Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Технология продуктов функционального питания. Учебное пособие.pdf
161
дят водой объем раствора до метки. Применяют для контроля степени
осахаривания сусла.
Метиленовый синий
Большинство рабочих растворов метиленовой сини готовится из
насыщенного спиртового раствора (3 г метиленового синего в 100 см
спирта).
1. Стандартный раствор метиленовой сини для окрашивания: на-
сыщенный раствор метиленового синего – 1 см
используют в течение месяца.
2. Метиленовый синий по Леффлеру: в 100 см
3
30 см
насыщенного раствора метиленового синего и 1 см3 1 % раство-
3
, вода 40 см3 . Раствор
3
воды добавляют
ра KOH. В старых руководствах рекомендуется выдерживать этот раствор для «созревания» в течение не менее 1 месяца.
Фуксин
Большинство рабочих растворов фуксина готовится из насыщенного спиртового раствора (10 г основного фуксина в 100 см
спирта).
Фуксин основной карболовый (Циля): 10 см
раствора растворяют в 100 см
3
5 % раствора карболовой кислоты
(фенола).
Водный раствор основного фуксина: 1 см
Циля смешивают с 9 см
3
воды. Готовить ex tempore, т. к. раствор
3
насыщенного
3
раствора фуксина
нестоек.
3
3
162
Трис HCl-буфер 0,05 М
рН при температуре
0,2 М раствор трис, см3
0,1 М раствор НCl, см3
23 оС
37 оС
9,10
8,95
25
5,0
8,92
8,78
25
7,5
8,74
8,60
25
10,0
8,62
8,48
25
12,5
8,50
8,37
25
15,0
8,40
8,27
25
17,5
8,32
8,18
25
20,0
8,23
8,10
25
22,5
8,14
8,00
25
25,0
8,05
7,90
25
27,5
7,96
7,92
25
30,0
7,84
7,73
25
32,5
7,77
7,63
25
35,0
7,66
7,52
25
37,5
7,54
7,40
25
40,0
7,36
7,22
25
42,5
7,20
7,05
25
45,0
0,2 М раствор
ацетата натрия, см3
0,2 М раствор
уксусной кислоты, см3
3,6
0,75
9,25
3,8
1,20
8,80
4,0
1,80
8,20
4,2
2,65
7,35
4,4
3,70
6,30
4,6
4,90
5,10
5,0
5,90
4,10
5,2
7,00
3,00
5,4
7,90
2,10
5,6
8,60
1,40
5,8
9,10
0,90
Трис, относительная молекулярная масса 121,14. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 100 см
рН
3
.
Ацетатный буфер 0,2 М
163
Ацетат натрия (CH3COONa.3H2O), относительная молекулярная
рН
0,2 М раствор Nа2НРО4, см3
0,2 М раствор NаН2РО4, см3
5,8
8,0
92,0
6,0
12,3
87,7
6,2
18,5
81,5
6,4
26,5
73,5
6,6
37,5
62,5
6,8
49,0
51,0
7,0
61,0
39,0
7,2
72,0
28,0
7,4
81,0
19,0
7,6
87,0
13,0
7,8
91,5
8,5
8,0
94,7
5,3
% вещества в смеси
со льдом
Температура
смеси, оС
NH4Cl
20
-15,5
NH4NO3
31
-26,0
NH4NO3
16
-14,0
NaCl
24
-21,0
CaCl
2
.
2H2O
55
-40,0
Спирт этиловый
50
-24,0
Твердая углекислота
–
-78,8
Твердая углекислота с
этанолом
Твердая углекислота с
ацетоном
Жидкий азот
–
-196,0
Жидкий азот с ацетоном
–
до -150,0
масса 136,09.
Фосфатный буфер 0,1 М
Двузамещенный фосфат натрия (Na2HPO
молекулярная масса – 178,05; однозамещенный фосфат натрия
(NaH
.
H2O), относительная молекулярная масса – 138. Объем рас-
2PO4
твора доводят дистиллированной водой до 200 см
.
2H2O), относительная
4
3
.
