51. Реакции иммунитета: преципитации (ингредиенты, механизм, способы постановки, результат, практическое применение).

Реакция преципитации (РП) – это осаждение растворимого антигена при действии антител в присутствии электролита. Видимый эффект реакции (феномен преципитации) – помутнение (образование мутного кольца или осадка – преципитата). РП применяют для обнаружения неизвестного антигена при ряде инфекционных заболеваний: при сибирской язве, туляремии, менингите, оспе.

Способы постановки РП. 1. Реакция кольцепреципитации – проводится в специальных преципитационных пробирках (диаметр – 0,4-0,5 см, высота – 7-8 см). В пробирку вносят 0,2 – 0,3 мл преципитирующей сыворотки и по стенке длинным носиком пастеровской пипетки осторожно наслаивают такое же количество преципитиногена. Затем осторожно из горизонтального положения пробирки ставят вертикально.

Учет результатов реакции проводят по появлению белого кольца на границе антиген-антитело. При положительной реакции наблюдается образование такого кольца. В этом случае антиген соответствует антителу и происходит их связывание. Если в качестве преципитиногена используют прокипяченные и профильтрованные водные экстракты органов и тканей, то реакция называется реакцией термокольцепреципитации (например, при диагностике сибирской язвы).

2. Реакция преципитации в геле – проводится в чашках Петри или на предметных стеклах, куда помещают слой агарового геля. При застывании геля в нем вырезают лунки, в которые помещают антигены или антитела, или и то и другое. Различают 2 метода РП в геле: а) метод простой (радиальной) иммунодиффузии: один из компонентов реакции иммунитета (антиген или антитело) помещают в лунку, а другой компонент – смешивают с агаром; при положительном результате (антиген соответствует антителу) вокруг лунки образуется кольцо преципитата;

б) метод двойной иммунодиффузии: и антитело и антиген помещают в отдельные лунки, они диффундируют в агаровом геле навстречу друг другу; при положительном результате на месте встрече антитела и антигена образуются линии преципитации

52. Реакции иммунитета: реакция связывания комплемента (рск), иммунофлюоресценции, иммуноферментный анализ (ингредиенты, механизм, способы постановки, результат, практическое применение).

РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА Принцип реакции связывания комплемента (РСК) основан на способности комплемента вызывать цитолиз по классическому пути. Индикатором искомого взаимодействия антигена и антител является гемолитическая система - смесь эритроцитов (например, барана) с антиэритроцитарной сывороткой. Если происходит искомое взаимодействие антигена с антителами, образуются иммунные комплексы, которые связывают комплемент, внесенный в реакционную смесь. В этом случае эритроциты гемолитической системы, добавленные на 2-м этапе, остаются интактными. В случае отсутствия специфичности антител к антигену иммунные комплексы не образуются, комплемент остается в реакционной смеси и затрачивается на лизис индикаторных эритроцитов.

Ингредиенты: АГ, AT и комплемент (первая система), эритроциты барана и гемолитическая сыворотка (вторая система).

Механизм и способы постановки: В фазе I (специфической) реакции связывания комплемента ( РСК ) искомый Аг (или AT) реагирует с диагностической антисывороткой (или Аг-диагностикумом) и комплементом. Образующийся комплекс Аг-АТ связывает комплемент.

В фазе II (индикаторной) реакции связывания комплемента ( РСК ) определяют наличие свободного комплемента внесением в реакционную среду гемолитической системы — эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей AT к ним. Если Аг и AT не соответствуют друг другу и не образуют иммунных комплексов, то связывания комплемента не происходит. В этом . случае свободный комплемент взаимодействует с компонентами гемолитической системы, фиксируясь на комплексе эритроцит-антиэритроцитарное AT. Следствие этого — гемолиз индикаторных клеток (феномен «лаковой крови») — реакцию считают отрицательной.

Если в фазе I реакции связывания комплемента ( РСК ) AT и Аг соответствуют друг другу, то образующиеся иммунные комплексы связывают комплемент, разрушения эритроцитов после внесения гемолитической системы не наблюдают и реакцию считают положительной.

Реакция иммунофлюоресценции, или метод Кунса Различают три основные разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом. Реакция Кунса является методом экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител.

Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.

Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген—антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьеи диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.

В качестве метки используются светящиеся флюорохром-ные красители (изотиоционат флюорисцеина и др.).

Существуют различные модификации РИФ. Для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний — для выявления микробов или их антигенов в исследуемом материале применяется РИФ по Кунсу.

Выделяют два метода РИФ по Кунсу: прямой и непрямой.

Компоненты прямой РИФ: 1) исследуемый материал (испражнение, отделяемое носоглоткой и др.); 2) меченая специфическая иммунная сыворотка, содержащая АТ-ла к искомому антигену; 3) изотонический раствор хлорида натрия.

Мазок из исследуемого материала обрабатывают меченой антисывороткой. Происходит реакция АГ-АТ. При люминесцентном микроскопическом исследовании в том участке, где локализуются комплексы АГ-АТ, обнаруживают флюоресценцию — свечение.

Компоненты непрямой РИФ: 1) исследуемый материал; 2) специфическая антисыворотка; 3) антиглобулиновая сыворотка (АТ-ла против иммуноглобулина), меченая флюорихромом; 4) Изотонический раствор хлорида натрия.

Мазок из исследуемого материала сначала обрабатывают иммунной сывороткой к искомому антигену, а затем — меченой антиглобулиновой сывороткой.

Светящиеся комплексы АГ-АТ — меченые АТ обнаруживаются при помощи люминесцентного микроскопа. Преимущество непрямого метода состоит в том, что нет необходимости приготовления широкого набора флюоресцирующих специфических сывороток, а применяется лишь одна флюоресцирующая антиглобулиновая сыворотка.

Также выделяют 4-компонентную разновидность непрямой РИФ, когда дополнительно вводится комплемент (сыворотка морской свинки). При положительной реакции образуется комплекс АГ-АТ — меченые — АТ-комплемент.

Иммуноферментный анализ (ИФА) - наиболее распространенный современный метод, используемый для диагностики вирусных, бактериальных, протозойных инфекций. Модификаций ИФА очень много, но широко используется его твердофазный неконкурентный вариант. На 1-м этапе проводят взаимодействие антигена с антителами, на 2-м этапе образовавшийся иммунный комплекс обрабатывают антииммуноглобулиновой сывороткой, меченной ферментом. Проявляют реакцию, добавляя субстрат для фермента, а затем - краситель-хромоген. При положительной реакции наблюдается изменение цвета раствора.

Иммуноферментный анализ (ИФА). Как и другие реакции иммунитета, ИФА используется 1) для определения неизвестного антигена с помощью известных антител или 2) для выявления антител в сыворотке крови больного с помощью известного антигена. Особенность реакции в том, что известный ингредиент реакции соединен с ферментом, и его присутствие определяется с помощью субстрата, который при действии фермента окрашивается.

Наиболее широко применяется твердофазный ИФА. 1) Обнаружение антигена. Первый этап - адсорбция специфических антител на твердой фазе, в качестве которой используют полистироловые или поливинилхлоридные поверхности лунок пластиковых панелей.

Второй этап - добавление исследуемого материала, в котором предполагается наличие антигена. Антиген связывается с антителами. После этого луночки промывают.

Третий этап - добавление специфической сыворотки, содержащей антитела против данного антигена, меченые ферментом. В качестве фермента используют пероксидазу или щелочную фосфатазу. Меченые антитела присоединяются к антигенам, а их избыток удаляется промыванием. Таким образом, в случае присутствия в исследуемом материале антигена на поверхности твердой фазы образуется комплекс антитело-антнген-антитела, меченные ферментом. Для обнаружения фермента добавляют субстрат. Для пероксидазы субстратом служит ортофенилдиамин в смеси с Н2О2 в буферном растворе. При действии фермента образуются продукты, имеющие коричневую окраску, интенсивность которой позволяет количественно определить результаты опыта фотометрированием.

2) Обнаружение антител. Первый этап - адсорбция специфических антигенов на стенках лунки. Обычно в коммерческих системах антигены уже адсорбированы на поверхности твердой фазы - в лунках или на пластиковых шариках.

Второй этап - добавление исследуемой сыворотки. При наличии антител образуется комплекс антиген-антитела.

Третий этап - после отмывания лунок добавляют антиглобулиновые антитела (антитела против глобулинов человека), меченные ферментом.

Результаты реакции учитывают, как указано выше.

В качестве контролей используют образцы заведомо положительные и заведомо отрицательные.

Разрабатываются "безреагентные" системы для ИФА, в которых все компоненты реакции соединены с поверхностью полимера. Для проведения анализа необходимо внести исследуемый материал и наблюдать изменение окраски.

ИФА применяется при многих инфекционных заболеваниях, в частности, при ВИЧ-инфекции, при вирусных гепатитах.

53. Реакции с применением меченых антител и антигенов: реакция иммунофлюоресценции (прямой и непрямой методы); иммуноферментный анализ (ИФА), радиоиммунный анализ (РИА), иммуноблоттинг, иммунная электронная микроскопия - принципы постановки и практическое применение.

Реакция иммунофлюоресценции - РИФ (метод Кунса). Различают три разновидности метода прямой, непрямой, с комплементом. Реакция Кунса является методом экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител. Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета. Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.

Реакции иммунитета с использованием меченых антигенов и антител основаны на том, что один из ингредиентов, участвующих в реакции (антигены ли антитела), соединяют с какой-либо меткой, которую легко можно обнаружить. В качестве метки используют флюорохромы (РИФ), ферменты (ИФА), радиоизотопы (РИА), электронноплотные соединения (ИЭМ).

Иммуноферментный анализ (ИФА), как и другие реакции иммунитета, используется: 1) для определения неизвестного антигена с помощью известных антител или 2) для выявления антител в сыворотке крови с помощью известного антигена. Особенность реакции в том, что известный ингредиент реакции соединён с ферментом (например, (пероксидазой). Присутствие фермента определяют с помощью субстрата, который при действии фермента расщепляется и среда окрашивается. Наиболее широко применяется твёрдофазный ИФА. 1. Обнаружение антигена. Первый этап - адсорбция специфических антител на твёрдой фазе, в качестве которой используют полистироловые или поливинилхлоридные поверхности лунок пластиковых панелей. Второй этап - добавление исследуемого материала, в котором предполагается наличие антигена. Антиген связывается с антителами. После этого лунки промывают. Третий этап - добавление специфической сыворотки, содержащей антитела против данного антигена, меченые ферментом. Меченые антитела присоединяются к антигенам, а их избыток удаляется промыванием. Таким образом, если в исследуемом материале имеются антигены, на поверхности твёрдой фазы образуется комплекс антитела-антиген-антитела, меченные ферментом. Для обнаружения фермента добавляют субстрат. Для пероксидазы субстратом служит ортофенилендиамин в смеси с Н2О2 в буферном растворе. Под действием фермента образуются продукты, имеющие коричневую окраску. 2. Обнаружение антител. Первый этап - адсорбция специфических антигенов на стенках лунок. Обычно в коммерческих тест-системах антигены уже адсорбированы на поверхности лунок. Второй этап – добавление исследуемой сыворотки. При наличии антител образуется комплекс антиген-антитело. Третий этан - после отмывания в лунки добавляют антиглобулиновые антитела (антитела против человеческих глобулинов), меченые ферментом. Результаты реакции оценивают, как указано выше. В качестве контролей используют образцы заведомо положительные и заведомо отрицательные, которые имеются в коммерческих системах.

ИФА применяется при многих инфекционных заболеваниях, в частности, при ВИЧ-инфекции, при вирусных гепатитах. Иммуноблоттинг - это разновидность ИФА (сочетание электрофореза и ИФА). Методом электрофореза в геле разделяют биополимеры, например, антигены вируса иммунодефицита человека. Затем переносят разделённые молекулы на поверхность нитроцеллюлозы в том же порядке, в каком они находились в геле. Процесс переноса называется блоттинг, а полученных отпечаток - блот. На этот отпечаток действуют исследуемой сывороткой. Затем добавляют сыворотку против глобулинов человека, меченую пероксидазой, затем субстрат, который под действием фермента расщепляется и среда приобретает коричневый цвет. Образуются коричневые полосы в тех местах, где антитела соединились с антигенами. Метод позволяет обнаружить антитела к отдельным антигенам вируса.

