- •1. Предмет и задачи микробио. Опред предмета микробио, задачи мед микробио, основные разделы мед микробио, методы, применяемые в микробио, значение микробио в работе провизора.
- •3. Положение микробов среди живых существ!!!!!!!!!!!!.
- •4. Основные формы бак. Морфология, ультраструктура, химич состав бактериал кл. Основные отличия прокариотов от эукариотов. Протопласты, сферопласты, l-формы бак.
- •8. Микроскопических грибов. Положение среди других микроорганизмов. Морфологические особенности. Основные представители.
- •9. Спирохеты. Положение среди других микроорг. Морфологич особенности. Основные представители.
- •10. Простейшие. Положение среди других микроорганизмов. Морфологические особенности. Основные представители.
- •11. Риккетсии. Положение среди других микроорганизмов. Морфологические особенности. Основные представители.
- •12. Методы приготовления препаратов для изучения морфологии микробов в живом и в окрашенном состоянии. Этапы приготовления мазка. Простые и сложные методы окраски микробов.
- •13. Химич состав бактериал кл и отдельных её структур. Биологич роль химич компонентов бак, их локализация в кл (вода и минерал в-ва; белки, нуклеин к-ты, углеводы, липиды).
- •14. Питание бак. Особенности процесса питания бак, типы питания, механизмы переноса в-в в бактериал кл
- •15. Питательные среды. Требования, предъявляемые к питательным средам. Классификация питательных сред.
- •20. Методы выделения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий.
- •22. Вирусы. Культивирование вирусов.
- •23. Вирусы бактерий (бактериофаги). История открытия: наблюдения н.Ф. Гамалеи, опыты д'Эрелля. Строение бактериофага. Применение бактериофагов в медицине. Препараты бактериофагов.
- •24. Влияние температуры на рост и размножение микробов. Характеристика групп: психрофилы, мезофилы, термофилы. Действие высоких температур на микроорганизмы.
- •25. Определение понятий: асептика, антисептика, дезинфекция, стерилизация.
- •26. Стерилизация высокой температурой: методы, аппаратура, режим стерилизации, стерилизуемые материалы. Методы контроля стерилизации.
- •27. Явления симбиоза и антагонизма в мире микробов.
- •28. Антибиотики. Определение понятия «антибиотик», отличие от других лекарственных средств, от дезинфицирующих веществ. Основоположник химиотерапии. Химиотерапевтический индекс
- •29. Антибиотики. Определение понятия. Классификация по способу получения, по спектру действия, по химическому строению. Типы и механизмы действия природных антибиотиков.
- •31. Побочные явления при антибиотикотерапии (сущность, примеры).
- •32. Экология микробов. Микрофлора воды, воздуха, почвы. Роль воды, воздуха, почвы как факторов передачи патогенных микробов.
- •33. Микробиологический контроль питьевой водопроводной воды.
- •35. Исследование лекарственных средств, стерилизуемых в процессе производства: методика исследования, оценка результатов. Исследование на пирогенность.
- •37. Микробиологический контроль аптечной посуды, инвентаря, оборудования, рук персонала. Исследование воздуха в аптечных учреждениях. Отбор проб, методики исследования, оценка результата.
- •39. Инфекционный процесс – определение понятия, условия развития. Патогенность и вирулентность микроорганизмов, единицы измерения вирулентности. Факторы вирулентности.
- •42. Иммунитет. Определение. Виды иммунитета в зависимости от способа формирования, от агента, против которого он направлен.
- •43. Врожденный иммунитет – понятие, основные характеристики. Фагоцитоз: клетки, участвующие в фагоцитозе, стадии фагоцитоза (перечислить, охарактеризовать). Завешенный и незавершенный фагоцитоз.
- •44. Врожденный иммунитет – понятие, основные характеристики. Гуморальные факторы защиты: комплемент, лизоцим, интерферон – химическая природа, отношение к температуре, основные функции.
- •46. Антитела (иммуноглобулины): состав и строение, классы иммуноглобулинов.
- •47. Аллергия (гиперчувствительность немедленного типа) – определение понятия. Анафилактический шок, сывороточная болезнь. Способ введения лечебных гетерологичных сывороток по Безредко.
- •48. Иммунофармакологические средства. Вакцины, определение понятия, виды вакцин и их характеристика.
- •49. Иммунные сыворотки. Антитоксические сыворотки, приготовление, применение (дозировка). Иммуноглобулины, гомологичные и гетерологичные – способ получения, особенности применения.
- •50. Реакции иммунитета: агглютинации (ингредиенты, механизм, способы постановки, результат, практическое применение).
- •51. Реакции иммунитета: преципитации (ингредиенты, механизм, способы постановки, результат, практическое применение).
- •52. Реакции иммунитета: реакция связывания комплемента (рск), иммунофлюоресценции, иммуноферментный анализ (ингредиенты, механизм, способы постановки, результат, практическое применение).
- •82. Возбудитель герпес-вирусной инфекции: таксономическое положение, структура, типы, персистенция возбудителя в организме, источник и механизмы заражения, лечебные препараты.
22. Вирусы. Культивирование вирусов.
Вирусы – облигатные внутриклеточные паразиты. Они размножаются в живых клетках и не растут на искусственных питательных средах, поэтому методы культивирования вирусов отличаются от методов культивирования бактерий.
