Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Основы биотехнологии и асептики проведения процессов. Учебно-методическое пособие

.pdf
Скачиваний:
0
Добавлен:
07.09.2026
Размер:
2 Мб
Скачать
☆
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Казанский национальный исследовательский
технологический университет
М. А. Сысоева, А. Ю. Крыницкая, Е. В. Петухова
ОСНОВЫ БИОТЕХНОЛОГИИ
И АСЕПТИКИ ПРОВЕДЕНИЯ
ПРОЦЕССОВ
Учебно-методическое пособие
Издательство КНИТУ
2022
УДК 663.1(075) ББК 30.16я7
С95
Печатается по решению редакционно-издательского совета
С95
Сысоева М. А.
Основы биотехнологии и асептики проведения процессов : учебно-ме­тодическое пособие / М. А. Сысоева, А. Ю. Крыницкая, Е. В. Пету­хова; Минобрнауки России, Казан. нац. исслед. технол. ун-т. – Казань : Изд-во КНИТУ, 2022. – 80 с.
ISBN 978-5-7882-3227-0
ISBN 978-5-7882-3227-0
©
Сысоева М. А., Крыницкая А. Ю., Петухова Е. В., 2022
©
Казанский национальный исследовательский технологический университет, 2022
УДК 663.1(075) ББК 30.16я7
Казанского национального исследовательского технологического университета
Рецензенты:
канд. биол. наук, доц. Г. А. Гасимова
канд. техн. наук, доц. С. Н. Савдур
Содержит базовые сведения, касающиеся основ проведения биотехнологиче­ских процессов, а также поддержания асептических условий их реализации. Рас­сматриваются вопросы загрязнения питательных сред и воздуха микроорганиз­мами, аналитические методы диагностики стерильности питательных и воздуш­ных потоков, основы теоретических подходов для математического описания этих процессов, особенности аппаратурного обеспечения проведения лаборатор­ных работ.
Предназначено для бакалавров направления 19.03.01 «Биотехнология», а также может быть полезно для студентов, обучающихся по программе магистра­туры 19.04.01 «Биотехнология».
Подготовлено на кафедре пищевой биотехнологии.
2
О Г Л А В Л Е Н И Е
Введение ......................................................................................................................... 4
Правила техники безопасности при работе в биотехнологической лаборатории ...... 6
Тема 1. БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ И АСЕПТИКА ....................... 11
Лабораторная работа 1. КИНЕТИКА ГИБЕЛИ МИКРООРГАНИЗМОВ ............ 17
Лабораторная работа 2. ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ФИЛЬТРАЦИИ
ВОЗДУХА .................................................................................................................... 25
Тема 2. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ДРОЖЖЕЙ НА РАЗЛИЧНЫХ
ОРГАНИЧЕСКИХ СУБСТРАТАХ ........................................................................... 36
Лабораторная работа 3. КИНЕТИКА И СТЕХИОМЕТРИЯ РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ В ПРОЦЕССЕ ИХ ПЕРИОДИЧЕСКОГО
КУЛЬТИВИРОВАНИЯ НА ГЛЮКОЗЕ И ЭТАНОЛЕ ........................................... 43
Лабораторная работа 4. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ИНГИБИТОРОВ НА РОСТ
МИКРОБНОЙ КУЛЬТУРЫ ....................................................................................... 55
РАСЧЕТНЫЕ ЗАДАЧИ .............................................................................................. 69
Культивирование микроорганизмов ...................................................................... 69
Ферментативная кинетика ....................................................................................... 75
Заключение .................................................................................................................. 78
3
В В Е Д Е Н И Е
Биотехнология в настоящее время является одним из приори-
тетных направлений науки, с которым связано благополучие всего че­ловечества в обозримом будущем. Биотехнология – наука, которая ба­зируется на широком спектре знаний дисциплин естественно-науч­ного направления, таких как биология, химия, физика и др. Это явля­ется, с одной стороны, существенным преимуществом биотехноло­гии, но, с другой – определяет высокие стандарты уровня подготовки специалистов в этой области деятельности. В настоящее время наблюдается тенденция активно использовать в биотехнологических процессах достижения молекулярной биологии и генетической инже­нерии, что позволяет создавать и использовать высокопродуктивные штаммы-продуценты биологически активных веществ. Однако этот аспект не снижает важности знания и грамотного использования за­кономерностей проведения биотехнологического процесса на всех его этапах. Спектр биотехнологической продукции, производимой и реализуемой в настоящее время, насчитывает несколько тысяч наименований. Каждое производство характеризуется своими осо­бенностями. Однако для всех них существуют общие закономерно­сти. Рассмотрению некоторых из них в теоретическом плане посвя­щено данное учебно-методическое пособие.