Радиоиммунный анализ (РИА). Метод позволяет определить количество антигена в исследуемой пробе. Сначала к иммунной сыворотке присоединяют материал, предположительно содержащий антиген, затем - известный антиген, меченый радиоизотопом, например 𝐼125 В результате происходит связывание определяемого (немеченого) и известного меченого антигена с ограниченным количеством антител. Так как меченый антиген добавляется в определённой дозе, то можно определить, какая его часть связалась с антителами, а какая осталась свободной из-за конкуренции с немеченым антигеном и была удалена. Количество меченого антигена, связавшегося с антителами, определяют с помощью счётчика. Оно обратно пропорционально количеству определяемого антигена.

Иммунная электронная микроскопия (ИЭМ). К антигену, например, к вирусу гриппа, присоединяется специфическая антисыворотка, меченая электроноплотным веществом. В качестве метки применяют металлосодержащие белки (ферритин, гемоцианин) или коллоидное золото. При микроскопии в электронном микроскопе делают фотографии, на которых видны вирионы гриппа с присоединившимися к ним тёмными точками - молекулами меченых антител.

54. Возбудители брюшного тифа и паратифов: название по-латыни, морфология, отношение к окраске по Граму, питательные среды для культивирования, ферментативные свойства, антигены, механизм заражения, материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для профилактики и лечения.

Семейство- Enterobacteriaceae Род- Salmonella Вид – S. Typhi, S. Paratyphi A, S.Paratyphi B

Морфология – грамотрицательные палочки с закругленными концами, которые в мазках располагаются беспорядочно. Не образуют спор и капсулу, подвижны, перитрихи.

Питательные среды для культивирования – среда Клиглера. Хорошо растут на простых питательных средах, с добавлением желчи. Средами накопления являются желчный и селенитовый бульон.

Ферментативные свойства – биохимически активны. Расщепляют глюкозу, продуцируют сероводород. Не расщепляют лактозу и не образуют индол. ферментируют углеводы с образованием кислоты или кислоты и газа

Антигены – сальмонеллы обладают соматическим О-антигеном, жгутиковым Н-антигеном, некоторые – К-антигеном. Согласно классификации ФюКауффмана-П.Уайта, сальмонеллы подразделяются на серологические группы по общности строения О-антигена, внутри серогруппы – на серовары, в соответствии с различиями в Н-антигена. Некоторые серовары сальмонелл имеют полисахаридный Vi-антиген, являющийся разновидностью К-антигена. Этот антиген служит рецептором для бактериофагов.

Механизм заражения – фекально-оральный

Материалы для исследования – кал, кровь, желчь, костный мозг, мочу в зависимости от стадии заболевания

Методы диагностики – основной метод – бактериологический. Используют также серологический метод (РПГА)

Препараты для профилактики- брюшнотифозная сорбированная и брюшнотифозная спиртовая, обогащенная Vi-антигеном, вакцины. Брюшнотифозный бактериофаг.

Препараты для лечения – этиотропная антибиотикотерапия

55. Сальмонеллы - возбудители гастроэнтеритов: название по-латыни, морфология, отношение к окраске по Граму, питательные среды для культивирования, устойчивость во внешней среде, источник инфекции, условия возникновения заболевания. Материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для лечения.

Сальмонеллёз (гастроэнтерит)-Острая кишечная инфекция, характеризующаяся поражением тонкой кишки с развитием энтерита. Возбудители – многочисленные серовары вида Salmonella enterica (искл.– S. Typhi, S. paratyphi A, B.)

Семейство – Enterobacteriaceae Род – Salmonella Вид - S. Typhimurium, S. Dublin, S. Enteritidis.

Гр- палочки с закругленными концами; расположены беспорядочно; Спор – ; Капсул –; Жгутики +(перитрихи); Имеют пили 1 и 2ого типа. Факультативные анаэробы;

Температура культивирования 37, рН=6.8-7.2; длительность культивирования 24-48 ч.

БХ активны; оксидазо-, каталазо+, расщепляют глюкозу до к-ты и газа; продуцируют H2S; не расщепляют лактозу и не образуют индол.

Среды: хорошо растут на простых пс и средах, содержащих желчь. Средами накопления явл.- желчный и селенитовый бульон. На плотной пс: бесцветные колонии, на висмут-сульфитном агаре – колонии черного цвета. На жидкой пс: диффузное помутнение.

Резистентность: устойчивы к факторам внеш. среды; Выдерживают рН от 4 до 9; в сточных водах, почве сохраняют жизнеспособность до 3 месяца, в комнатной пыли – от 80 до 550 дней. Хорошо переносят низкие температуры: размножается в замороженном мясе и яйцах – до 1-ого года; на овощах и фруктах – 5-10 дней. Хуже выдерживают высокую температуру: при 56 выдерживают 40-60 минут, при 100 0 С – гибнут моментально. Чувствительны к дезрастворам в рабочей концентрации (5% фенол, 3% хлорамин, 3% лизол вызывают гибель бактерий через 2-3 минуты) и антибиотикам.

Эпидемиология: Источник инфекции – домашние животные и птица Механизм – фекально-оральный

Путь – пищевой

Диагностика- Исследуемый материал – испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, желчь, костный мозг, кровь (при системных формах заболевания).

Проводится бактериологическим и серологическим методами. Серологическое исследование проводят РПГА и ИФА. Важное диагностическое значение имеет нарастание титра АТ в динамике заболевания.

1. Бактериоскопический метод.

2. Бактериологичекий метод (основной).

3. Серологический метод: Реакция Видаля (развернутая РА с О- и Н-антигенами);

• РНГА с эритроцитарными О-, Н-, Vi-диагностикумами;

• ИФА

• РИФ

4. Молекулярно-биологический метод (ПЦР, ДНК-зонды).

5. Аллергологический метод (кожно-аллергическая проба с эбертином).

Cпецефическое лечение – брюшнотифозные и сальмонеллезные бактериофаги.

Неспециф лечение – антибиотикотерапия

56. Возбудители бактериальной дизентерии. Названия возбудителей по латыни, морфология, питательные среды для культивирования. Роль в патологии человека. Материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для специфической профилактики и лечения.

Возбудителями дизентерии (шигеллеза) являются несколько видов бактерий, объединенных в род Shigella. 1го из них впервые обнаружил в 1891 г. русский врач А. Григорьев и изучил во время эпидемии в Японии в 1898 г. Шига. Впоследствии были выделены и описаны другие виды шигелл. По современной классификации к роду Shigella относятся 4 группы, соответственно 4 вида, все виды, кроме S. sonnei, разделены на серовары, S. flexneri - еще на подсеровары.

С-во: Enterobacteriaceae Род: Shigella Вид: Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii, Shigella sonnei

В последние десятилетия дизентерию чаще всего вызывают шигеллы Флекснера и Зонне, реже шигеллы Бойда. S. dysenteriae (Григорьева-Шига) в России не встречается.

Морфология, культуральные, биохимические свойства. Шигеллы представляют собой короткие грамотрицательные палочки, они не образуют спор и капсул, в отличие от сальмонелл не имеют жгутиков.

Факультативные анаэробы. Растут на простых питательных средах, оптимум температуры 37оС, рН 6,8-7,2. Для выделения из организма используют среды, содержащие лактозу и желчные кислоты (среда Плоскирева) – бесцветные колонии, а также селенитовый бульон (как среда обогащения).

По биохимическим свойствам различаются/ Сбраживают глюкозу только до кислоты, лактозу в первые сутки не ферментируют (Shigella sonnei - через несколько суток), маннит ферментируют все виды, кроме S. dysenteriae. Не образуют сероводород.

Антигены. Шигеллы содержат О-антигены, Shigella sonnei имеют К-антиген. Среди О-антигенов есть специфические и групповые.

Токсинообразование. Экзотоксин, обладающий нейротропным действием, продуцируют S. dysenteriae, и этот вид вызывает заболевание в наиболее тяжелой форме. Все шигеллы содержат термостабильный эндотоксин, защищающий бактерии в желчи от гибели. S. dysenteriae серовара 1 продуцирует шига-токсин

Факторы патогенности. Инвазируют слизистую оболочку толстой кишки с последующим межклеточным распространением. Эта способность связана с функционированием крупной плазмиды инвазии, которая детерминирует синтез белков-инвазинов. Эти белки чувствительны к трипсину, поэтому процесс инвазии начинается именно в толстой кишке. Межклеточное распространение связано с «белком распространения», который вызывает лизис мембран эукариотической клетки. Также шигеллы продуцируют белковый цитотоксин, который поражает эндотелий, следствием чего является появление в кале крови.

Устойчивость. Наиболее устойчивы во внешней среде S. sonnei, наиболее НЕ устойчивы - S. dysenteriae. Кипячение убивает шигеллы немедленно, при 60оС они гибнут через 10-20 минут, но встречаются термоустойчивые S. sonnei, погибающие только при 70оС в течение 10 минут, то есть способные выжить при пастеризации молока. В воде, почве, в пищевых продуктах, на предметах, в посуде шигеллы сохраняются жизнеспособными в течение одной-двух недель. S. sonnei могут размножаться в молоке. В кишечнике мух и на их лапках шигеллы выживают в течение 2-3 дней. Перелетая с нечистот и отбросов на пищевые продукты, мухи могут переносить возбудителей. Быстро погибают под действием прямых солнечных лучей и под действием дезинфицирующих средств. В то же время шигеллы очень нестойки в пробах фекалий, так как погибают под влиянием микробов-антагонистов и кислой реакции среды. Поэтому пробы, взятые для исследования, надо сразу же засевать на питательную среду.

Заболевание у человека. Болеет только человек. Источником инфекции является человек - больной или носитель. Механизм передачи фекально-оральный. Пути передачи: пищевой (чаще всего с молочными продуктами), водный, контактно-бытовой. Заражение происходит через рот. Инкубационный период длится от 2 до 7 дней.

Возбудитель проникает в клетки эпителия слизистой оболочки толстой кишки и размножается в них. Это приводит к воспалению (колиту) и образованию язв. Основные симптомы: повышение температуры тела, боли внизу живота, рвота, частый стул, в тяжелых случаях примесь в стуле слизи и крови; характерный признак - тенезмы (ложные болезненные позывы). После гибели шигелл происходит выделение токсинов, действие который обуславливает появление крови в испражнениях. Бактериемия не наблюдается. В случае шигеллеза, вызванного S. dysenteriae серовара 1 токсин попадает в кровь, вызывает поражение гломерул почки и приводят к почечной недостаточности. Болезнь длится 8-10 дней. Больные с легкими формами заболевания часто не обращаются за квалифицированной помощью, занимаясь самолечением. Недолеченная дизентерия может переходить в хроническую форму.

Иммунитет. После перенесенного заболевания иммунитет нестойкий. Во время заболевания образуются антитела, обнаружение которых имеет диагностическое значение.

Микробиологическая диагностика. Материалом для бактериологического исследования являются испражнения. Пробу следует брать до начала антибактериальной терапии, лучше всего с помощью ректальных трубок, посев производить сразу же или помещать пробу в консервирующую жидкость (30% глицерина и 70% буферного раствора) не более чем на 1 день. Для посева отбирать комочки слизи. Количество шигелл в пробе может быть очень скудным, поэтому посев производится на элективную среду Плоскирева или на среду обогащения - селенитовую.

Выделенную чистую культуру идентифицируют по морфологии, биохимическим свойствам и в реакции аглютинации с адсорбированными видовыми сыворотками. Определяют чувствительность к антибиотикам. Шигеллы относятся к числу бактерий, быстро приобретающих устойчивость к антибиотикам, в большинстве случаев связанную с R-плазмидами.

С целью диагностики используют серологические реакции: агглютинации, РНГА. Антитела появляются на второй-третьей неделе заболевания.

Лечебные препараты. Специфическая профилактика не разработана. В очагах заболеваемости используют дизентерийный бактериофаг.

Лечение антибиотиками следует проводить с учетом чувствительности к ним возбудителей. Применяют левомицетин, тетрациклин; эффективны нитрофурановые препараты, поливалентный бактериофаг. При хронической дизентерии применяют вакцинотерапию с помощью химической вакцины, вводимой через рот.

57. Эшерихии: название по латыни, морфология, отношение к окраске по Граму, питательные среды для культивирования. Физиологическая роль в организме и санитарно-показательное значение. Патогенные представители: факторы вирулентности, вызываемые заболевания, материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для специфической профилактики и лечение.