Охлаждающие смеси
Вещество
– от -72,0 до -115,0
– -80,0
164
Название
индикатора
Интервал
pH
Тимоловый
синий
1) 0,1 % в 20 % этиловом
спирте
2) 100 мг + 4,3 см
створа
см3)
Метиловый
оранжевый
Красная –
оранжево-желтая
0,1 % в воде
Бромфеноло
вый синий
1) 0,1 % в 20 % этиловом
спирте
2) 100 мг + 3 см
створа NaOH + вода (до 100
см3)
Метиловый
красный
0,1 % в 20 % этиловом спирте
Бромтимоло
вый синий
1) 0,05 % в 20 % этиловом
спирте
2) 100 мг +
створа
см3)
Феноловый
красный
1) 0,1 % в 20 % этиловом
спирте
2) 100 мг + 5,7 см
створа
см3)
Фенолфталеин
Бесцветная -
ная
0,1 % в 20 % эт
Тимолфталеин
Бесцветная –
синяя
0,1 % в 90 % этиловом спирте
Индикаторы
Окраска Способ приготовления
1,2-2,8 Красная - желтая
3,1-4,4
3,0-4,6 Желтая - синяя
4,2-6,2 Красная - жёлтая
6,0-7,6 Жёлтая - синяя
6,4-8,0 Жёлтая - красная
3
0,05 Н ра
NaOH + вода (до 100
3
0,05 Н ра
3,2 см3 0,05 Н ра
NaOH + вода (до 100
3
0,05 Н ра
NaOH + вода (до 100
8,2-10,0
9,3-10,5
малиново - крас-
иловом спирте
165
Приготовление некоторых видов питательных сред
Питательные среды для бифидобактерий
Агар для бифидобактерий
Среда включает следующие компоненты: сухая питательная
среда СКС – 33,0 г; пептон – 20,0 г; питательный агар сухой «КД»
(кормовых дрожжей) – 30,0 г; глюкоза – 18,0 г (мальтоза – 10,0 г);
цитрат аммония – 2,0 г; калия дигидрофосфат – 6,0 г; твин-80 – 1,0 см
цистеина гидрохлорид – 5,0 г; гемин –1,0 см
солей – 5,0 см
3
; вода дистиллированная – до 1 дм3.
3
; агар-агар – 5,0 г; раствор
3
Состав раствора солей: сульфат магния семиводного – 11,5 г;
сульфат марганца четырехводного – 2,86 г; сульфат железа (II) семиводного – 0,68 г; вода дистиллированная – 100,0 см
3
.
рН готовой питательной среды 5,5.
В дистиллированной воде растворяют последовательно сухую
питательную среду СКС, сахара, питательный агар сухой «КД», пептон, цитрат аммония, твин, гемин, цистеин, добавляют раствор солей.
Среду автоклавируют при 0,5 атм. в течение 20 мин, затем добавляют
3
5 см
пропионовой кислоты, доводят рН до 5,5, охлаждают до 45-50 °С
и проверяют еще раз рН. После добавления кислоты и установления
рН среда не требует дополнительного автоклавирования и может храниться в холодильнике при +4 °С в течение 1 мес.
Модифицированная среда Блаурокка. Среда Блаурокка в
модификации Г.И. Гончаровой
Для приготовления печеночного отвара 500 г свежей говяжьей
печени, разрезанной на кусочки, кипятят в 1 дм
воды в течение 2 часов. После фильтрации количество отвара довести
до 1 дм
1000 см
тоза – 10,0 г; L-цистин или цистеин солянокислый – 0,1 г.
3
дистиллированной водой.
Среда включает следующие компоненты: печеночный отвар –
3
; пептон – 10,0 г; натрия хлорид – 5,0 г; агар-агар – 0,75 г; лак-
К 1 дм
3
печеночного отвара добавляют при нагревании 10 г пеп-
3
дистиллированной
тона, 5 г натрия хлорида, 750 мг агар-агара. Устанавливают рН 7,8-7,9,
кипятят в течение 15 минут, фильтруют через бумажный фильтр. Затем добавляют 10 г лактозы, 100 мг цистеина солянокислого. Среду
доводят до первоначального объема горячей дистиллированной водой
и разливают во флаконы по 50-100 см
3
. Стерилизуют при 110 оС (0,5
;
166
атм.) 30 мин. рН среды после стерилизации равна 7,4. Перед употреблением среду разливают в пробирки по 10-12 см
3
и регенерируют кипя-
чением в течение 40-45 минут с последующим быстрым охлаждением.