В процессе обучения студентов по специальности «Биотехноло-
гия» происходит формирование знаний о методах, приемах, способах и условиях выращивания микробных культур в промышленном произ­водстве, разработка представлений об основных принципах организа­ции и функционирования биотехнологических систем на разных уров­нях, демонстрация возможности управления и оптимизации биотехно­логических систем на клеточном и популяционном уровне, примене­ние теоретических знаний в процессе выполнения производственно­технологической деятельности. В этом контексте особое внимание уде­ляется лабораторному практикуму, в котором студенты должны закре­пить свои теоретические знания, выполняя конкретные работы, полу­чить реальные результаты и объяснить их. Пособие охватывает четыре темы, соответствующие основным фазам биотехнологического про­цесса: кинетика гибели микроорганизмов, стерилизация воздушных по­токов, культивирование дрожжей на органических субстратах (этаноле и глюкозе) и ингибирование роста микробов ионами тяжелых металлов.
4
По каждой теме студенты должны выполнить лабораторную работу, ко­торая представляет собой небольшое пилотное исследование. Описа­ние каждой лабораторной работы предваряется кратким теоретическим описанием, затем даются методические указания к работе, предлага­ется перечень необходимого оборудования и материалов. В конце каж- дой темы представлены контрольные вопросы, которые студенты могут использовать для подготовки к коллоквиумам и самостоятельным ра­ботам, список рекомендуемой литературы.
Пособие студенты могут использовать в процессе освоения учеб-
ного материалов в рамках специальных биотехнологических курсов, та­ких как «Теоретические основы биотехнологии», «Общая биотехноло­гия», «Моделирование биотехнологических процессов» и др., а также в ходе прохождения производственной и преддипломной практик и вы­полнения выпускных квалификационных работ по направлению «Био­технология».
5
П Р А В И Л А Т Е Х Н И К И Б Е З О П А С Н О С Т И
ПРИ Р А Б О Т Е В Б И О Т Е Х Н О Л О Г И Ч Е С К О Й
Л А Б О Р А Т О Р И И
1. К работе в лаборатории могут приступать только проинструк­тированные студенты и сотрудники, что должно быть зафиксировано в специальном журнале.
2. Студенты, сотрудники должны проводить исследования только в белом халате во избежание повреждения одежды химиче­скими реактивами и для соблюдения стерильности при работе в ла­минарном боксе.
3. Каждый должен выполнять порученную ему работу. Смена ме­ста работы без разрешения преподавателя не допускается.
4. При работе в лаборатории должны соблюдаться чистота, ти­шина и порядок. Присутствие в лаборатории посторонних лиц запре­щено. Это отвлекает внимание сотрудников, работающих в лаборато­рии в стерильных условиях во время экспериментов.
5. Рабочее место должно содержаться в чистоте. Нельзя загро­мождать его посудой, бумагой и ненужным материалом.
6. Перед каждой лабораторной работой получение инструктажа по безопасным методам работы от преподавателя является обязательным.
7. Выполнению лабораторной работы обязательно предшествует изучение теоретического материала, подготовка рабочего места.
8. Эксперимент должен осуществляться в строгом соответствии с методикой. Следует обращать особое внимание на порядок добавле­ния реагентов.
9. В случае нерегламентных обстоятельств, связанных с проли­вом химических веществ, необходимо незамедлительно поставить в из­вестность преподавателя, произвести инактивацию и уборку этих ве­ществ в соответствии с инструкцией.
10. При нагревании жидкостей и твердых веществ в пробирках или колбах не допускается направлять горлышко емкости на себя или на соседей.
11. Категорически запрещается пробовать любые вещества. За­пах вещества следует определять на расстоянии от себя.
12. При взвешивании нельзя наливать или насыпать химикаты непосредственно на чашу весов.
6
7
13. После работы с минеральными кислотами, щелочами, ядови- тыми веществами всю посуду следует немедленно тщательно вымыть.
14. Необходимо соблюдать меры предосторожности при обраще-
нии со стеклянной химической посудой и приборами. Со стеклянной посудой следует обращаться осторожно, не нажимая на нее сильно пальцами. Мытье посуды с отверстиями или стеклянной палочкой сле­дует проводить осторожно, так как они могут легко разбить дно или стенки стеклянной посуды, что может привести к порезам.
15. При работе с использованием стеклянного оборудования воз­можны порезы острыми осколками разбитого стекла. Кроме того, сле­дует помнить, что в процессе прохождения экзотермических реакций происходит нагревание стенок стеклянных сосудов до достаточно вы­соких температур, что может привести к ожогам.
16. Для перемешивания реакционной смеси в сосуде необходимо пользоваться стеклянной палочкой или шпателем. При этом необхо­димо придерживать горлышко сосуда, стараясь его не разбить.
17. При необходимости проведения опытов, предполагающих ис­пользование подогрева или разогревания в процессе прохождения ре­акции, следует использовать посуду, имеющую соответствующую мар­кировку.
18. При порезе стеклом осмотреть рану и при необходимости удалить из нее осколки стекла. Затем края раны обработать 2 % раство­ром перманганата калия (розового цвета) или спиртовым раствором йода и обработанную рану перевязать бинтом или заклеить лейкопла­стырем.
19. Категорически запрещается выливать остатки стерилизую­щих веществ (особенно двухосновных кислот), использованные пита­тельные среды в раковины.
