37.Сердечные гликозиды: качественный химический и биологический анализ

Качественные реакции по обнаружению сердечных гликозидов. Сегодня еще не существует достоверных методов химического анализа сердечных гликозидов, нет и общепризнанных химических способов выявления молекул этих веществ. Поэтому используют качественные реакции на те или иные части молекулярной структуры кардиогликозидов.

Реакции на 5-членное лактонное кольцо.

Реакция Балье. Желтая пикриновая кислота в щелочной среде (пикрат натрия) при взаимодействии с сердечными гликозидами дает оранжево-красное окрашивание. Теперь эта реакция положена также в основу фотоколориметрического количественного определения данных веществ. Следовательно, реакцию Балье можно считать одной из основных по выявлению сердечных гликозидов.

Реакция Легаля. Сердечные гликозиды при взаимодействии с нитропруссидом натрия окрашиваются в оранжево_красный цвет.

Реакция Кедде. Сердечные гликозиды с 3,5-динитробензойной кислотой в щелочной среде окрашиваются в красно-фиолетовый цвет. Реакции на стероидный «скелет» молекулы.

Реакция Либермана — Бурхардта. Упаренный сухой остаток извлечения из ЛРС растворяют в ледяной уксусной кислоте и добавляют смесь уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты (50 : 1). Через некоторое время (!) на краю пробирки появляется окраска, изменяющаяся от розовой до зеленой и синей.

Реакция Розенгейма. Сухой остаток извлечения растворяют в хлороформе и смешивают с 90 % водным раствором трихлоруксусной кислоты. Появляется окраска, изменяющаяся от розовой до лиловой и синей.

Реакции на дезоксисахара.

Реакция Келлер_Килиани. Сухой остаток извлечения из ЛРС растворяют в ледяной уксусной кислоте (с каплей Fe2(SO4)3) и по стенке пробирки осторожно вливают 1—3 мл концентрированнойH2SO4 (с каплей Fe2(SO4)3). На границе слоев образуется бурое кольцо, а верхний слой через некоторое время окрашивается в сине-зеленый цвет. Эта реакция положительна только в случае, если дезоксисахар в молекуле кардиогликозида находится в свободном состоянии или занимает крайнее (не прикрытое другими моносахарами) положение в гликозильной цепочке.

Реакция Пезеца. При нагревании раствора кардиогликозида с ксантгидролом (или иначе дибензо-пиранолом) в присутствии уксусной кислоты и при последующем добавлении нескольких капель H2SO4 (или H3PO4) происходит красное окрашивание.

Реакция с нитрофенилгидразином. Если известно, что дезоксисахара в кардиогликозиде «закрыты», то проводят предварительный гидролиз их с помощью трихлоруксусной кислоты. Появляющийся свободный дезоксисахар выявляют в реакции с нитрофенилгидразином и натрия гидроксидом. Раствор при этом дает голубую окраску.

Реакция на 6_членное лактонное кольцо.

Реакция Татье. К спиртовому извлечению прибавляют 2—3 капли концентрированной хлористоводородной кислоты с ионами Fe3+ и нагревают. Агликоны буфадиенолидов дают красное окрашивание.

Биологический анализ(определение активности ЛРС) Активность устанавливают, сравнивая опытный образец с препаратом стандартом (кристаллическим сердечным гликозидом с известным количеством единиц действия), и выражают в особых единицах действия. Таковыми являются кошачьи единицы действия (КЕД), голубиные единицы действия (ГЕД) или лягушачьи единицы действия (ЛЕД) — все зависит от того, чьи сердца используют для испытания активности ЛРС. В результате этих испытаний устанавливают наименьшие дозы стандарта и испытуемого образца, которые вызывают систолическую остановку сердца. Валор – кол-во единиц действия в пересчете на 1 г препарата.