Название по латыни: Gracilicutes

• Enterobacteriaceae

• Escherichia: Е. Coli E. fergusonii E. paracoli E. hermannii E. vulneris

Возбудитель — кишечная палочка — основной представитель рода Escherichia, семейства Enterobacteriaceae, относящегося к отделу Gracilicutes.

Морфология и окрашивание: Е. соlі – мелкие грамотрицательные палочки длиной 2-3 мкм, шириной 0,5-0,7 мкм с закругленными концами, в мазках располагаются беспорядочно; не образуют спор, некоторые штаммы имеют микрокапсулу; перитрихи; кроме жгутиков, иногда обнаруживаются пили.

Культивирование: Кишечная палочка – факультативный анаэроб; не требовательна к питательным средам, хорошо растет на простых питательных средах при температуре 37ºС и рН среды 7,2.7,4, вызывая диффузное помутнение жидкой среды и образуя обычные колонии на плотных средах. Для диагностики эшерихиозов широко используют дифференциально-диагностические среды Эндо, Левина и др.

Физиологическая роль и санитарно-показательное значение: 1) Кишечная палочка - представитель нормальной микрофлоры толстой кишки, приносит пользу как антагонист патогенных бактерий и грибов, принимает участие в синтезе витаминов.

2) Е. coli является санитарно-показательным микроорганизмом для определения фекального загрязнения воды, пищевых продуктов, оборудования пищеблоков, рук и спецодежды медицинского персонала и т д. Е.coli при этом расценивается не как возбудитель заболевания, а как показатель загрязнения выделениями человека, которые могут содержать возбудителей кишечных заболеваний.

3) Кишечные палочки как условно-патогенные микроорганизмы у людей с ослабленным иммунитетом могут вызвать гнойно-воспалительные процессы за пределами желудочно-кишечного тракта: пиелиты, циститы, холециститы. У пациентов с выраженным иммунодефицитом может развиться коли-сепсис. Гнойное воспаление ран, постинъекционные абсцессы могут возникнуть в результате заражения извне. Кишечные палочки вызывают пищевые токсикоинфекции при накоплении в большом количестве в пищевом продукте.

4) Энтеропатогенные кишечные палочки вызывают инфекционные острые кишечные заболевания – эшерихиозы. Они возникают как экзогенные инфекции.

Источником являются больные люди или бактерионосители, механизм заражения - фекально-оральный. Болеют чаще дети, главным образом в возрасте до 2 лет.

Факторы вирулентности: Е. coli образует эндотоксин, оказывает нейротропное, пирогенное действие (ЭПКП). ЭПКП продуцирует экзотоксин, который, адсорбируясь на эпителии тонкой кишки, вызывает гиперсекрецию воды и хлоридов в просвет тонкой кишки и нарушает обратное всасывание натрия, что приводит к усилению перистальтики, поносу и обезвоживанию. У некоторых диареегенных эшерихий, как и у возбудителей дизентерии, обнаружен инвазивный фактор, способствующий проникновению бактерий внутрь клеток. Патогенность ЭПКП также может проявляться в нефротоксическом действии, возникновении геморрагии. К факторам патогенности относятся также пили и белки, способствующие адгезии, и микрокапсула, препятствующая фагоцитозу. Условно-патогенные и диареегенные кишечные палочки отличаются антигенной структурой и набором факторов патогенности.

Вызываемые заболевания: Эшерихиозы - инфекционные болезни, возбудителем которых является Escherichia coli. Различают энтеральные (кишечные) и парентеральные эшерихиозы.

Энтеральные эшерихиозы — острые инфекционные болезни, характеризующиеся преимущественным поражением ЖКТ. Они протекают в виде вспышек, возбудителями являются диареегенные штаммы E.coli.

Парентеральные эшерихиозы — болезни, вызываемые условно-патогенными штаммами E.coli — представителями нормальной микрофлоры толстой кишки. При этих болезнях возможно поражение любых органов.

Лабораторная диагностика и материалы для исследования: Основной материал для исследования – испражнения. Диагностика осуществляется с помощью бактериологического метода, при котором не только определяют род и вид выделенной чистой культуры, но и устанавливают принадлежность ее к серогруппе; внутривидовая идентификация заключается в определении серовара; обязательно определение антибиотикограммы.

Лабораторная диагностика основана на выделении чистой культуры возбудителя и определения вида и серовара. При гнойно-воспалительных заболеваниях исследуемым материалом служат моча, желчь, гной из ран и из полости абсцесса, при сепсисе - кровь, при пищевых токсикоинфекциях - рвотные массы, промывные воды желудка, пищевые продукты.

Выделенные чистые культуры идентифицируют по биохимическим и антигенным свойствам.

При острых кишечных инфекциях исследуют испражнения. Посевы производят на дифференциально-диагностические среды, обычно на среду Эндо. Из выросших изолированных колоний кишечной палочки отбирают те, которые агглютинируются диагностическими ОВ-сыворотками. Их пересевают на скошенный агар, выделяют чистую культуру и затем определяют серовар в развернутой реакции агглютинации с живой культурой (В-агглютинация) и прогретой кипячением культурой (О-агглютинация).

Профилактика и лечение: Профилактика эшерихиозов - это, в первую очередь, соблюдение правил личной гигиены. Это выполнение санитарно-гигиенических правил в родильных домах, в детских садах, в стационарах, на предприятиях пищевой промышленности и общественного питания, постоянный надзор за качеством пищевых продуктов и воды.

Для лечения эшерихиозов применяют препараты из микробов-антагонистов: бифидумбактерин, лактобактерин. Кишечные палочки чувствительны к антибиотикам (левомицетин, тетрациклин, полимиксин), к нитрофурановым препаратам. Но эффективность лечения снижается из-за распространения лекарственно-устойчивых эшерихий, приобретающих устойчивость путем передачи R-плазмид.

58.Возбудитель чумы: название по-латыни, морфология, отношение к окраске по Граму, питательные среды для культивирования, характер роста, источники инфекции, механизмы и пути передачи, клинические формы заболевания, материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, лечебные и профилактические препараты.

Таксономия. Семейство – Enterobacteriaceae Род – Yersinia Вид – Yersinia pestis

Морфология. Палочка овоидной формы, вздутая по середине (формой напоминает «бочонок» Грамотрицательные, окрашиваются биполярно (биполярность особенно хорошо выражена при окраске метиленовым синим или по Романовскому-Гимзе). В мазках из патологического материала располагаются цепочками, из бульонных культур – беспорядочно. Образуют нежную капсулу. Спор и жгутиков не имеют.

Культуральные свойства. Факультативные анаэробы. Оптимальная температура роста – 28-30С, рН – 6,9-7,2. Хорошо растут на простых питательных средах (МПА, МПБ). На поверхности жидкой питательной образуется пленка со спускающимися вниз нитями («сталактитовый рост»). На плотных питательных средах выделяют три стадии роста колоний Yersinia pestis: - Молодые колонии – обнаруживаются через 8-12 часов культивирования: прозрачные микроколонии с неровными краями, напоминающие «битое стекло»;

- Позднее (через 18-24 часа) – колонии сливаются и появляются нежные плоские образования со светлым зернистым центром и фестончатыми краями в виде «кружевных платочков»;

-Зрелые колонии – образуются через 48-72 часа: крупные колонии с бурым зернистым центром и неровными краями в виде «ромашек».

Биохимическая активность. Возбудитель расщепляет многие сахара (глюкозу, галактозу, мальтозу, маннит и многие другие) до кислоты без газа. По отношению к глицерину различают 2 варианта возбудителей: глицерин-позитивный (континентальный – с суши) и глицерин-негативный (океанический – с моря). Не ферментирует лактозу, сахарозу и рамнозу. Реакция Фогес-Поскауэра – отрицательная. Протеолитическая активность отсутствует (желатин не разжижает, не восстанавливает нитраты, индол, сероводород и аммиак не образует, молоко не свертывает).

Антигенная структура. Yersinia pestis содержит до 18 антигенов, но не все они хорошо изучены. Выделяют антигены клеточной стенки: 1. О-антиген – соматический антиген, термостабильный липополисахарид, является эндотоксином.

2. ОСА – основной соматический антиген, белковой природы, является экзотоксином, обладающим гемолитическими свойствами, токсичен для человека и животных (белых крыс и мышей).

Капсульные антигены: 1. F1-антиген (фракция-1) – термолабильный гликопептид, не обладает токсическими свойствами, но защищает возбудителей чумы от фагоцитоза и обуславливает иммуногенные свойства.

2. VW – антиген вирулентности, это фактически два антигена, но они всегда встречаются вместе: V-антиген – белок, а W-фракция – липопротеин. VW обладает антифагоцитарным действием и способствует внутриклеточному размножению возбудителя чумы.

Внутри клетки (в ЦПМ) располагается Т-антиген – «мышиный» токсин (очень ядовит для мышей), белковой природы, блокирует функции митохондрий печени.

Факторы патогенности. Токсины: -Эндотоксин; -Экзотоксины – гемолизин (ОСА), - «мышиный» токсин.

Ферменты – гиалуронидаза, нейроминидаза, лецитиназа, фибринолизин, плазмокоагулаза.

Структурные и химические компоненты клетки: пили I порядка, капсула, плазмиды (в них локализованы гены, детерминирующие синтез большинства факторов патогенности),бактериоцины (пестицины).

Из-за наличия большого набора агрессивных факторов возбудитель чумы относится к I группе микроорганизмов по степени опасности для человека.

Резистентность. Возбудитель чумы обладает значительной устойчивостью во внешней среде

Но высоко чувствительны к УФЛ, высушиванию, повышенной температуре (до 60 0С –погибают за 1 час, кипячение – 1 минута), действию дезинфиктантов (5% раствор карболовой кислоты убивает за 5-10 минут), антибиотикам (стрептомицину, тетрациклину, левомицитину, хлоранфениколу).

Эпидемиология. Зооантропоноз (больные легочной формой могут выделять возбудителя). Основной резервуар и источник инфекции – грызуны (около 300 видов):

Механизмы передачи: Чаще всего трансмиссивный (путь – контаминационный, т.е. при втирании в ранку от укуса блохи ее фекалий и рвотных масс, содержащих возбудителя, переносчики – блохи);

- Фекально-оральный (путь – алиментарный – при приеме пищи, инфицированной возбудителем, например, мяса больных животных, не подвергавшегося достаточной термической обработке);

-Контактный (путь – прямой контактный, когда возбудитель проникает через поврежденную кожу или слизистые при разделке туш зараженных животных);

-Аэрогенный (путь – воздушно-капельный, реализуется при легочной форме чумы, когда возбудитель в больших количествах попадает в воздух с мокротой больного, выделяемой при кашле).

Инкубационный период – 3-6 суток.

Патогенез и клинические особенности. Патогенез чумы включает три стадии: 1. Внедрение возбудителя в организм в месте укуса блохи (на месте проникновения образуется карбункул), от куда он быстро попадает в лимфоузлы, где развивается воспаление (образуются чумные бубоны, размером могут достигать куриного яйца).

2. Распространение возбудителя в кровоток (бактериемия).

3. Диссеминация возбудителя по различным органам и системам.

Клинически различают следующие формы чумы: -Кожную; -Бубонную; -Легочную; -Кишечную; -Септическую.

Иммунитет. Постинфекционный иммунитет – в основном, клеточный, напряженный, пожизненный.

Лабораторная диагностика В лабораторию могут быть доставлены следующие материалы: содержимое бубона (легочная форма чумы); отделяемые язвы или пунктет из карбункула (кожная форма чумы); материал из зева, взятый тампоном, и мокрота (легочная фор­ма чумы); секционный материал (кусочки органов трупа, кровь); живые грызуны; трупы грызунов;

1 .Микроскопическое исследование: мазки фиксируют окрашивают по Граму, одновременно окрашивают мазок метиленовым синим Леффлера, так как этот метод лучше выявляет биполярность.

2. Бактериологическое исследование: посевы исследуемого материала производят на агар добавлением стимуляторов роста. В положительных случаях появляются колонии в виде характерных "кружевных платочков".

3. Биологическая проба обязательна при исследовании; наиболее чувствительными из лабораторных животных являются морские свинки и белые мыши.

4. Серологические реакции иммуноферментную агглютинацию, реакцию пассивной гемагглютинации, реакции непрямой агглютинации. Экспресс-методом является люминесцентно-серологический, позволяющий обнаружить возбудителя в исследуемом материале через 2 ч.

