВО устанавливается только по результатам перекрестного определения антигенов А и В на эритроцитах и изогемагглютининов в сыворотке,т.е. при определении группы крови цоликлонами так же как и с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, результат реакции необходимо проверять перекрестным способом.