Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Биотехнологический потенциал почвенных микроорганизмов. Учебно-методическое пособие
.pdf
Рис. 4. Аквадистиллятор электрический ДЭ-10
По окончании работы отключить аппарат от сети, установить
тумблер на электрощите в положение «выключено», открыть сливной
кран и через 5–10 мин закрыть кран подачи воды из водопровода.
Ознакомление с работой ламинар-бокса. Принцип действия ламинар-бокса (рис. 5) основан на принудительной рециркуляции воздуха
в замкнутом объеме через фильтр из ультратонких волокон. Воздух,
проходя через фильтр, очищается от аэрогенных загрязнений и благодаря специальной конструкции фильтра подается в рабочую зону однонаправленным ниспадающим потоком. Часть нагнетаемого вентилятором в камеру повышенного давления воздуха (около 28 %) через НЕРАфильтр выбрасывается в помещение. Из-за искусственно созданного
разряжения происходит подсос воздуха в рабочую камеру через переднюю перфорацию рабочей столешницы. Благодаря этому устанавливается воздушная завеса, предотвращающая перекрестную контаминацию рабочий агент–оператор.
Порядок работы ламинар-бокса:
1. Подключить бокс к сети.
2. Взявшись за ручку на блоке УФО (ультрафиолетовое облучение), выдвинуть его на себя до упора. Опустить крышку блока УФО от
себя до горизонтального положения таким образом, чтобы лампа УФО
поместилась в металлический карман. Задвинуть блок УФО под рабочую столешницу. Данное положение является рабочим.
21
3. Для загрузки в рабочую камеру бокса оборудования и агентов
поднять лицевое стекло, которое легко фиксируется в верхнем положении с помощью амортизаторов. Это положение «загрузки». Данное положение стекла также используется для обработки и дезинфекции рабочей камеры бокса.
Рис. 5. Ламинар-бокс
4. Рабочим положением является положение, при котором стекло
вертикально зафиксировано и плотно прилегает к корпусу бокса. При
работе с патогенными агентами и микроорганизмами рабочее положение стекла является обязательным, так как обеспечивает защиту оператора и продукта.
5. Установить выключатель «сеть», расположенный на задней
стороне бокса на основании, в положение «вкл». Включить вентилятор.
6. После окончания работ необходимо переместить блок УФО в
первоначальное положение, для чего:
– выдвинуть блок УФО;
– поднять вертикально крышку блока, задвинуть блок до совме-
щения крышки блока с корпусом бокса.
22
Ознакомление с работой стерилизатора воздушного. Стерили-
затор воздушный (рис. 6) предназначен для воздушной стерилизации
хирургического инструмента, термостойких шприцев (с отметкой
200 °С) и игл к ним, стеклянной посуды и прочих изделий медицинского и бактериологического назначения. Стерилизатор может быть использован для дезинфекции и сушки объектов.
Порядок работы стерилизатора воздушного:
1. Установить выключатель в положение «I». На блоке управления загорится индикатор, информационное табло показывает текущую
температуру в стерилизационной камере.
2. В алгоритм управляющей программы стерилизатора заложена
возможность автоматического запуска программы. Если после включения произошел автоматический запуск программы, то для ее остановки
необходимо нажать на кнопку « » и удерживать ее в течение 3 с.
Рис. 6. Стерилизатор воздушный
3. Для выбора программы стерилизации нажать на кнопку «Р» (на
информационном табло попеременно отображаются установленная
температура и время выдержки) и выбрать нужную программу путем
нажатия на одну из кнопок – ▲ или ▼. Для выбора доступны четыре
предустановленные заводом-изготовителем режима работы, соответствующие требованиям ГОСТ 22649-83 [51].
4. Стерилизатор запоминает в энергонезависимой памяти номер
последней программы, запущенной на исполнение. Для ее повторного
запуска можно сразу нажать на кнопку « », не производя перебора
23
программ. В стерилизаторе имеется возможность установки пользовательских режимов работы с собственными параметрами.