Специфическая профилактика. Проводится вакцинация по эпидпоказаниям, а также планово – группам риска (в основном, военнослужащим) живой аттенуированной вакциной из штамма EV или химической вакциной.

Специфическое лечение – противочумной иммуноглобулин.

59. Возбудитель сибирской язвы: название по латыни, морфология, отношение к окраске по Граму, питательные среды для культивирования, источник и механизм заражения, материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для специфической профилактики и лечения.

Возбудитель (Bacillus anthracis) относится к отделу Firmicutes, роду Bacillus, семейству Bacillaceae.

Морфология: крупные грамположительные палочки, неподвижные (нет жгутиков), имеют обрубленные концы, которые расположены в цепочку, в внешней среде образуют центральную спору, в организме человека и животных образуют капсулу

Питательные среды для культивирования: аэробы, хорошо растут на простых питательных средах. В МПБ растут в виде комочка ваты на дне, МПБ - прозрачный. На МПА - колонии в R-форме, крупные, напоминающие львиную гриву. Разжижают желатин в виде опрокинутой елочки. Характер роста на средах имеет диагностическое значение. Биохимические свойства выражены хорошо. Разлагают глюкозу, лактозу и мальтозу до кислоты. Свертывают молоко.

Источник и механизм заражения: Основной источник - больные животные (травоядные).

Пути передачи: 1) контактно-бытовой - при уходе за животными, снятии шкуры, при изготовлении предметов и изделий и их использовании (изделия из кожи, шерсти - полушубки, меховые рукавицы, шапки, воротники, кисточки для бритья, шерстяные платки, шарфы и т.д.);

2) пищевой (алиментарный) - при употреблении мяса больных животных;

3) воздушно-капельный — при вдыхании пыли и др. со спорами;

4) трансмиссивный - через укусы кровососущих насекомых. Восприимчивость людей всеобщая. Больной человек не заразен для окружающих. Уровень заболеваемости среди людей зависит от распространения эпидемии среди животных. Заболевание часто носит профессиональный характер и наблюдается у рабочих животноводческих ферм и кожевенных заводов.

Патогенез и клиника: Входные ворота: кожа, слизистые оболочки дыхательных путей, пищеварительный тракт.

Основной патогенетический фактор - экзотоксин, который вызывает отек, некроз тканей и другие повреждения.

Инкубационный период от нескольких часов до 8 дней. Различают 3 формы сибирской язвы: 1) кожная форма; 2) кишечная форма; 3) легочная форма. Чаще бывает кожная форма - 65% случаев. Вначале на коже образуется красное пятно, потом сибиреязвенный карбункул, он вскоре покрывается буро-черной коркой, напоминающий уголь — антрацит, он почти безболезненный. Болезнь может длиться от недели до месяца. Больные, как правило, выздоравливают. Кишечная и легочная сибирская язва - очень тяжелые формы заболевания. Развиваются интоксикация и геморрагические поражения кишечника и легких. Летальность высокая.

Формируется стойкий иммунитет. Возможны рецидивы. Лабораторная диагностика. Исследования проводят в специальных лабораториях.

Материалы для исследования и методы лабораторной диагностики: Материал для исследования:

1. Содержимое везикул, карбункула, отторгнутый струп (кожная форма).

2. Мокрота (легочная форма).

3. Испражнения (кишечная форма).

4. Кровь (септическая форма).

5. Почва, шерсть животных (для постановки реакции Асколи).

6.Трупный материал.

Основные методы исследования: 1) бактериоскопический метод - из исследуемого материала готовят мазок, красят по Граму или Бурри-Гинсу для выявления капсулы;

2) бактериологический метод - делают посев материала на среды для получения чистой культуры и проводят ее идентификацию, нередко применяют фагодиагностику (в отличие от антракоидов, сибиреязвенные палочки на кровяном агаре не дают гемолиза);

3) биологический метод - исследуемым материалом заражают морских свинок или белых мышей подкожно или внутрибрюшинно, животные погибают на 2-3 день;

4) серологический метод - ставят реакцию кольцепреципитации по Асколи с целью обнаружения сибиреязвенного антигена в сырье (коже, шерсти, трупном материале), из которого трудно выделить чистую культуру (для этого: а)материал подвергают кипячению в физ. растворе, фильтруют и получают преципитиноген; б) в преципитационную пробирку наливают преципитирующую сибиреязвенную сыворотку, на нее наслаивают преципитиноген; в) при положительной реакции на границе двух жидкостей появляется белое, мутное кольцо, что говорит о соответствии антигена антителам сыворотки, т.е. о наличии белков возбудителя сибирской язвы в материале);

5) кожно-аллергическая проба с антраксином — внутрикожное введение аллергена.

Препараты для специфической профилактики и лечения: Профилактика – для специфической профилактики применяют живую сибиреязвенную вакцину - СТИ, представляющую собой споровую культуру бескапсульного варианта сибиреязвенных бацилл. Прививают работников животноводства в населенных пунктах, неблагополучных по сибирской язве. Для экстренной профилактики (если человек заразился) вводят сибиреязвенный иммуноглобулин и пенициллин.

Общая профилактика: своевременное выявление и лечение больных животных, проведение тщательной дезинфекции помещений для скота, захоронение погибших животных в специальных скотомогильниках на глубину не менее 2 м.

Лечение – противосибиреязвенный иммуноглобулин, антибиотики: пенициллин, стрептомицин, тетрациклин.

60. Возбудители бруцеллёз: названия возбудителей по латыни, морфология, отношение к окраске по Граму, питательные среды для культивирования, факторы вирулентности, вызываемые заболевания, материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для специфической профилактики и лечения.

Бруцеллёз- зоонозная инфекция. Больной человек не является источником инфекции.

Семейство Brucellaceae; род Brucella; вид Brucella melitensis, Brucella abortus, Brucella suis.

Возбудитель - мелкие аэробные грамотрицательные коккобактерии, 1,5x0,7 мкм, спор не образуют, неподвижны, на среде с сывороткой образуют капсулу. Требовательны к питательным средам, растут на средах с добавлением крови, печеночного отвара, триптозосоевого экстракта. Растут медленно. На плотных питательных средах вирулентные формы образуют S-формы, авирулентные R-формы. В жидкой-равномерно помутнение. Утилизируют углеводы без кислоты и газа. B. abortus продуцирует сероводород.

Brucella melitensis – заболевание мелкого рогатого скота; Brucella abortus – крупного рогатого скота, Brucella suis- заболевания свиней.

Факторы вирулентности: белки наружной мембраны, ЛПС, секреторные системы, уреаза; vi, А, М-антигены.

Материал для исследования: кровь, моча, костный мозг, пунктат лимфоузлов, ликвор.

Метод лабораторной диагностики: бактериологический( материал засевают в 2 флакона с жидкими питательными средами, один флакон помещают в CO2-инкубатор; инкубируют 30 дней, 37 градусов, каждые5 дней пересевают на плотные пит.среды), серологический ( РА, РПГА, ИФА, реакция Кумбса- определение титра антител, р-я Хеддельсона), биологический , аллергический (внутрикожная проба Бюрне с бруцеллином).

Лечение- этиотропная антибиотикотерапия, иммунотерапия неживой вакциной. Профилактика- живая вакцина штамма ВА-19А, предупреждение бруцеллеза среди животных , санитарно-ветеринарные мероприятия.

61. Синегнойной инфекции: названия возбудителей по латыни, морфология, отношение к окраске по Граму, питательные среды для культивирования, факторы вирулентности, вызываемые заболевания, материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для специфической профилактики и лечения.

Таксономия. Псевдомонады относятся к роду Pseudomonas; типовой вид – P.aeruginosa (синегнойная палочка).

Морфология. P.aeruginosa – грамотрицательные подвижные палочки, которые не имеют спор, часто формируют капсулу, образуют пили 4-го типа.

Культурные и биохимические свойства. Синегнойные палочки – облигатные аэробы, обладают цитохромоксидазой. Они хорошо растут на простых питательных средах, выделяя пигмент – пиоцианин, который окрашивает питательную среду в сине-зелёный цвет. Возможно также образование пигмента другого цвета (жёлтого, чёрного, красного). При росте на питательных средах псевдомонады часто выделяют ароматические углеводороды, придающие культуре бактерий характерный сладковатый запах жасмина, сирени или карамели. Бактерии обладают термофильностью – могут расти при 42 °С.

Бактерии окисляют, а не ферментируют углеводы, поэтому они относятся к группе неферментирующих бактерий; имеют протеолитические ферменты. Псевдомонады продуцируют вещества, обладающие бактерицидными свойствами бактериоцины (пиоцины).

Антигенная структура. Синегнойные палочки имеют О- и Н- антигены; антигенными свойствами также обладают токсины, адгезины, пили и некоторые ферменты, выделяемые этими бактериями.

Факторы патогенности. P.aeruginosa имеют разнообразные факторы вирулентности: адгезины, эндо- и экзотоксины, ферменты агрессии (гемолизины, нейраминидазу, протеазу, эластазу, лейкоцидины и др.).

Эпидемиология. Заболевание синегнойной этиологии может развиться в результате аутоинфицирования (эндогенное заражение) или экзогенно. Источником инфекции являются люди (больные или бактерионосители). А также различные естественные резервуары природы и объекты внешней среды, в том числе в помещениях стационаров и аптек.

Механизмы и пути заражения при инфекциях, вызванных псевдомонадами, могут быть различными: возможны контактный, респираторный, кровяной или фекально-оральный механизмы заражения. Синегнойные палочки – частая причина внутрибольничных инфекций.

Патогенез и клиническая картина. Синегнойные палочки прикрепляются к различным клеткам организма с помощью пилей, продуцируют токсины и ферменты агрессии. От фагоцитоза бактерии защищены капсулоподобной слизью.

Синегнойные палочки вызывают у человека гнойно-воспалительные заболевания с различной клинической картиной: ожоговую болезнь, осложнения послеоперационных ран, эндокардиты, остеомиелиты, пневмонии, менингиты, абсцессы мозга, сепсис и др. Их часто выделяют из очагов воспаления в ассоциациях с другими условно-патогенными бактериями. Синегнойная палочка способна образовывать биопленки на поверхности медицинского оборудования.

Иммунитет изучен мало.

Микробиологическая диагностика. Исследуемый материал берут в зависимости от локализации воспалительного процесса и симптомов болезни. При бактериологическом исследовании чистую культуру выделенных бактерий идентифицируют по биологическим свойствам.

Обязательно определяют антибиотикограмму. Для внутривидовой идентификации бактерий проводят серотипирование, пиоцинотипирование, фаготипирование псевдомонад. Применяют также серологические методы исследованния (РА, РПГА, РСК). Лечение. Применяют антибиотики с учетом чувствительности бактерий к ним. Назначают также антисинегнойный гетерологичный Ig, антисинегнойную гипериммунную плазму человека, бактериофаг пиоцианеус или поливалентный жидкий пиобактериофаг.

Профилактика. Разработана ассоциированная вакцина, включающая антигены синегнойной палочки, протея и стафилококка. Эффективная стерилизация, дезинфекция и антисептика, а также соблюдение правил асептики являются основными мерами неспецифической профилактики синегнойной инфекции в стационаре. Среди профилактических мероприятий обязательны контроль обсемененности внешней среды (воздух, различные предметы, инструменты и аппаратура) и соблюдение правил личной гигиены.

62. Дрожжеподобные грибы рода Candida: названия возбудителей по латыни, морфология, отличие от дрожжей, питательные среды для культивирования. Роль в патологии человека. Условия, способствующие возникновению кандидозов. Материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для специфической профилактики и лечения

Возбудителями являются дрожжеподобные грибы рода Candida, чаще всего Candida albicans.

Дрожжеподобные грибы сходны с дрожжами по морфологии круглых и овальных клеток - бластоспор. Отличаются от истинных дрожжей способностью образовывать псевдомицелий и отсутствием полового способа размножения.

На плотной среде Сабуро образуют белые сметанообразные колонии, которые при старении врастают в толщу агара.