20. Категорически запрещается работать в ламинарном боксе с включенной ультрафиолетовой лампой.
21. Спиртовку следует содержать в чистоте, заправлять спиртом вдали от открытого огня, саму емкость нельзя перегревать. Не остав­лять зажженную спиртовку без присмотра.
22. Перед тем как зажечь спиртовку, необходимо убедиться, что горлышко спиртовки плотно закрыто крышкой, фитиль выпущен на нужную высоту, а сама спиртовка сухая.
23. Категорически запрещается передвигать зажженную спир­товку.
8
24. Спиртовку следует гасить, закрыв пламя колпаком. Запре- щено раздувать пламя.
25. В спиртовках использовать только этиловый спирт, недопу-
стимо использование бензина или других легковоспламеняющихся жидкостей.
26. Все работы с легковоспламеняющимися и горючими жидко­стями (ЛВЖ и ГЖ) должны производиться в вытяжном шкафу при включенной вентиляции, выключенных газовых установках и электро­нагревателях.
27. Нагрев растворов и питательных сред необходимо произво­дить в стеклянном сосуде на асбестовой сетке или водяной бане.
28. Излишки реагента нельзя выливать в канализацию, а также обратно в тару хранения.
29. Сухие реагенты брать только пластиковым или металличе­ским шпателем. Шпатель всегда должен быть сухим и чистым. После использования необходимо его тщательно протереть.
30. Недопустимо использовать одну и ту же пипетку для забора разных реактивов.
31. Введение реактива в реакционную смесь не должно сопро­вождаться появлением брызг.
32. При необходимости открывания банки или стакана с реагентом необходимо поставить сосуд на лабораторный стол и только потом от­крывать. Не разрешается открывать сосуды с реагентами, держа в руках.
33. Запасы спирта и других летучих жидкостей в лаборатории должны быть небольшими, в количестве, необходимом для текущей ра- боты. Спирт следует хранить вдали от источников огня, в утепленном отсеке шкафа, снабженном дверцей, хорошо закрывающейся, покрытой войлоком или асбестом и обитой кровельным железом.
34. При попадании кислоты (хромовой смеси) на кожу следует немедленно промыть ее водой и обработать пораженные участки тела холодной водой.
35. При попадании щелочи на руки или другие открытые части тела необходимо немедленно промыть их водой, щелочные остатки нейтрализовать небольшим количеством нейтрализующего буфера или слабым раствором органической кислоты (например, уксусной).
36. Лаборатория должна быть оснащена аптечкой для оказания первой помощи пострадавшему.
9
37. По окончании работы растворы кислот и щелочей необхо- димо сливать в специальную емкость.
38. Работа с автоклавом и дистиллятором должна производиться только по инструкции и при наличии специального разрешения.
39. В случае пожара немедленно отключить электричество, вы-
ключить электроприборы, засыпать огонь песком или накрыть асбесто­вым одеялом. Большое пламя тушат огнетушителем. О большом возго­рании следует немедленно сообщить в пожарную часть по телефону 112.
40. Если в процессе проведения опыта были получены легкие ожоги, надо использовать холодную воду, затем мазь от ожогов, напри­мер банеоцин. Если получен ожог от негашеной извести или серной кислоты воду использовать нельзя. В этом случае обработать ожог су­хой салфеткой . В случае получения сильных ожогов необходимо не­медленно обратиться к врачу.
41. Все работы, связанные с использованием электроприборов, должны контролироваться преподавателем (лаборантом).
42. При обнаружении неисправности электроприбора необхо­димо доложить об этом преподавателю. Работа на неисправном обору­довании категорически запрещена.
43. При поражении электрическим током необходимо немед­ленно доложить об этом преподавателю. В случае если пострадавший контактирует с токоведущими частями оборудования, необходимо от­ключить питание выключателем или стартером. Нельзя прикасаться к пострадавшему, находящемуся под напряжением, незащищенными руками (без резиновых перчаток). Если пострадавший потерял созна­ние, искусственное дыхание необходимо выполнять сразу после отклю­чения питания, не дожидаясь врача.
44. Прием пищи и воды (в том числе различных напитков) в ла­боратории запрещается.
45. При случайном попадании биологического материала (микро­организмов) на стол необходимо обработать его дезинфицирующим рас­твором (например, 3 % раствором хлорамина). При попадании на руки рекомендуется тщательно вымыть их теплой водой с хозяйственным мы­лом и дополнительно обработать 70 % раствором этилового спирта.
46. При плохом самочувствии необходимо прекратить работу, сообщить об этом своему преподавателю и обратиться к врачу.
47. После окончания работ необходимо привести в порядок рабочее место, проверить, выключены ли электроприборы, вода в лаборатории.
48. После работы необходимо снять спецодежду и другие сред­ства индивидуальной защиты, тщательно вымыть руки с применением дезинфицирующих средств (моющих средств).
49. Следует сообщить своему руководителю обо всех замечен­ных нарушениях и замечаниях в ходе работы, а также о принятых мерах по их устранению.
10
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]