Инструкция по установке пользовательских программ:
1. Установить режим просмотра программ с нулевыми параметрами. Удерживая кнопку «Р», включите стерилизатор. Как только все
сегменты индикатора загорятся, кнопку нужно отпустить. Блок управления перешел в режим просмотра программ с нулевыми параметрами,
который действует до выключения питания.
2. Войти в режим выбора программы и просмотра ее параметров.
На индикаторе отображается текущая температура в камере. Нажмите
кнопку «Р» – раздастся кратковременный звуковой сигнал, и блок
управления перейдет в состояние выбора программ. На индикаторе попеременно отображаются температура и время выдержки последней запущенной пользователем программы. Кнопками ▲ и ▼ переходим к
программе с нулевыми параметрами (на индикаторе попеременно отображаются температура «0.0» и время – «000») или к программе, параметры которой необходимо изменить. Если не удается перейти к нужной программе, значит, какая-то из программ была запущена на отработку. Необходимо остановить выполнение запущенной программы,
для чего нажмите и удерживайте в течение не менее 3 с кнопку «пуск».
3. Войти в режим изменения выбранной программы. Для изменения параметров выбранной программы удерживайте нажатой кнопку
«Р» в течение 3 с – блок управления перейдет в состояние редактирования выбранной программы. Если не удается войти в режим редактирования, значит, вы или пытаетесь редактировать программу с заводскими установками (выберите другую), или какая-то из программ была
запущена на отработку (остановите ее).
4. Установите температуру. Индикатор температуры мигает.
Кнопками ▲ и ▼ установите нужное значение температуры.
5. Установите время. Вновь удерживайте нажатой кнопку «Р» в
течение 3 с – блок управления перейдет в режим редактирования времени выдержки. Индикатор времени начинает мигать. Кнопками ▲ и
▼ установите нужное значение.
6. По окончании стерилизации открыть дверь и произвести выгрузку.
7. По окончании работы установить сетевой выключатель в положение «О».
Стерилизатор необходимо содержать в чистоте. Периодически
через 200 ч работы в процессе эксплуатации необходимо производить
24
дезинфекцию поверхностей химическим методом. В качестве дезинфицирующего агента следует применять 3 % раствор перекиси водорода с
добавлением 0,5 % моющего средства или 1 % раствор хлорамина.
Ознакомление с работой термостата. Термостат (рис. 7) пред-
назначен для получения и поддержания внутри рабочей камеры стабильной температуры, необходимой для проведения бактериологических и серологических исследований.
Рис. 7. Термостат
Порядок работы термостата:
1. Разместить объекты термостатирования на полках камеры и закрыть дверь. Объекты термостатирования следует загружать в таком
количестве и таким образом, чтобы не препятствовать свободному прохождению воздуха к каждому объекту.
2. Включить термостат в сеть с помощью сетевой вилки.
3. Включить переключатель «сеть» (находится на панели под дверью термостата), при этом на цифровом табло панели управления, находящейся на двери термостата, высвечивается текущая температура в камере термостата. Если заданная температура больше, чем температура
в камере, включатся индикатор «нагрев», находящийся на панели под
дверью термостата, и светодиодный индикатор на цифровом табло. Индикаторы сигнализируют о включении нагревателя.
25
4. При необходимости корректировки программы нажать клавишу «Р», при этом на цифровом табло высветится заданная ранее температура в мигающем режиме, а в крайнем правом разряде цифрового
индикатора высветится точка. Установить клавишами ▲ и ▼ на панели
управления требуемую температуру в рабочей камере, контролируя ее
по показаниям цифрового табло.
5. Для записи в память введенной информации и для включения
термостата в работу нажать клавишу «Р», при этом на цифровом табло
высветится текущая температура в камере, а точка в правом разряде
цифрового индикатора погаснет.
6. Введенная температура сохраняется в памяти термостата при
выключении питания. Индикатор «нагрев» может светиться непрерывно или в импульсном режиме.