Кандидоз может возникнуть в результате экзогенного заражения при контакте с больным, через инфицированные предметы, или от носителей, например, при контакте новорожденного и грудного ребенка со взрослым, но часто наблюдается эндогенная инфекция поскольку Candida albicans является представителем нормальной микрофлоры организма. Эндогенный кандидоз развивается при дисбактериозе или как сопутствующее заболевание при другом хроническом и тяжелом процессе. В возникновении кандидоза большую роль играет длительное применение антибиотиков широкого спектра действия, которые подавляют нормальную микрофлору организма, что приводит к дисбактериозу и усиленному размножению грибов Candida, обладающих природной устойчивостью к антибиотикам.

Кандидозы - профессиональные заболевания лиц, чья работа связана с овощами, фруктами, кондитерскими изделиями из фруктов, а также судомоек и работников бань.

При поверхностных кандидозах на слизистых оболочках полости рта, языка, в углах рта, на слизистой влагалища появляются белые налеты (молочница). На коже появляются мелкие красные пятна, пузырьки, которые превращаются в эрозии.

При глубоких кандидозах поражаются легкие, кишечник, почечные лоханки и мочевой пузырь, возможно развитие сепсиса.

Микробиологическая диагностика. Наибольшее значение придают микроскопическому, серологическому и несколько меньшее - культуральному методу.

Микроскопируют нативные неокрашенные препараты или окрашенные обычными способами. Единичные дрожжевые клетки можно встретить в мокроте, кале, моче здоровых лиц. Патологической картине соответствует наличие большого числа почкующихся клеток и особенно нитей мицелия.

Серологические исследования имеют большое значение при поражении внутренних органов. Ставят РСК и другие реакции.

Выращивание культуры из исследуемого материала имеет ограниченное значение, так как у здоровых лиц при посеве мокроты, мочи, соскобов со слизистых оболочек можно получить рост Candida. Получение культуры безусловно доказательно при посеве крови, спинномозговой жидкости, пунктата лимфатических узлов, закрытых абсцессов. Посев материала производят на среду Сабуро и выращивают при 30оС. Через 2-3 суток отмечают рост белых сметанообразных колоний, при микроскопии - почкующиеся клетки, нити мицелия, наличие которых обязательно для отличия от истинных дрожжей. Для лечения применяют декамин, нистатин, леворин, клотримазол, флуконазол.

63. Стафилококки: названия возбудителей по латыни, морфология, отношение к окраске по Граму, питательные среды для культивирования, факторы вирулентности, вызываемые заболевания, материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для специфической профилактики и лечения.

Таксономия: Семейство – Micrococcaceae Род – Staphylococcus Виды – S. aureus(золотистый стафилококк), S. epidermidis(эпидермальный), S.saprophyticus(сапрофитический) и другие, всего 29 видов

Морфология Стафилококки имеют правильную или относительно правильную шаровидную форму. В мазках стафилококки располагаются в виде гроздьев винограда. Грам+. Жгутиков нет. Спор не образуют. Капсулу образует только S. aureus

Питательные среды для культивирования Хорошо растут на простых питательных средах. На плотных средах образуют выпуклые, гладкие, обычно пигментированные колонии. В жидких средах образуют равномерное помутнение. В качестве элективных сред применяется: молочно-солевой агар, желточно-солевой агар(среда Чистовича), содержащие 8-10% хлорида натрия.

Факторы вирулентности: Адгезины

Экзотоксины. Гемолизины вызывают гемолиз эритроцитов разных видов животных и человека. Основным из них является a-гемолизин, на основе которого приготовлен стафилококковый анатоксин. Стафилококки, продуцирующие гемолизин, образуют на кровяном агаре колонии, окруженные бесцветной зоной гемолиза. Лейкоцидины разрушают лейкоциты. Эксфолиатины вызывают пузырчатку новорожденных, отслойку эпителия кожи с образованием пузырей, «синдром ошпаренной кожи». Обнаружен токсин, вызывающий токсический шок (ТТШ). Энтеротоксины, вызывающие пищевую интоксикацию, в отличие от других экзотоксинов, термостабильны, не разрушаются при кипячении.

Ферменты, обладающие патогенным действием: гиалуронидаза, лецитиназа, плазмокоагулаза

Заболевания, вызываемые стафилококками Стафилококковые заболевания чаще возникают в результате заражения извне, реже - как эндогенная инфекция.

Стафилококки, главным образом, S. epidermidis, являются представителями нормальной микрофлоры кожи человека, дыхательных путей и пищеварительного тракта. У здоровых людей довольно часто встречается носительство S. aureus, главным образом, на слизистой оболочке носа. Установлено, что только небольшая часть людей постоянно свободна от золотистого стафилококка. У большинства они обнаруживаются периодически, часть людей являются постоянными бактерионосителями. Имеется категория носителей, у которых постоянно и в большом количестве обитают S. aureus с признаками госпитальных штаммов. Такие носители, особенно среди медицинского персонала, а также больные со стафилококковыми заболеваниями, являются основным источником стафилококковых инфекций в больницах.

Инфекция передается, главным образом, контактным путем или через воздух.

Стафилококки вызывают разнообразные гнойно-воспалительные заболевания: гнойничковые поражения кожи и подкожной клетчатки, ангины, отиты, пневмонии, уретриты, холециститы, энтероколиты, сепсис и т.д. Особенно велика их роль в акушерской практике и в хирургии. Стафилококки нередко являются причиной гнойно- воспалительных заболеваний у новорожденных, маститов у рожениц, гнойных послеоперационных осложнений, постинъекционных абсцессов. Возбудителями чаще всего являются S. aureus.

S. epidermidis вызывает заболевания такие, как инфекционный эндокардит и другие, главным образом, у ослабленных больных, в отделениях интенсивной терапии, где заражение может происходить через системы для внутрисосудистых вливаний, различные катетеры из полимерных соединений.

S. saprophyticus являются частой причиной острых инфекций мочевыводящих путей у молодых женщин.

Особое место занимают пищевые интоксикации, возникающие в результате употребления в пищу продуктов (чаще всего молочных и сладких блюд), в которых произошло размножение стафилококков и накопление энтеротоксина. Этот токсин термоустойчив, и даже после термической обработки продукты, содержащие энтеротоксин, могут вызвать пищевое отравление.

Стафилококки могут явиться причиной токсического шока.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования являются гной, слизь из зева и носа, мокрота, кровь, испражнения, моча; при пищевых отравлениях - рвотные массы, промывные воды желудка, пищевые продукты.

Применяют бактериоскопический и бактериологический методы. Редко серологические

Микроскопия мазка из исследуемого материала позволяет обнаружить грамположительные кокки и отметить их количество. Для выделения чистой культуры производят посевы на элективные для стафилококка среды (молочно-солевой или желточно-солевой агар) и среды для стрептококка (кровяной агар). В случае, если выделена чистая культура стафилококка, определяют видовую принадлежность по признакам: плазмокоагулаза, анаэробное сбраживание и аэробное окисление глюкозы и маннита, гемолиз на кровяном агаре, наличие лецитиназы, ДНК-азы. Определяют чувствительность к антибиотикам.

В целях эпидемиологического анализа проводят фаготипирование. При пищевых отравлениях определяют наличие энтеротоксина в пищевом продукте с помощью специфических антисывороток или биопробы на котятах.

Лечение

1. Антитоксическая противостафилококковая гипериммунная плазма

2. Стафилококковый анатоксин нативный, применяется для активной иммунизации с целью лечения при хронических заболеваниях.

3. Стафилококковый анатоксин очищенный адсорбированный прменяется, главным образом, для профилактики.

4. Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый содержит стафилококковый антитоксин, приготовлен из крови доноров, иммунизированных стафилококковым анатоксином. Применяется для создания пассивного иммунитета с целью лечения.

5. Стафилококковый антифагин, убитая стафилококковая вакцина - для создания активного иммунитета с целью лечения.

6. Стафилококковый бактериофаг жидкий. Применяется наружно, внутрикожно, внутримышечно для лечения.

Профилактика Стафилококковый анатоксин, ассоциированная стафило-протейно-синегнойная вакцина

64. Стрептококки: названия возбудителя по латыни, морфология, отношение к окраске по Граму, питательные среды для культивирования, факторы вирулентности, вызываемые заболевания, материал для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для специфической профилактики и лечения.

Отдел: Fermicutes Семейство: Micrococceae Род: Streptococcus Вид: S. pyogenes (стрептококк серогруппы А, 80 сероваров), S. agalactiae (стрептококк серогруппы B), S. mitis, S. pneumoniae, S. mutans и др. Всего по классификации Ребекки Лэнсфилд 20 серогрупп (А-О) по специфичности M-, P- и T-Аг.

S. pyogenes - описание

Форма: мелкие скопления в виде цепочек или попарно. Споры –, Капсула микро/макро, Жгутики – Окраска по Граму +, Бурри-Гинсу.

Рост: преимущественно S- колонии, сероватые или бесцветные, на жидких питательных средах – пристеночно/придонно в виде зернистого осадка, оставляя бульон прозрачным. Среды: растут на питательных средах с добавлением крови, сыворотки, углеводов. Полисахариды клеточной стенки (С-антигены) определяют групповую специфичность. Белки клеточной стенки (М-, Р-, Т- антигены) дифференцируют стрептококки внутри серогрупп на серовары. Белок М у S. pyogenes является супер Аг. Капсула у S. pyogenes маскируется белком М и как правило неиммуногенна.

Факторы патогенности: Капсула (гиалуроновая к-та), липотейхоевая к-та, пептидогликан,

белок М (mucoid, суперАг, ингибитор фагоцитоза и акцептор фибрина/фибриногена), стрептоцины.

Экзотоксины: О-(чувствительный к кислороду, гемолиз в анаэробных условиях, иммуногенен) и S- (резистентный к кислороду, гемолиз в аэробных условиях) стрептолизины, лейкоцидин, кардиогепатотоксин, эритрогенин (эритрогенный, пирогенный, скарлатинозный токсин) обладает нейротоксическим (гипоталамус), некротическим (эндотелий, миокард, печень) свойствами.

Ферменты патогенности: C5a- пептидаза, стрептокиназа, стрептодорназа, НАДаза, гиалуронидаза.

Вызывают острые и хронические гнойно-воспалительные поражения различных органов и тканей с частым образованием флегмон. Стрептококки из локального очага инфекции способны быстро проникать в кровь и вызывать сепсис. Стрептококковая ангина, фарингит, скарлатиная, рожа и др.

Исследуемый материал: слизь из зева, кровь, гнойное отделяемое, мокрота, моча

1) Бактериоскопический метод – окраска по Граму.

2) Бактериологический метод – КА, АА при 37°С 18—20 ч, оценка зоны гемолиз

3) Экспресс-диагностика – РИФ, ИФА с АТ к O-стрептолизину,

4) молекулярно-биологическое исследование – ПЦР.

Специфическая профилактика: при ревматизме – круглогодичная антибиотикотерапия.

Лечение - на основе антибиотикограммы – антибтотикотерапия (пенициллины короткого/длительного действия или др.). Иммунитет типоспицифичный, стойкий, напряженный

S. pneumoniae – описание Форма: мелкие скопления попарно расположенных ланцетовидных клеток. Споры –, Капсула толстая, Жгутики – Окраска по Граму +, Бурри-Гинсу.

Рост: преимущественно S-колонии, сероватые или бесцветные, окруженные зеленоватой зоной гемолиза, на жидких питательных средах – нежное помутнение, иногда образют осадок. Среды: растут на питательных средах с добавлением крови, сыворотки, углеводов. У S. pneumoniae вирулентный К-Аг, видоспецифичная субстанция P (в цитоплазме).

Факторы патогенности: Капсула (без капсульные штаммы авирулентны) – ингибирует фагоцитоз и опсонизацию. Субстанция С – тейхоевые к-ты, специфически взаимодействуют с С- реактивным белком. Пептидогликан, гемагглютинин, фибринолизин, лейкоцидин, гиалуронидаза

Пневмококк S. pneumoniae — типичный возбудитель крупозной (лобарной) пневмонии, однако может вызывать бронхопневмонию и абсцесс легкого.

Исследуемый материал: слизь из зева, кровь, мокрота, спинномозговая жидкость. Доставляют быстро, так как пневмококк неустойчив в среде

1) Бактериоскопический метод – окраска по Граму, обнаружение диплококков и множество нейтрофилов.

2) Бактериологический метод – КА, АА при 37°С 18—20 ч, оценка зоны гемолиза

S. pneumoniae чувствителен к оптохину, способен ферментировать инулин, чувствителен к солям желчных кислот (дезоксихолатная проба)

3) Экспресс-диагностика – РИФ, ИФА с К-Аг, молекулярно-биологическое исследование – ПЦР.

