38. Подготовка биообъектов к исследованию в электронном микроскопе

Для изучения биообъектов с помощью электронного микроскопа необходимо подготовить образцы таким образом, чтобы они могли выдержать воздействие электронных лучей и сохранить свою структуру. Это требует выполнения нескольких этапов.

Этапы подготовки:

1. Фиксация:

   • Основная цель — сохранить структуру клеток и тканей. Используются химические фиксаторы, такие как формальдегид или глутаровый альдегид, которые фиксируют белки и другие молекулы внутри клетки.

2. Обезвоживание:

   • Образцы подвергаются последовательному обезвоживанию через серию растворов с различной концентрацией этанола (или ацетона). Это необходимо для того, чтобы избежать повреждения клеток из-за обезвоживания при контакте с вакуумом в микроскопе.

3. Опроски (или сублимация):

   • Образцы могут быть подвергнуты сублимации (криопрепарация) — процессу замораживания и высушивания под вакуумом, чтобы сохранить структуру клеток без повреждения.

4. Нанесение проводящего слоя:

   • Для проведения исследования в электронном микроскопе на поверхности образца наносится тонкий слой проводящего материала (обычно золота, платины или углерода) с помощью распыления. Это помогает проводить электроны и предотвратить накопление заряда на поверхности объекта.

5. Подготовка для сканирующего электронного микроскопа (СЭМ):

   • В отличие от просвечивающего микроскопа, СЭМ исследует поверхность образца, поэтому часто используется дополнительная стадия нанесения покрытия для улучшения изображения.

Важность этих этапов:

• Фиксация и обезвоживание помогают сохранить форму и структуру объекта.

• Нанесение проводящего слоя позволяет получить качественные изображения.

• Для некоторых образцов может быть необходима дополнительная подготовка, включая криогеническое сублимирование.

39. Методы промышленного накопления биомассы вирусов

Промышленное накопление биомассы вирусов — это процесс массового выращивания вирусов для получения биопродуктов, таких как вакцины, вирусные препараты или для исследований. Вирусы могут быть использованы для различных целей, включая генную терапию и производство препаратов с антивирусной активностью.

Методы накопления:

1. Культуры клеток:

   • Вирусы выращиваются в культурах клеток, которые служат репликативной средой для вирусных частиц. Это может быть как клеточный культ живых животных, так и растительных клеток.

   • Для оптимизации процесса часто используются культуры клеток млекопитающих или фибробластов, которые хорошо подходят для репликации вирусов.

2. Инфекция живых организмов:

   • Для некоторых вирусов, таких как вирусы гриппа или полиомиелита, используются живые животные или птицы, которые служат естественными хозяевами вируса. Однако этот метод ограничен из-за высоких затрат и этических вопросов.

3. Микробиологические ферментеры:

   • Вирусы могут быть также выращены в биореакторах с контролируемыми условиями, такими как температура, pH и аэрация. Биореакторы позволяют обеспечить массовое производство вирусов в стерильных условиях, что минимизирует возможность контаминации.

4. Инфекция растительных тканей:

   • Вирусы также могут быть выращены в растительных клетках или культурах, что становится все более популярным для производства вирусных вакцин, так как растения могут служить дешевым и экологически безопасным источником вирусов.

5. Генетическая инженерия вирусов:

   • Использование генетически модифицированных вирусов, которые могут быть выращены в культурах клеток или на растениях, также позволяет увеличить выход вирусной биомассы.