7. При включении индикатора «авария», сигнализирующего об
аварийном превышении температуры (65 °C), необходимо выключить
термостат и принять меры к устранению неисправностей. До выхода на
установившийся тепловой режим температура в рабочей камере на непродолжительное время может превышать заданную.
8. При работе термостата переключатель «вент», находящийся
под дверью термостата, должен быть включен.
Ознакомление с работой хроматографа газового. Хроматогра-
фия (греч. chroma (chromatos) – цвет, краска и grapho – пишу) – физикохимический метод разделения и анализа смесей, основанный на распределении их компонентов между двумя фазами – неподвижной и подвижной, протекающей через неподвижную. Метод разработан в 1906 г.
М. С. Цветом, занимавшимся выяснением состава хлорофилла. Существуют следующие типы хроматографии: адсорбционная – основана на
различии сорбируемости разделяемых веществ адсорбентом, распределение компонентов смеси происходит за счет адсорбционного равновесия между неподвижной твердой и подвижной жидкой фазами; распре-
делительная – основана на распределении соединения между двумя фазами в соответствии с разной растворимостью компонентов смеси в неподвижной фазе и элюенте; ионообменная – основана на притяжении
между противоположно заряженными частицами, распределение компонентов смеси происходит за счет ионообменного равновесия между
ионообменной смолой (неподвижная фаза) и электролитом (подвижная
фаза); проникающая – основана на разной проницаемости молекул компонентов в неподвижную фазу, вещества разделяют в соответствии с
размерами и формой их молекул (разновидность проникающей
26
хроматографии – гельфильтрация); аффинная (биоспецифическая) –
распределение компонентов смеси происходит за счет равновесного
связывания макромолекулы с малой молекулой, по отношению к которой она проявляет высокую биологическую специфичность.
Современный газовый хроматограф (рис. 8) представляет собой
совокупность взаимодействующих систем, предназначенных для проведения анализа исследуемой смеси в оптимальном режиме с целью
определения ее качественного и количественного состава. Имеется
много приборов для газовой хроматографии (хроматографов), однако
по своим основным конструктивным особенностям все хроматографы
сходны.
Рис. 8. Хроматограф газовый Chrom-5
Основными блоками газового хроматографа являются следующие (рис. 9):
– блок подготовки газа-носителя, который подает постоянный поток газа-носителя;
– система ввода проб, которая обеспечивает ввод точного количества пробы в этот поток газа в начало колонки и ее быстрое испарение;
–колонка, которая установлена в термостате с регулированием
температуры (обычный диапазон регулируемой температуры от комнатной до 400 °С);
– детектор, который обеспечивает сигнал, пропорциональный составу газа-носителя (желательно, чтобы этот сигнал был нулевым, когда из колонки выходит чистый газ-носитель, и пропорциональным
концентрации любого вещества, отличающегося от газа-носителя).
27
Рис. 9. Схема хроматографа:
1 – источник газа-носителя; 2 – ввод пробы в поток газа-носи-
теля; 3 – хроматографическая колонка; 4 – система детектиро-
вания; 5 – термостат с регулированием температуры;
6 – система сбора и обработки данных
Контрольные вопросы
1. Правила поведения и работы в микробиологической лаборато-
рии.
2. Перечислите последовательность операций при работе с авто-
клавом.
3. Как изменяется температура насыщенного пара при повыше-
нии давления?
4. Что такое автоклавирование, пастеризация, тиндализация,
фламбирование?
5. Перечислите последовательность операций при работе с аква-
дистиллятором.
6. Правила работы в ламинар-боксе.
7. Перечислите последовательность операций при работе со сте-
рилизатором воздушным.
8. Перечислите последовательность операций при работе с термо-
статом.
9. Что такое хроматография? Перечислите виды хроматографии.
10. Расскажите о принципе работы газового хроматографа.