Специфическая профилактика: поливалентная химическая вакцина К-Аг 23 серовара.

Лечение - на основе антибиотикограммы – антибтотикотерапия (пенициллины короткого/длительного действия или др.). Иммунитет типоспицифичный, стойкий, напряженный

65. Пневмококки: название возбудителей по латыни, морфология, отношение к окраске по Граму, питательные среды для культивирования, вызываемые заболевания, материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для специфической профилактики и лечения.

относятся к типу Firmicutes, классу Bacilli, Порядок: Lactobacillales Семейство: Streptococcaceae

Род: Staphylococcus. Вид: Пневмококк Streptococcus pneumoniae

Морфологические и тинкториальные свойства пневмококков. Пневмококки представляют собой грамположительные бактерии ланцетовидной формы размером 0,8-1,25 мкм, располагающиеся попарно. Такое расположение клеток обусловлено их делением в одной плоскости.

Геном пневмококка представляет собой кольцевую хромосому. В природе пневмококк подвержен генетической изменчивости путем трансформации, поэтому в его геноме обнаруживаются чужеродные гены.

Культуральные и биохимические свойства пневмококков. Пневмококки являются факультативными анаэробами. Их рост усиливается в атмосфере 5-10% углекислого газа. На агаре пневмококки формируют мелкие выпуклые колонии влажной консистенции. При инкубировании более 48 часов центральная часть колоний опускается, образуя характерную блюдцеобразную форму.

Оптимальная температура роста для пневмококков 37°С. Они требовательны к питательным средам, для их выращивания используют сывороточный или кровяной агар с добавлением глюкозы. На средах с кровью пневмококки вызывают α-гемолиз - формируют мелкие колонии, окруженные зоной зеленого цвета за счет неполного гемолиза и образования метгемоглобина

В жидких средах пневмококки вызывают диффузное помутнение и небольшой хлопьевидный осадок. Они ферментируют некоторые углеводы (левулезу, маннозу, глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, сахарозу). Пневмококк является каталазоотрицательным и оксидазоотрицательным микроорганизмом.

Важным отличительным признаком пневмококков является ферментация инулина, позволяющая отличить его от зеленящего стрептококка, не обладающего способностью разлагать инулин. Пневмококк свертывает молоко, желатин не разжижает.

Пневмококк колонизирует верхние отделы дыхательных путей человека. У людей он является одним из возбудителей менингита, среднего отита, синусита, внебольничной пневмонии. Реже пневмококк вызывает эндокардиты, септический артрит, флегмоны и другие инфекции. Пневмококковая инфекция поражает как взрослых, так и детей и часто проявляется как осложнение других инфекций, в частности, вирусных.

Лабораторная диагностика пневмококковой инфекции. Исследуемый материал – кровь, спинномозговая жидкость (при диагностике инвазивных форм пневмококковой инфекции), мокрота, жидкость из полости среднего уха (при неинвазивных заболеваниях).

Микроскопическое исследование окрашенного по Граму мазка, приготовленного из исследуемого материала, позволяет обнаружить капсульные грамположительные

Основным методом лабораторной диагностики пневмококковой инфекции является бактериологический (культуральный) метод. Он основан на выделении S. pneumoniae. Для выделения пневмококков материал высевают на кровяной агар и инкубируют в атмосфере углекислого газа при температуре 37ОС в течение суток.

Дальнейшему исследованию подвергают сероватые колонии, образующие α-гемолиз (зеленое окрашивание агара вокруг колоний). Пневмококки, имеющие сильно развитую капсулу, на кровяном агаре образуют выпуклые сероватые слизистые (напоминающие капли масла) колонии диаметром несколько миллиметров.

Характерным для S. pneumoniae является ингибирование роста культуры оптохином (чувствительность к оптохину).

ПЦР основана на выявлении фрагментов специфических генов, кодирующих синтез аутолизина, пневмолизина, поверхностных белков клеточной стенки и др.

Профилактика пневмококковой инфекции. С целью специфической профилактики пневмококковой инфекции в Российской Федерации зарегистрированы 7-валентная, 10-валентная, 13-валентная конъюгированные вакцины и поливалентная пневмококковая вакцина.

Вакцина пневмококковая конъюгированная адсорбированная 7- валентная содержит коньюгаты геннмодифицированного нетоксичного дифтерийного белка CRM197 с пневмококковыми полисахаридами серотипов 4, 6В, 9V, 14, 18C, 19F и 23F.

Вакцина пневмококковая 10-валентная конъюгированная с D-протеином нетипируемой Haemophilus influenzae, столбнячным и дифтерийным анатоксинами адсорбированная содержит полисахариды 1, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 23F. К таким препаратам относится вакцина Синфлорикс.

Вакцина пневмококковая полисахаридная конъюгированная адсорбированная 13-валентная представляет собой комплекс полисахаридов 13 серотипов пневмококка (1, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 23F),

индивидуально конъюгированных с дифтерийным белком CRM197 и адсорбированных на фосфате алюминия.

Конъюгированные вакцины предназначены, в первую очередь, для вакцинации детей с первого года жизни

Полисахаридная поливалентная пневмококковая вакцина содержит капсульные полисахариды S. pneumoniae 23 серотипов (1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F, 33F). Вакцину Пневмо 23, содержащую полисахариды 23 серотипов, применяют детям старше 2 лет. Для вакцинации необходима всего одна доза вакцины

Длительность иммунитета после вакцинации составляет от 3-5 лет до 10 лет.

Прививка особенно рекомендуется пациентам из групп риска: - лицам в возрасте старше 65 лет (летальность от пневмококковой пневмонии у них достигает 40%);

- пациентам с хроническими заболеваниями сердечно-сосудистой, дыхательной систем, сахарным диабетом, циррозом печени;

- детям в возрасте до 5 лет, часто болеющим инфекциями дыхательных путей.

Лечение пневмококковой инфекции проводится с использованием антибиотиков. Однако в последние годы возросло количество сообщений о распространении пневмококков, устойчивых к пенициллинам, макролидам, триметоприму/сульфаметоксазолу, цефалоспоринам III поколения.

66. Менингококки: название возбудителя по-латыни, морфология, отношение к окраске по Граму, питательные среды и условия культивирования, серологические типы, механизм заражения, вызываемые заболевания, носительство, материал для исследования и методы диагностики, лечебные и профилактические препараты.

Neisseria meningitidis

Морфология Менингококки – мелкие (размером 0,6-0,8 мкм) грамотрицательные, различающиеся по величине (полиморфные) диплококки (кофейные зёрна). Неподвижны, спор не образуют, имеют пили 4-го типа и полисахаридную капсулу.

Дыхание: строгие аэробы, капнофилы Питание: хемогетероорганотрофы

Рост: преимущественно бесцветные мутноватые S-колонии без зоны гемолиза, на жидких питательных средах – поверхностная пленка и диффузный рост при аэрации.

Среды: с добавлением крови, сыворотки, углеводов и белков и ростовых факторов, CO2 5% (КА, АА, СА)

Т: 37°С pH: 7,2-7,4.

Каталазо- и оксидазоположительны, ферментируют глюкозу и мальтозу.

Известно 13 серогрупп менингококков: А, В, С, D, H, I, K, L, X, Y, Z, W-135, 29E, но только три из них — А, В, С — ответственны за более чем 90% всех генерали- зованных форм менингококковой инфекции.

Механизм передачи: Аэрогенный (пути: воздушно-капельный), возможен эндогенный со слизистой зева, носоглотки.

Менингококковая инфекция протекает в двух формах:

Локализованная – бактерионосительство / назофарингит.

Генерализованная – менингококкемия, эпидемический цереброспинальный гнойный менингит, менингоэнцефалит

Осложнения: эндокардит, артрит, полиартрит, иридоциклит, пневмония.

Микробиологическая диагностика: Исследуемый материал: ликвор, кровь, носоглоточная слизь с задней стенки глотки, сыворотка крови (в зависимости от формы инфекции). Материал транспортируется в лабораторию в утепленных контейнерах при 35—37 "С

1) Бактериоскопический метод – окраска по Граму.

2) Бактериологический метод – КА, АА при 37°С 18—20 ч.

3) Экспресс-диагностика – РИФ, ИФА с АТ к группоспецифичным Аг в парных сыворотках, реакции коагглютинации, молекулярно - биологическое исследование – ПЦР.

Лечение: На основе антибиотикограммы – антибтотикотерапия (бензилпенициллин, ампициллин и др., левомицетин, рифампицин). Иммунитет после генерализованной инфекции стойкий, напряженный, длительный, группоспецифичный, преимущественно гуморальный.

Профилактика: Неспецифическая профилактика: санация и изоляция носителей среди медицинского персонала, улучшение санитарно-гигиенического режима, повышение защитных сил макроорганизма.

Специфическая профилактика: по эпидемиологическим показаниям применяют полисахаридные вакцины против менингококков групп А и С, для экстренной профилактики контактным пациентам вводят противоменингококковый иммуноглобулин.

67. Гонококки: название возбудителя по-латыни, морфология, отношение к окраске по Граму, питательные среды для культивирования, резистентность во внешней среде, механизм заражения, вызываемые заболевания, материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для лечения.

Таксономия. Семейство – Neisseriaceae, вид – Neisseria gonorrhoeae.

Морфология. Гонококк – грамотрицательный диплококк бобовидной формы, неподвижен(отсутствие жгутиков), спор не имеет, гонококки имеют микрокапсулу, которая при пересевах может утрачиваться. Имеют пили I типа. При неблагоприятных условиях, в том числе и под действием пенициллина, способны образовывать L-формы.

Тинкториальные свойства. По Граму окрашиваются отрицательно. Гонококки под влиянием химиопрепаратов могут менять свойства и образовывать грамположительные формы. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями (метиленовым синим, фуксином, бриллиантовым зеленым и др.).

Культуральные свойства. Гонококки – аэробы. Требовательны к питательным средам, растут на свежеприготовленных, питательных средах с добавлением нативного белка (кровь, сыворотка, асцитическая жидкость), для роста нуждаются в присутствии 5-10% СО2 и повышенной влажности. На жидких питательных средах растут диффузно и образуют поверхностную пленку, через несколько дней оседающую на дно. На плотных питательных средах образуют прозрачные колонии в виде капелек росы диаметром 1-3 мм с ровным краем.

Биохимические свойства. Гонококки разлагают только глюкозу с образованием кислоты, образуют каталазу и цитохромоксидазу, протеолитических свойств не имеют.

Антигенная структура Гонококков отличает уникальная генетическая особенность – высокая антигенная изменчивость, которая может происходить на протяжении периода генерации одной популяции: K-антиген; О-антиген – липополисахариды клеточной стенки; белки клеточной стенки – протеины I, II, III (на основании белка I выделяют 16 серотипов).

Резистентность. Гонококки неустойчивы во внешней среде, вне организма человека быстро погибают: при нагревании до 560С гибнут за 5 мин., плохо переносят высушивание, УФЛ, чувствительны к дезинфицирующим средствам и антибиотикам (β-лактамные, аминогликозиды).

Факторы патогенности. капсула – защищает клетку от фагоцитоза, пили (фимбрии) – прилипание к эпителиальным клеткам слизистых оболочек, эндотоксин – липополисахарид клеточной стенки бактерии, поверхностные белки наружной

мембраны (адгезины) – способствуют адгезии, протеазы - инактивируют АТ, препятствующие адгезии, что облегчает прикрепление к рецепторам эпителиальных клеток.

Роль в патологии и эпидемиология. Гонококки являются факультативными внутриклеточными паразитами и вызывают гонорею, а также являются возбудителями конъюктивита новорожденных. Гонокковая инфекция – строгий антропоноз. Источник инфекции – больной человек. Механизм передачи – контактный (пути – прямой контактный/половой, реже – непрямой контактный). Инфицирование плода возможно при прохождении через родовые пути матери, больной гонореей. Иммунитет. После перенесенной гонореи иммунитет не вырабатывается.

Микробиологическая диагностика. Исследуемый материал: при гонорее – гнойное отделяемое уретры, влагалища, шейки матки;

1. Бактериоскопический метод (мазок из исследуемого материала, окраска метиленовым синим при гонорее, микроскопия). Данный метод является основным и окончательный ответ дается на основании обнаружения в мазках Грам- диплококков бобовидной формы с внутри- и внеклеточным расположением, а в мазках, окрашенных метиленовым синим – незавершенный фагоцитоз (остальные методы микробиологической диагностики применяются только при хронической гонорее).

