79. Методы солевого и спиртового фракционирования глобулинов

Методы солевого и спиртового фракционирования используются для разделения белков, включая глобулины, в растворах с помощью добавления различных солей или спиртов. Эти методы широко применяются в биотехнологии для очистки белков, таких как антитела (глобулины), из сыворотки крови.

1. Солевое фракционирование:

Солевое фракционирование основано на добавлении соли в раствор белков, что изменяет растворимость белков и приводит к их осаждению.

• Принцип: При добавлении соли в раствор, она конкурирует с белками за водные молекулы, что снижает растворимость белков. В зависимости от типа соли (например, сульфат аммония) и её концентрации, различные белки осаждаются на разных стадиях. Глобулины часто осаждаются при средней концентрации соли, в то время как альбумины остаются в растворе.

• Процесс:

  • В сыворотку добавляется сульфат аммония или другие соли.

  • При различных концентрациях соли белки осаждаются и могут быть отделены центрифугированием.

  • После осаждения глобулинов их очищают от примесей, используя диализ или другие методы.

2. Спиртовое фракционирование:

Спиртовое фракционирование основывается на добавлении спирта, такого как этанол, в раствор белков, что изменяет их растворимость.

• Принцип: Этанол или другие спирты снижают растворимость белков, что приводит к их осаждению. Обычно спирт добавляется до концентрации 20-30%, чтобы вызвать осаждение глобулинов, в то время как альбумины остаются в растворе.

• Процесс:

  • Спирт добавляется в сыворотку или другой раствор с белками.

  • Белки осаждаются, и осадок отделяется центрифугированием.

  • Полученные глобулины очищаются с использованием методов, таких как диализ, для удаления спирта и других примесей.

Применение:

Методы фракционирования используются для очистки глобулинов из сыворотки, а также для получения препаратов, таких как иммуноглобулины и альфа-глобулины, которые затем используются в медицинских и биотехнологических целях.

80. Характеристика и особенности технологии живых векторных вакцин

Живые векторные вакцины — это вакцины, в которых используются ослабленные или аттенуированные вирусы или бактерии (вектор), чтобы доставить генетический материал (например, гены антигенов) в клетки организма для стимуляции иммунного ответа.

Характеристика:

1. Принцип действия:

   • Векторная вакцина использует ослабленный или аттенуированный вирус (вектор), который не вызывает заболевание, но может передать генетический материал патогена (антиген) в клетки организма.

   • Векторные вирусы могут быть вирусами людей (например, аденовирус), животных или бактериями.

   • Введение векторной вакцины вызывает синтез антигенов в клетках организма, которые затем стимулируют иммунный ответ (включая выработку антител и активацию клеточного иммунитета).

2. Преимущества:

   • Сильный иммунный ответ: Живые векторные вакцины могут вызывать как гуморальный, так и клеточный иммунный ответ.

   • Долговечность иммунитета: Такие вакцины обычно обеспечивают длительный и более выраженный иммунитет, чем другие типы вакцин.

   • Гибкость: Векторные вакцины могут быть использованы для доставки генетического материала против различных инфекционных агентов.

3. Особенности технологии:

   • Создание вектора: Для создания векторной вакцины необходимо изолировать векторный вирус, который будет безопасным для организма. Вектор генетически модифицируется для включения генов антигенов.

   • Процесс разработки:

     • Идентификация целевого антигена.

     • Выбор подходящего вектора.

     • Генетическая модификация вектора для доставки антигенов.

     • Тестирование безопасности и эффективности вакцины на клеточных культурах и животных моделях.

   • Модификация вектора: Вектор может быть генетически изменён для улучшения его свойств, таких как стабильность, эффективность доставки и безопасность.

4. Пример:

   • Вакцина против Эболы, использующая аденовирус как вектор, является примером успешного применения живых векторных вакцин.