Модифицированная «среда для контроля стерильности» для
культивирования бифидобактерий
Среда включает следующие компоненты: среда для контроля стерильности – 33,0 г; агар-агар – 1,6 г; вода дистиллированная – 1000 см
Среда стерилизуется при 120
3
1 дм
основы добавляется 0,1 г налидиксовой кислоты, предваритель-
но растворенной в небольшом количестве стерильной дистиллированной воды. Разливается в пробирки по 10-12 см
о
С 20 мин. После стерилизации на
3
.
3
.
Модифицированная печеночная среда Блаурокка
Среда включает следующие компоненты: печеночный отвар –
3
1000 см
; натрия хлорид – 5,0 г; пептон – 10,0 г; глюкоза – 5,0 г; агар-
агар – 0,8 г; цистеин – 0,3 г.
0,5 кг свежей печени очистить от пленок и протоков, измельчить, залить 1 дм
ч. Отвар профильтровать, довести до 1 дм
3
дистиллированной воды и кипятить в течение 1,5-2
3
. Добавить натрия хлорид,
пептон; установить активную кислотность 8,15±0,5 ед. рН с помощью
10 % раствора натрия гидроксида. Кипятить 10 мин. Стерилизовать
при 121±1
день печеночный бульон декантировать, долить дистиллированной
водой до 1 дм
довести до 7,7±0,1 ед. рН. Разлить в пробирки по 10 см
вать при 121±1
туре 37±1
не более 2-х месяцев при температуре 4±2
о
С 15±1 мин или при 112±1 оС 30±1 мин. На следующий
3
. Внести глюкозу, агар-агар, цистеин. Кипятить 10 мин,
о
С в течение 15±1 мин и при 112±1 оС 20±1 мин.
Среду проверяют на стерильность путем выдержки при темпера-
о
С в течение 2-х суток.
Хранят среду не более одного месяца при температуре 20±2
о
С.
3
и стерилизо-
о
С и
Ростовые качества каждой серии среды Блаурокка контролируют высевом лиофилизированной биомассы бифидобактерий.
Кукурузно-лактозная среда (плотная)
Среда включает следующие компоненты: агар – 2,5 г; пептон –
10 г; кукурузный экстракт – 40 см
3
; натрий лимоннокислый трехзаме-
щенный – 6,6 г; магний сернокислый – 0,12 г; калий фосфорнокислый
167
двузамещенный – 2,0 г; лактоза – 10,0 г; цистин солянокислый – 0,15 г
или аскорбиновая кислота – 0,5 г; вода дистиллированнная – 1000 см
3
.
В небольшом объеме дистиллированной воды расплавляют агар.
К остальному количеству дистиллированной воды добавляют пептон;
водный раствор кукурузного экстракта, разбавленного 1:6; 6 г натрия
лимоннокислого трехзамещенного; магний сернокислый; калий фосфорнокислый двузамещенный. Смесь нагревают до температуры 80±2
°С, после чего соединяют с расплавленным агаром, добавляют лактозу. Вносят цистин или аскорбиновую кислоту. Цистин предварительно
растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, в которой устанавливают 8,45±0,5 ед. рН с помощью 10 % раствора натрия
гидроксида и нагревают на водяной бане до полного растворения. Всю
смесь доливают горячей дистиллированной водой до заданного объема
3
(1 дм
) и устанавливают 7,05±0,5 ед. рН с помощью 40 % раствора натрия гидроксида.
Среду разливают в пробирки высоким столбиком по 10 см
3
и
стерилизуют при 112±1 °С в течение 30±1 мин.
Гидролизованное молоко
Обычное или восстановленное обезжиренное молоко (обрат) доводят до кипения и кипятят 2±1 мин, охлаждают до 14±1 °С, устанавливают активную кислотность 7,8±0,1 ед. рН 10-20 % раствором
NaOH.