28
ПОДГОТОВКА К МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОМУ АНАЛИЗУ
Отбор и подготовка проб почвы
В почвах, предназначенных для сельскохозяйственных работ, содержание потенциально опасных химических, биологических и микробиологических веществ, а также уровень радиационного фона не
должны превышать предельно допустимые концентрации (ПДК). На
подготовительном этапе производят рекогносцировочные выезды на
исследуемый участок. Для этого необходимо иметь топографическое
описание местности, растительного покрова, почвы и ее физического
строения, основные данные, характеризующие климат обследуемой
местности. Участок делят на пробные площадки – части исследуемой
территории, характеризующиеся сходными условиями, предварительно
отмеченные и пронумерованные на карте [52]. Их выбирают на территории с однородным почвенным составом. При микробиологическом
исследовании анализ почв проводят в течение всего вегетационного периода [53]. Отбор точечных проб проводят из различных горизонтов
почвенного профиля (0–10, 10–20, 20–40, 40–50, 50–60 см) в соответствии с требованиями ГОСТ 17.4.3.01-83 [49] ножом или шпателем [54]
из прикопок, или почвенным буром.
Для того чтобы составить представление о микробиологическом
состоянии исследуемой территории (до 1000 м2) и для более полного
учета численности микроорганизмов в ризосфере конкретной сельскохозяйственной культуры, выделяют два участка по 25 м2, на каждом из
которых намечают пять точек: четыре по углам и одну в центре (рис.
10). Отбор точечных проб проводят с глубины 0–5 и 5–20 см ножом или
шпателем.
В ризосфере растений общее количество микроорганизмов учитывают в средней почвенной пробе, которую составляют путем смешивания 10–15 отдельных образцов, отобранных вместе с растениями.
Каждый образец представляет собой монолит размером 10×10 см. Избыток почвы удаляют. Почвенные пробы помещают стерильную тару –
полиэтиленовые или пергаментные мешки, широкогорлые банки. Средние смешанные образцы почвы должны весить не менее 1 кг. Отобранные образцы обязательно пронумеровывают и регистрируют в журнале
с указанием даты и места взятия образца, порядкового номера пробы,
типа почвы, рельефа местности, целевого назначение территории, вида
сельскохозяйственной культуры [55]. Образцы укладывают
29
Рис. 10. Схема отбора почвенных проб методом «конверта»
в деревянный ящик, имеющий гнезда для каждой пробы, на тару наклеивают этикетку с вышеуказанной информацией и доставляют в лабораторию. Допускается хранение почвенных образцов в холодильнике в течение 48 ч при температуре 2–4 °С. Замораживать образцы нельзя [56].
Обработка почвенного образца: почву высыпают на чистую бумагу или кальку слоем 1–2 см, крупные комки измельчают, отбирают
мелкие включения (корни растений, насекомых и т. п.), очищенную
почву растирают в ступке и просеивают через сито (диаметр 2 мм).
Почву, приставшую к корням растений (ризосферную почву), стряхивают на стерильное стекло или бумагу. Отдельные образцы объединяют, просеивают через сито (диаметр 2 мм), удаляют корешки и тщательно перемешивают. Затем на стерильном часовом стекле взвешивают 10 г почвы. Чтобы при взвешивании в почву не попали бактерии
из воздуха, часовое стекло накрывают другим часовым стеклом. Часовые стекла, шпатели, фарфоровые чашки предварительно стерилизуют
фламбированием.
Пробы для дополнительных анализов высушивают до воздушносухого состояния в хорошо проветриваемом помещении. Через 3–4 сут
почва достигает нужного состояния, затем ее хранят в матерчатых мешочках, картонных коробках, стеклянной таре с указанием необходимой информации [57, 58]. Воздушно-сухие образцы почвы хранят при
комнатной температуре не более 4 мес. В этом случае перед началом
эксперимента навески сухой почвы по 25 г помещают в 300 мл стеклянные конические колбы, увлажняют до 50 % от полной полевой влагоемкости (ППВ), закрывают листами полиэтиленовой пленки для предотвращения пересыхания почвы и поддержания аэробных условий, а
30
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]