Нейтрального и слабоосновного характера:

Условия анализа:

• Сорбент – закрепленный слой силикагеля.

• Система растворителей: хлороформ ацетон (9:1).

• Время насыщения камеры парами системы – 15-20 мин.

• Длина пробега системы растворителей по пластинке 10 см.

На стартовую линию хроматографической пластинки наносят:

• Полоса А – растворы стандартов (например, барбамила, антипирина);

• Полоса Б – 1/25 часть эфир. экстракта, полученного из водн. извлечения при рН=2;

• Полоса В – стандарт (раствор циклобарбитала);

• Полоса Г – 1/10 часть эфир. экстракта, полученного из водн. извлечения при рН=2.

Реагенты-проявители:

А, Б и В обрабатывают 5% раствором сульфата ртути (II) и 0,1% раствором дифенилкарбазона в хлороформе. Производные барбитуровой кислоты проявляются в виде фиолетовых пятен. Пластинку нагревают горячим феном (~50°С). Пятна обесцвечиваются.

Затем эти же полосы обрабатывают 10% раствором FeCl3. При этом проявляются производные пиразола, салициловой и бензойной кислот;

При последующей обработке этих полос модифицированным реактивом Драгендорфа и 10% раствором серной кислоты обнаруживаются вещества основного характера, такие как кофеин, производные 1,4-бензодиазепина и др.

Все вещества делятся на 3 хроматографические зоны в зависимости от значения величины Rf

Полоса Г на пластинке используется для соскабливания сорбента (заштрихованная часть), элюирования веществ подходящим р-лем (1 зона – метанолом; 2 и 3 зоны – ацетоном) и последующего хроматографического исследования в частных системах р-лей

ТСХ-СКРИНИНГ В АНАЛИЗЕ ВЕЩЕСТВ ОСНОВНОГО ХАРАКТЕРА

Условия анализа:

• Сорбент – закрепленный слой силикагеля.

• Система растворителей: хлороформ – диоксан – ацетон – 25% раствор аммиака

(45: 47,5 : 5 : 2,5)

• Время насыщения камеры парами системы – 15 мин.

• Пробег растворителя по пластинке – 10 см.

На стартовую линию хроматографической пластинки наносят:

• Полоса А – растворы стандартов (например, атропина и новокаина);

• Полоса Б – 1/25 часть хлороформного экстракта, полученного из водного извлечения при рН=8-10;

• Полоса В – раствор стандарта этаперазина;

• Полоса Г – 1/10 часть хлороформ. экстракта, получ. из водн. извл-я при рН=8-10.

Реагенты-проявители: слой сорбента полос А, Б, В (при закрытой полосе Г) последовательно обрабатывают:

• 10% раствором FeCl3. Возможно обнаружение производных фенотиазина и пиразола;

• 5% раствором NaNO2, содержащим 3% хлорной кислоты. Обнаруживают ярко выраженные окрашенные пятна производных фенотиазина;

• 10% раствором H2SO4 и просматривают в УФ-лучах. Возможно обнаружение хинина по голубой флуоресценции;

• Модифицированным реактивом Драгендорфа. Вещества основного характера проявляются в виде оранжевых пятен на бледно-желтом фоне.

Соединения основного характера делятся на пластинке на 4 хроматографические зоны, в зависимости от значения Rf.

Полосу Г (заштрихованная часть) соскабливают, элюируют соответствующим р-лем

Если ни в одной из зон ни с одним из реактивов пятна на пластинках не обнаружены, делают заключение о ненахождении в объекте исследуемых веществ. При обнаружении пятна в какой-либо из зон проводят основное исследование с использованием подтверждающих реакций и методов

ТСХ-СКРИНИНГ В ВАРИАНТЕ «Toxi-Lab АВ»

Разновидности:

• «Toxi-Lab А» используется для обнаружения веществ основного, нейтрального характера (опиаты, метадон, амфетамины и др.);

• «Toxi-Lab В» используется для обнаружения веществ кислотного и нейтрального характера (барбитураты, органические кислоты и др.);

• «Toxi-Lab Cannabinoid» используется для обнаружения тетрагидроканнабинола и его производных.

Стадии обнаружения:

• Экстрагирование из мочи при рН=4,5 веществ кислотного и нейтрального характера (барбитураты и др.), при рН=9 веществ основного и нейтрального характера (опиаты, амфетамины, метадон и др.);

• Концентрирование экстрактов на сорбирующем материале

• Хроматографирование с использованием специальных пластин, имеющих углубления на линии старта, в которые вставляются диски с сорбированными веществами

• Обнаружение веществ на пластинах проводится путем последовательного погружения их в сосуды, заполненные специальными хромогеннымисосгавами (реактив Марки-Манделина, модифицированный реактив Драгендорфа и др.); также облучение пластинок УФ-светом

Перспективы использования ВЭЖХ: отличительной особенностью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) является использование сорбентов с размером зерен 3-10 мкм, что обеспечивает быстрый массоперенос при очень высокой эффективности разделения.

Важнейшее преимущество ВЭЖХ – возможность исследования практически любых объектов без каких-либо ограничений по их физико-химическим свойствам, например, по температурам кипения или молекулярной массе.