Добавляют панкреатин из расчета 1 г/дм
3
, предварительно раз-
веденный в небольшом количестве нагретой до 44 °С воды, размешивают, ставят в термостат и выдерживают при температуре 40±1 °С под
ватной пробкой. В течение первых 2-х часов перемешивание и коррекцию активной кислотности до 7,8±0,1 ед. рН проводят каждые 30±1
мин, в следующие 2 часа – через каждый час. Через 4 часа от начала
гидролиза к смеси добавляют 1-2 % хлороформа, закрывают резиновой или корковой пробкой и снова ставят в термостат. В течение первых часов молоко несколько раз перемешивают (пробку после встряхивания прокалывают для удаления паров хлороформа). Через 4 часа
доводят активную кислотность до 4,3±0,1 ед. рН 30 % раствором уксусной кислоты, кипятят, помешивая, в течение 15±1 мин, фильтруют
через бумажный фильтр. Готовый гидролизат должен содержать 200300 мг/% аминного азота. Хранят гидролизат под хлороформом (1 % к
объему) при температуре от 4 до 6 °С.
168
Гидролизатно-молочная среда
Среда включает следующие компоненты: агар –2,5 г; неомицин 17,0 г; пептон – 20,0 г; натрий хлористый – 3,5 г; лактоза – 10,0 г; цистин солянокислый – 0,15 г; гидролизованное молоко – 500 см
500 см
3
.
3
; вода –
Гидролизованное молоко разводят водой в соотношении 1:1.
В небольшом количестве разведенного гидролизата расплавляют
агар (в случае приготовления селективной среды с неомицином внести
17 г неомицина на 1 дм
3
). К остальному количеству гидролизата добавляют пептон и хлористый натрий, смесь нагревают до температуры
80±2 °С, после чего соединяют с расплавленным агаром. В смеси устанавливают активную кислотность 7,4±0,1 ед. рН, кипятят в течение
15±1 мин, дают отстояться, сливают с осадка, не фильтруя, доливают
горячей дистиллированной водой до заданного объема и добавляют в
неё лактозу и солянокислый цистин. Среду разливают в пробирки высоким столбиком по 10 см
3
и стерилизуют при температуре 112±1 оС в
течение 30±1 мин с предварительным подогревом автоклава паром в
течение 30±1 мин, активная кислотность готовой среды 7,1 ±0,1 ед. рН.
Селективная среда для определения количества бифидобак-
терий в материале, в микрофлоре которого присутствуют молочнокислые бактерии
В составе гидролизатно-молочной (см. выше) или кукурузно-
лактозной среды (см. выше) массовую долю агара увеличивают до 17
г на 1 л питательной среды. Среды разливают в широкие пробирки
по 20,0±0,5 см
3
и стерилизуют при температуре 112±1 оС в течение
30±1 мин с предварительным подогревом автоклава паром в течение
30±1 мин.
При проведении анализа в готовые среды перед расплавлением
вносят 0,2 см
Приготовление раствора неомицина. 50 г неомицина (сульфата
или основания) растворяют в 500 см
вая концентрация неомицина в растворе 100 г/дм
3
раствора неомицина из расчета на 20 см3 среды.
3
дистиллированной воды. Массо-
3
.
Агар для бифидобактерий с аскорбиновой кислотой и эно-
токолом
Среда включает следующие компоненты: сухая питательная
среда СКС – 33,0 г; пептон – 20,0 г; питательный агар сухой "КД"
(кормовых дрожжей) – 30,0 г; глюкоза – 18,0 г; цитрат аммония – 2,0 г;
169
калия дигидрофосфат – 6,0 г; твин-80 – 1,0 см3; аскорбиновая кислота
– 0,5 г; гемин – 1,0 см
лей – 5,0 см
3
; вода дистиллированная – до 1 л.
3
; энотокол – 5,0 г; агар-агар – 5,0 г; раствор со-
Состав раствора солей: сульфат магния семиводного – 11,5 г;
сульфат марганца четырехводного – 2,86 г; сульфат железа (II) семиводного – 0,68 г; вода дистиллированная – 100,0 см
3
.
В дистиллированной воде растворяют сухую питательную среду
СКС, глюкозу, питательный агар сухой «КД», пептон, цитрат аммония, твин, гемин, цистеин, добавляют раствор солей. Среду автоклавируют при 0,5 атм. 20 мин, затем добавляют 5 см
3
пропионовой кисло-
ты. рН готовой среды 5,5. Среду разливают по чашкам. Среда может
храниться в холодильнике при +4 °С в течение 1 месяца, перед применением среду необходимо выдержать не менее суток в анаэробных
условиях.