2. Бактериологичекий метод – выделение чистой культуры возбудителя и ее идентификация.

3. Серологический метод: * РИФ, РСК (Борде-Жангу) при хронической гонорее (с 3-ей недели заболевания).

4. Биологический метод.

Специфическая профилактика и лечение. Средства специфической профилактики гонореи отсутствуют, что обусловлено высокой антигенной изменчивостью гонококков. Для предупреждения конъюктивита новорожденным сразу после рождения закапывают в конъюктивальный мешок (девочкам также в половую щель) 1-2 капли раствора сульфацила натрия или антибиотика (пенициллины, цефалоспарины).

Для лечения хронических или осложненных форм гонореи используют гоновакцину. Основу лечения составляет рациональная терапия антибиотиками.

68. Возбудители холеры: название по-латыни, морфология, отношение к окраске по Граму, питательные среды для культивирования, антигенная структура, факторы вирулентности, источники инфекции, механизм и пути заражения, клинические проявления заболевания, материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, правила взятия и транспортировки материала, режим работы лаборатории, лечебные и профилактические препараты.

Таксономия: Семейство: Vibrionaceae Род: Vibrio Вид: V. Cholerae Биовары: V. cholerae cholerae (asiaticae, classicae) V. cholerae eltor V. cholerae bengalii (О139) Всего род Vibrio включает 36 видов (V. parahaemolyticus, V. vulnificus, V. metschnigovii, V. proteus, V. albensis, V. alginoluticus, V. mimicus, V. damsela… – возбудители холероподобных заболеваний)

Морфология и тинкториальные свойства. Слегка изогнутые грамотрицательные палочки (хорошо окрашиваются анилиновыми красителями) средних размеров (0,2-0,4×1,5-4 мкм), монотрих (жгутик в 2-3 раза длиннее тела, повышенная подвижность, снаружи покрыт оболочкой, образованной выростом наружного слоя клеточной стенки и напоминающей ундулирующую мембрану), спор и капсул не образует. В старых культурах – полиморфны (кокковидные и нитевидные формы). В мазках из нативного материала располагаются в виде «стайки рыб». При лечении антибиотиками подвижность уменьшается и может превращаться в L-формы

Культуральные свойства. Строгий аэроб (факультативный анаэроб, но лучше растет в аэробных условиях), хемоорганогетеротрофы, оптимальная температура роста 370С, время культивирования – 6-24 часа, хорошо растет на обычных питательных средах, но требователен к pH (галофил), оптимальная pH 8,0-9,0. В 1% щелочной пептонной воде через 6-8 часов отмечается рост в виде нежной, тонкой, голубоватой пленки (при встряхивании разрушается). На плотной среде (щелочной агар) через 10-12 часов вырастают мелкие (1,5-2 мм), маслянистые, гладкие, прозрачные, голубоватые колонии с ровным краем (S-формы). При длительном культивировании колонии увеличиваются в размерах, становятся мутными, с плотным центром, пигментированные (коричневого или желтого цвета), шероховатые (R-формы), бактерии из них не чувствительны к бактериофагам, антибиотикам и не агглютинируются О-сывороткой. На щелочно-кровяном агаре V. eltor дает зону гемолиза. На ТСBS- агаре (с тиосульфатом, цитратом, солями желчных кислот и сахарозой) образуют желтые колонии.

Биохимические свойства. Активны, оксидазоположительны, V. cholerae eltor и V. cholerae bengalii могут давать положительную реакцию Фогеса-Проскауэра, расщепляют многие сахара (глюкозу, лактозу, мальтозу, маннит, гликоген, крахмал…) с образованием кислоты без газа. По способности ферментировать сахарозу, арабинозу и маннозу все вибрионы по классификации Хейберга разделены на 6 групп. Холерные вибрионы принадлежат к 1 группе – расщепляют сахарозу, маннозу и не расщепляют арабинозу. Также не сбраживают рамнозу, дульцит, инулин, инозит. Разжижают желатин в виде воронки, образуют индол, разлагают мочевину до аммиака, восстанавливают нитраты в нитриты, свертывают кроличью плазму, разжижают свернутую сыворотку, молоко. Н2S не образуют.

Антигенная структура.

• О-антиген – группо- и типоспецифический, термостабильный ЛПС КС. В роду Vibrio по О-антигену выделяют более 200 серогрупп. Холерный вибрион относится к О1 и О139 группам. Внутри О1 группы О-антиген неоднороден и включает три компонента – А, В и С, по сочетанию которых выделяют три серотипа: АВ – Огава (Ogava), АС – Инаба (Inaba), АВС – Гикошима (Hicoshima). Вибрионы, не агглютинирующиеся сыворотками групп О1 и О139, называются неагглютинируемыми – НАГ вибрионами, вызывают холероподобные заболевания.

• Н-антиген – термолабильный, общий, белковой природы.

• Эндотоксин – стимулирует выработку вибриоцидных антител.

• Холероген – запускает синтез антитоксических антител.

Факторы патогенности. Токсины:

• Эндотоксин – ЛПС клеточной стенки, термостабильный, вызывает местное воспаление в тонком кишечнике, его сокращение (запускает каскад арахидоновой кислоты, что приводит к синтезу простагландинов E, F) и индуцирует синтез антител.

• Экзотоксин=энтеротоксин=холероген (основная роль в патогенезе) – термолабильный белок, состоит из двух компонентов: А и В. Компонент В – нетоксичный, обладает способностью соединяться с рецепторами эпителиальных клеток тонкого кишечника, облегчая проникновение в клетку компонента А. Компонент А составляют субъединица А1 (активный центр) и субъединица А2, связывающая А и В. Субъединица А1 активирует внутриклеточную аденилатциклазу, приводя к увеличению внутриклеточного содержания цАМФ и выходу жидкости и электролитов из клеток либеркюновых желез в просвет кишечника.

Ферменты патогенности: Нейраминидаза;

• Гиалуронидаза;

• Муциназа;

• Протеазы;

• Лецитиназа;

• Гемолизин V. eltor.

Структурные и химические компоненты клетки: Пили I типа;

• Жгутик, обусловливающий движение, а также преодоление слизистого слоя и взаимодействие с эпителиальными клетками;

• Фактор G – фактор проницаемости.

Резистентность. Выживаемость во внешней среде зависит от pH среды, вибрионы чувствительны к действию прямых солнечных лучей, высокой температуре (при 500С погибают за 30 минут, 1000С – через несколько секунд), высушиванию. В открытых водоемах сохраняются от нескольких дней до 3 месяцев, в почве от 8 дней до 3 месяцев, в выгребных ямах – до 3-4 месяцев, в морской воде до 47 суток, в сточных водах – 1-2 суток. Сохраняются в молоке и молочных продуктах от 5 дней до 4 недель, на фруктах 1-2 дня, на сырых овощах – 2-4 дня. Устойчивы к действию низких температур (во льду могут сохраняться до 1-4 месяцев). Высокочувствительны к кислотам (KMnO4 – 15 минут), хлорсодержащим дезсредствам (10 минут), антибиотикам тетрациклинового ряда, V. eltor устойчив к полимиксину в отличие от V. cholerae asiaticae.

Роль в патологии. Холера – острое инфекционное особо-опасное заболевание с тенденцией к эпидемическому и пандемическому распространению, протекающее по типу острого гастроэнтерита с резким нарушением водно-солевого обмена, сопровождающееся обезвоживанием и тяжелой интоксикацией.

Эпидемиология. Антропоноз. Источник инфекции – больной человек или вибриононоситель.

Механизм заражения: фекально-оральный (пути – водный, алиментарный, контактно- бытовой). Определенную роль в распространении холеры играют мухи.

Патогенез и клинические особенности. Входные ворота – тонкий кишечник, основная роль принадлежит холерогену, вызывающему дегидратацию и обессоливание организма. Вибрион находится только в тонком кишечнике, размножается, не распространяясь по организму, вибрионемия отсутствует.

Инкубационный период – от нескольких часов до 2-3 дней.

Клинические периоды холеры:

1. Холерный энтерит: на фоне нормальной температуры редкий жидкий стул, боли в животе, тенезмы, через 1-2 дня присоединяется рвота.

2. Острый гастроэнтерит: частая рвота, урчание в животе, испражнения приобретают вид

3. «рисового отвара» (мутная жидкость с плавающими остатками слизи и клетками эпителия), акты дефекации учащаются (выделяют до 30 литров в сутки), язык покрывается налетом, количество мочи уменьшается, выраженная жажда, обезвоживание.

4. Холерный алгид – t 35°C, кожные покровы серые, синюшные, морщинистые, лицо Гиппократа (facies hippocratica): нос заострен, глаза запавшие, выступающие скулы, афония, гипотония. Смерть наступает от сердечно-сосудистой и почечной недостаточности в результате обезвоживания и интоксикации.

Иммунитет. Постинфекционный иммунитет – напряженный, непродолжительный, антимикробный и антитоксический.

Микробиологическая диагностика. Исследуемый материал – фекалии, рвотные массы, желчь, секционный материал, мухи, пищевые продукты, вода, ил, гидробионты, сточные воды. 1. Бактериоскопический метод.

2. Бактериологичекий метод (основной).

3. Экспресс-методы – РИФ, реакция иммобилизации вибрионов О1-сывороткой и бактериофагом, ПЦР.

4. Серологический метод – РА, РПГА, РИФ, ИФА.

Предварительный положительный ответ при диагностике холеры выдается через 5-6 часов на основании обнаружения в посевах культур, агглютинирующихся на стекле холерной О1-сывороткой (в разведении не менее 1:100) и положительном результате ускоренных методов исследования.

Окончательный положительный ответ выдается через 18-48 часов на основании выделенных культур, имеющих типичные морфологические признаки с учетом данных развернутой реакции агглютинации с холерными сыворотками О1, Огава, Инаба, пробы с холерными диагностическими фагами, принадлежности к 1 группе Хейберга.

Профилактика. Неспецифическая: раннее выявление больных и носителей, усиление санитарно- гигиенического надзора, санитарно-просветительская работа, введение карантинных мероприятий.

Специфическая – вакцинация по эпидемиологическим показаниям одной из вакцин:

• холероген-анатоксин;

• холероген-анатоксин в сочетании с О-антигеном холерного вибриона Инаба и Огава;

• химическая вакцина из штаммов классического вибриона и V. eltor (химическая бивалентная таблетированная вакцина);

• убитая вакцина из штаммов Огава и Инаба или штаммов вибриона Эль-Тор.

Лечение. Неспецифическое: восстановление водно-электролитного баланса, антибактериальные препараты (тетрациклин, левомицетин, ко-тримоксазал, фуразолидон и т.д.).

Специфическая – бактериофаги (в практике не применяются).

Способы отбора проб 1. Испражнения и рвотные массы в объеме 10-20г. стерильными ложками или стеклянными трубками с резиновой грушей переносят из судна (лотка) в стерильную банку или пробирку.

2. Для взятия материала у больных с обильным водянистым стулом можно использовать резиновый катетер №26 или №28, один конец которого вводят в прямую кишку, а другой отпускают в банку или пробирку. Жидкие испражнения набирают в сосуд свободно или при легком надавливании на брюшную полость – стенку.

3. Стерильный ректальный ватный тампон из гигроскопичной ваты вводят в прямую кишку на глубину 5-6см и собирают им содержимое со стенок кишечника. Тампон опускают во флакон или пробирку с 1% п.в., обломив часть деревянного стержня.

4. Стержневую петлю из алюминиевой проволоки перед забором материала смачивают стерильным физ. р-ром и вводят в прямую кишку на 8-10см. Взятый материал переносят во флакон или пробирку с 1% п.в.

5. Желчь берут при дуоденальном зондировании в лечебном учреждении. В отдельные пробирки собирают 2 порции. Из желчного пузыря и желчных протоков материал доставляют нативным.

6. От умерших с подозрением на холеру берут отрезки верхней, средней и нижней частей тонкого кишечника длиной около 10см. Отрезки вырезают между двойными лигатурами, наложенными на оба конца изымаемого участка кишечника.

69. Возбудители газовой анаэробной инфекции: названия по-латыни возбудителей, морфология, отношение к окраске по Граму, культивирование, токсины и ферменты патогенности, особенности возникновения инфекции, клинические проявления болезни, материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, диагностические препараты, лечебные и профилактические препараты.