Методы культивирования.
На лабораторных животных. Заражают животных (подкожно, внутримышечно, внутрибрюшино), которые чувствительны к определенным вирусам: хорьков - вирусом гриппа, кроликов - вирусом бешенства, обезьян - вирусом полиомиелита. Индикация (обнаружение) вируса проводится по признакам заболевания. Недостаток метода - не все вирусы можно культивировать на животных, например, животные невосприимчивы к вирусам человека.
В куриных эмбрионах. Заражают куриный эмбрион (аллонтоисная полость, хорион-аллонтоисная оболочка, амниотическая полость, желточный мешок, сам эмбрион). Куриный эмбрион – очень удобен. Он защищен от попадания других микробов (стерильный), техника работы с ним проста, можно накопить большое количество вирусов. Индикация: а) по специфическим поражениям на хорион-аллантоисной оболочке, по гибели эмбриона, б) по реакции склеивания эритроцитов – реакции гемагглютинации (РГА). Недостатки метода: а)не все вирусы (вирус полиомиелита, вирус ящура) можно вырастить в куриных эмбрионах; б) невозможно обнаружить микроб без вскрытия эмбриона; в) в нем много загрязняющих белков и других соединений.
В тканевых культурах. Тканевые культуры или клеточные культуры – клетки, выращенные вне организма на искусственных питательных средах. Для их приготовления используют чаще всего эмбриональные и опухолевые ткани. Метод тканевых культур разработан Дж. Эндерсом в 50-е годы. Большинство вирусов способно размножаться в культурах клеток. Для каждого вируса можно подобрать наиболее чувствительную культуру клеток.
Бывают культуры растущих тканей и переживающих тканей (утративших способность к росту).
Существуют три типа растущих тканевых культур:
а) однослойные тканевые культуры – клетки прикрепляются и растут в виде сплошного монослоя по поверхности стекла лабораторной посуды;
б) культуры суспензированных клеток – клетки растут и размножаются во взвешенном состоянии;
в) органные культуры - кусочки органов животных и человека, выращиваемые вне организма.
Однослойные культуры – основные культуры. Различают: а) первичные – клетки этой культуры делятся один раз, поэтому каждый раз необходимо вновь получать культуру ткани; чаще всего используют эмбриональные ткани и опухолевые ткани взрослого человека;
б) полуперевиваемые – клетки делятся до 50 раз, сохраняя диплоидный набор хромосом; их можно перевивать несколько раз; используют диплоидные клетки человека (фибробласты человеческого эмбриона, диплоидные клетки легких человека);
в) перевиваемые – клетки культуры постоянно делятся в условиях in vitro (вне организма), поэтому их можно перевивать непрерывно; их готовят из линий клеток, которые хорошо размножаются в течение многих лет; чаще всего эти культуры получают из опухолевых клеток. Получено около 200 штаммов таких клеток: штамм L (из культуры мышиных фибробластов), штамм HeLa (из карциномы шейки матки), штамм Hep-3 (из лимфоидной карциномы) и т.д.
Первичные и перевиваемые линии клеточных культур могут быть загрязнены неизвестными вирусами, в том числе онкогенными, это ограничивает их применение, особенно в производстве вакцин.
Все работы с культурами клеток требуют строжайшего соблюдения правил асептики. К культуре клеток добавляют антибиотики против бактериального загрязнения.
Способы обнаружения (индикации) вирусов в тканевой культуре. вирусы можно обнаружить следующим образом.
По цитопатическому действию (ЦПД). В результате размножения вирусов в клетках происходят морфологические изменения клеток (вакуолизация цитоплазмы, деструкция митохондрий, округление клеток). Часть клеток погибает и отслаивается от стекла. Вместо сплошного монослоя остаются отдельные клеточные островки. ЦПД обнаруживают под микроскопом (´8). По ЦПД можно не только обнаружить, но и идентифицировать вирусы. Например, вирус полиомиелита вызывает мелкозернистую деструкцию клеток; аденовирусы вызывают образование скоплений клеток в виде виноградных гроздьев; вирус кори вызывает образование симпластов – многоядерных клеток.
По образованию включений. Включения - скопления вирусов в клетках. Они имеют различную форму и размеры. Их окрашивают по Романовскому-Гимзе или флюорохромами и наблюдают под микроскопом.
По гемадсорбции. Клетки, зараженные вирусами, могут адсорбировать эритроциты. Вирусы выходят на поверхность клеток и связывают эритроциты. Эритроциты добавляют к культуре и через некоторое время промывают физиологическим раствором. На поверхности клеток под микроскопом видны прилипшие эритроциты в виде разнообразных фигур;
По реакция гемагглютинации. Гемагглютинация - склеивание эритроцитов под влиянием вирусов. Эритроциты добавляют к культуральной жидкости. Если в ней есть вирусы, то эритроциты склеиваются.
По "цветной" реакции. Клетки культуры выращиваются на жидкой среде с индикатором (метиленовым красным). Индикатор изменяет цвет (с красного на желтый) под действием кислых продуктов метаболизма при росте нормальных клеток. Если клетки заражены вирусом, то нормальный метаболизм нарушается, кислые продукты не образуются и индикатор не изменяет цвет. Таким образом, признаком размножения вирусов в клетках культуры является сохранение красного цвета среды.