Питательные среды для лактобактерий
Капустный агар
200 г размельченной свежей капусты добавляют в 1 дм
3
водо-
проводной воды, смесь доводят до кипения, кипятят в течение 10-14
мин. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Полученный фильтрат
разводят водой в два раза, добавляют к нему 20 г глюкозы, 10 г пептона, 10 г углекислого кальция расплавляют в нем при нагревании 15-20
г агара. Устанавливают рН среды 7,0-7,4, разливают в стерильные
колбы. Стерилизуют 20 мин при температуре 121±1 °С.
Среда Редди
В колбу, содержащую 500 см
ляют 15,0 г агара и нагревают на водяной бане до растворения агара. В
другую колбу, содержащую 500 см
3
дистиллированной воды, добав-
3
дистиллированной воды, добав-
ляют 10,0 г цитрата калия и 15,0 г карбоксилметилцеллюлозы и растворяют при нагревании. Содержимое обеих колб смешивают и добавляют 3,0 г пептона, 25 см
3
дрожжевого экстракта, 1,25 г калия фос-
форнокислого двузамещенного, 5,0 г L-аргинин гидрохлорида, нагревают на водяной бане до полного растворения компонентов, охлаждают до температуры 45-55 °С и устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 6,3±0,2. Основу среды
стерилизуют при температуре 121±1 °С в течение 15 мин и хранят при
температуре 4±1 °С не более 30 сут.
170
Для приготовления питательной среды к 1 дм3 расплавленной и
охлажденной до 45-55 °С основы добавляют 5,0 см
жиренного молока, 100 см
концентрацией 30 г/дм
массовой концентрацией 1 г/дм
3
суспензии углекислого кальция массовой
3
и 2 см3 раствора бромкрезолового пурпурного
3
.
3
стерильного обез-
Среда Рогоза
В мерную колбу вместимостью 1,0 дм
на; 25,0 см
6,0 г калия фосфорнокислого однозамещенного; 2,0 г цитрата аммония; 25,0 г ацетата натрия; 1,32 см
3
дрожжевого экстракта; 20,0 г глюкозы; 1,0 см3 твина-80;
3
ледяной уксусной кислоты; 0,575 г
сульфата магния; 0,12 г сульфата марганца (MnSO
3
помещают 10,0 г пепто-
·2Н2О); 0,034 г
4
сульфата железа; доливают до метки дистиллированную воду, растворяют компоненты нагреванием на водяной бане и устанавливают рН
таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С
5,4±0,1. Среду разливают по 10 см
3
в стерильные пробирки и стерили-
зуют в автоклаве при температуре 121±1 °С в течение 15 мин. Пробирки с питательной средой хранят при температуре 4±1 °С не более 30 сут.
Среду Рогоза агаризованную готовят с добавлением 20,0 г агара.
После растворения компонентов среду разливают в стерильные колбы
и стерилизуют в автоклаве при температуре 121±1 °С в течение 15
мин. Готовую среду хранят при температуре 4±1 °С не более 30 сут.
Агар для лактобактерий
Среда включает следующие компоненты: сухая питательная
среда СКС – 33,0 г; пептон – 20,0 г; питательный агар сухой «КД»
(кормовых дрожжей) – 30,0 г; глюкоза – 18,0 г (декстроза – 20,0 г);
цитрат аммония – 2,0 г; калия дигидрофосфат – 6,0 г; твин-80 – 1,0 см
ледяная уксусная кислота – 1,32 см
тиллированная – до 1 дм
3
.
3
; раствор солей – 5,0 см3; вода дис-
3
;
Состав раствора солей: сульфат магния семиводного – 11,5 г;
сульфат марганца четырехводного – 2,86 г; сульфат железа (II) семиводного – 0,68 г; вода дистиллированная – 100,0 см
3
.
рН готовой питательной среды 5,5.
В дистиллированной воде растворяют последовательно сухую
питательную среду СКС, сахара, питательный сухой агар «КД», пептон, цитрат аммония, твин, добавляют раствор солей. Среду автоклавируют при 0,5 атм. в течение 20 мин, затем добавляют ледяную уксусную кислоту, доводят рН до 5,5, охлаждают до 45-50
о
С и проверя-