Семейство: Bacillaceae Род: Clostridium Виды: Cl. Perfringens; Cl. septicum (палочка Гона-Сакса) ; Cl. novyi = Cl. Oedematiens; Cl. sordellii ; Cl. histolyticum («расплавляющая ткани») – 1-2 % Cl. sporogenes ; Cl. Fallax; Cl. Bifermentans; Cl. ramosum и т.д. (около 20 видов).

Морфология. Крупные палочки, размеры 1-3×2-10 мкм (Cl. novyi в длину может достигать 22 мкм), все кроме Cl. perfringens, имеют перитрихиально расположенные жгутики, капсулу образует только Cl. perfringens (в организме человека); образуют субтерминально расположенные споры (Cl. perfringens – центрально).

Тинкториальные свойства. Грамположительные, по методу Ожешко споры окрашиваются в красный цвет, вегетативные формы – в синий; капсулу выявляют по методу Бурри-Гинса.

Культуральные свойства. Строгие анаэробы (исключение Cl. perfringens – аэротолерантные), хемоорганогетеротрофы. Оптимальная температура роста 37-450С, рН среды 7,2-7,4, время культивирования от нескольких до 24-48 часов. Требовательны к питательным средам, растут на средах с добавлением белков и углеводов (кровяной, сахарный агар, среда Китта-Тароцци, Вильсона-Блера – железосульфитный агар). В ЖПС (жидкие пит. среды) – рост в виде равномерного помутнения с выделением газа, Cl. novyi дает хлопьевидный осадок в виде «свeжевыпaвшего снега. На кровяном агаре могут быть S-(круглые гладкие дискообразные колонии) и R-(бугристые, шероховатые с изрезанными кружевными краями) формы колоний с зоной гемолиза (кроме Cl. histolyticum). В столбике сахарного агара 2 типа колоний – R (диско/чечевицеобразные) и S (пушистые в виде комочков ваты). На среде Вильсон-Блера – черные или зеленоватые колонии за счет восстановления сульфита натрия с образованием сернистого железа.

Биохимические свойства. Различные: сахаролитическая активность наиболее выражена у Cl. perfringens (расщепляет все сахара, кроме маннита и дульцита, до кислоты и газа), Cl. sporogenes ферментирует глюкозу, маннит и галактозу, Cl. septicum – глюкозу и лактозу, Cl. novyi – лишь глюкозу, Сl. histolyticum и Cl. sordellii углеводы не усваивают. Протеолитические свойства максимально выражены у Cl. histolyticum: быстро разжижает желатин, пептонизирует молоко через 24 часа (становиться прозрачным), в среде Китта-Тароцци через 2-3 часа расплавляет кусочки печени, разжижает свернутую сыворотку; аналогичные протеолитические свойства и у Cl. perfringens: активно свертывает молоко (через 3 часа образует серо-желтый сгусток казеина, который выбрасывается газами под пробку – «штормовая реакция»), разжижает желатин; Сl. novyi, Cl. septicum и др. медленно свертывают молоко, разжижают желатин. Все образуют индол и Н2S.

Антигенная структура.

* О – у всех;

* Н – кроме Cl. perfringens

* К – у Cl. perfringens.

Для идентификации возбудителей серотипирование не используется, только учитывают антигенную специфичность токсинов. У Cl. perfringens по антигенной специфичности токсинов выделяют 6 сероваров – А, В, С, D, E, F (патогенные А, D, F), у Cl. novyi – 3 антигенных варианта (A, B, D, отличающихся не только антигенами, но и биологическими свойствам), Cl. septicum – 6 сероваров (A, B, C, D, E, F).

Факторы патогенности. Экзотоксины, обладающие ферментативными свойствами (обладают дерматонекротическим, гемолитическим, летальным действием; мишени– биологические мембраны в различных тканях; поражение обусловлено ферментативными процессами, катализирующими гидролитическое расщепление и нарушение клеточной проницаемости с последующим отеком и аутолизом тканей, характерным для газовой гангрены): * α (альфа), β (бета), γ (гамма) – лецитиназа (лейкоцидин); * δ (дельта) – гемолизин; * ε (эпсилон) – липаза; * ζ (зета) – желатиназа; * η (эта) – тропомиозиназа; * θ (тета) – эластаза; * ι (иота) – фибринолизин; * κ (каппа) – коллагеназа; * λ (лямбда) – протеиназа; * μ (мю) – гиалуронидаза; * ν (ню) – ДНК-аза.

* Энтеретоксин у серотипов А и С Cl. perfringens – термолабильный протеин, образующийся при споруляции бактерий в толстом кишечнике (тип А вызывает токсикоинфекции, тип С – некротический энтерит).

Резистентность. вегетативные формы чувствительны к кислороду, УФЛ, высоким температурам, дезинфектантам, антибиотикам (β-лактамные антибиотики, аминогликозиды);

• споровые формы устойчивы к высоким температурам (Cl. novyi при 1000С погибает в течение 1-2 часов, Cl. perfringens – 10-30 минут, Cl. septicum – несколько минут), дезинфектантам в рабочих концентрациях

Роль в патологии * анаэробная раневая инфекция (газовая гангрена);

* пищевые отравления (энтеротоксин Сl. perfringens).

Эпидемиология. Естественной средой обитания является кишечник животных, особенно свиней, реже человека (Cl. perfringens 25-30 %).

Источник инфекции: здоровый человек и животные.

Механизм: контактный (путь – прямой контактный).

Факторы передачи: почва, вода. Входные ворота: раневая поверхность.

Развитию газовой гангрены способствуют факторы:

• массивное загрязнение раны почвой;

• бактериальные ассоциации (одновременное попадание анаэробов и аэробов): клостридии, стафилококки, протеи, псевдомонады…;

• разрушение глубоких мышц (глубина и распространенность повреждения);

• недостаток кислорода в ране (колотые, огнестрельные);

• нарушение кровообращения в ране (наложение жгута);

Патогенез и клинические особенности газовой гангрены. I фаза – инфекционная: споры прорастают, вегетативные формы размножаются в ране и продуцируют токсины с ферментативными свойствами, которые разрушая мышечную и соединительную ткани, расширяют зону некроза (усиливаются боли в области раны, покрывается серым налетом с последующим отеком и почернением тканей); при ферментации мышечного гликогена выделяется молочная кислота, углекислый газ, водород, появляется симптом крепитации, при разрыве тканей выделяется темная жидкость с неприятным гнилостным запахом.

II фаза – токсическая: интоксикация, обусловленная токсинами и продуктами распада тканей, гемоглобинурия, почечная недостаточность, смерть наступает от сосудистого шока.

Инкубационный период: от нескольких часов до 5 дней Продолжительность заболевания: 5-6 дней (летальный исход в 60%).

Иммунитет. Выражен естественный иммунитет из-за наличия в кишечнике здорового человека клостридий; постинфекционный – непрочный, непродолжительный, ведущая роль принадлежит антитоксическому иммунитету.

Микробиологическая диагностика. Исследуемый материал – гной, раневое отделяемое, отечная жидкость, кусочки мышечной ткани, некротизированная ткань, перевязочный и шовный материал.

1. Бактериоскопический метод.

2. Бактериологичекий метод (основной).

3. Экспресс-методы – РИФ, газожидкостная хромотография раневого отделяемого.

4. Биологический метод – токсичность культур в РБН.

Профилактика. Неспецифическая: своевременная первичная хирургическая обработка раны с удалением некротизированных тканей, почвы и других инородных тел.

Специфическая по экстренным показаниям:

• секстаанотоксин (Cl. perfringens, Cl. novyi, Cl. tetani, Cl. botulinum типов А, В, Е);

• поливалентный бактериофаг для обкалывания раны;

• поливалентная противогангренозная антитоксическая лошадиная сыворотка в дозе 30 тыс. МЕ;

• поливалентный иммуноглобулин.

Лечение. Неспецифическое: антибиотики (β-лактамы, аминогликозиды), сульфаниламиды.

Специфическое: поливалентная противогангренозная антитоксическая лошадиная сыворотка в дозе 150 тыс. МЕ по методу Безредко (дробно) с предварительной пробой Урбаха на индивидуальную чувствительность к чужеродному белку с нормальной лошадиной разведенной (1:100) сывороткой внутрикожно в область предплечья.

70. Возбудители столбняка: название по-латыни, морфология, окраска по Граму, культивирование, токсинообразование, пути заражения, клиническое проявление болезни, материалы для исследования и методы диагностики, диагностические препараты, лечебные и профилактические препараты.

Таксономическое положение Семейство Clostridiaceae Род Clostridium Вид C. tetani

Морфология и тинкториальные свойства Гр+, крупные, но тонкие палочки Перетрихи Капсулу не образуют Образуют круглые, превышающие диаметр клетки споры, которые располагаются терминально, что придает бактериям вид булавок или барабанных палочек. по методу Ожешко споры окрашиваются в красный цвет.

Культуральные и биохимические свойства Хемоорганотроф. Строгий анаэроб. Культивируется при 37С, рН 7,0-7,9.

Требовательны к питательным средам, растут на средах с добавлением белков и углеводов (кровяной, сахарный агар, среда Китта-Тароцци). В ЖПС – рост в виде равномерного помутнения. На кровяном агаре образуют R-(мелкие с неровным кружевным краем) и S-(в виде росинок) с зоной гемолиза. В столбике сахарного агара – R-(чечевицеобразные) и S-(пушистые в виде комочков ваты с плотным коричневым центром) колонии.

Низкая биохимическая активность: сахара не ферментируют (иногда глюкозу, лактозу, сахарозу), протеолитическая активность слабая (медленно, в течение 4-7 дней, свертывают молоко, разжижают желатин, восстанавливают нитраты, образуют индол и аммиак, Н2S не выделяют).

Антигенная структура. * О-АГ; * Н-АГ – типоспецифические (различают 10 сероваров, но все выделяют одинаковый токсин, поэтому серотипирование на практике не применяется).

Факторы патогенности. * Экзотоксин (нейротропный) – по силе действия 2-е место среди биологических токсинов, состоит из двух фракций:

• Тетаногемолизин-вызывает гемолиз эритроцитов, оказывает кардиотоксическое и летальное действие.

• Тетаноспазмин-играет ведущую роль в патогенезе заболевания как фактор патогенности. Механизм его заключается в ингибиции инактиваторов ацетилхолина, что ведет к повышению раздражимости мотонейронов ЦНС и возникновению непроизвольных тонических судорожных сокращений поперечнополосатой мускулатуры.

* Фермент патогенности – желатиназа.

Резистентность. * вегетативные формы малоустойчивы во внешней среде: при 60-700C погибают в течение 30 мин., в обычных дез. растворах – 15-20 мин.;

* споры высокоустойчивы: при 1000C – до 1-3 часов, в почве – десятки лет, в дез. растворах – 8-24 часов (в 5 % растворе карболовой кислоты до 10 час, 1 % растворе формалина – 6 часов)

* токсин – во внешней среде нестоек (разрушается при длительном хранении в термостате, под действием света и кислорода), но устойчив к ферментам желудочно-кичшечного тракта

Эпидемиология. Естественной средой обитания является кишечник животных и человека.

Источник инфекции: здоровый человек и животные.

Механизм: контактный (путь – прямой контактный).

Факторы передачи: почва, пыль, предметы обихода.

Входные ворота: нарушенная целостность кожных покровов и слизистых оболочек – раны (колотые, огнестрельные), ссадины, ожоги, обморожения, родовые пути, пуповина новорожденных

Патогенез и клинические особенности столбняка. Инкубационный период: 5-14 дней.

При анаэробных условиях в ране споры прорастают и выделяют экзотоксин, который по нейрогенным, реже по гематогенным и лимфогенным путям попадает в ЦНС (спинной мозг, продолговатый мозг, ретикулярную формацию ствола), вызывая параличи вставочных нейронов рефлекторных дуг спинного и продолговатого мозга. Вырабатываемые в мотонейронах импульсы поступают к мышцам непрерывно, вызывая тоническое напряжение скелетных мышц.

Локальный столбняк – легкая форма, характеризующаяся периодическими спазмами в пораженной области.

Генерализованный столбняк – наиболее часто встречаемая форма. Болезнь у человека протекает в виде нисходящего столбняка: тризм жевательных мышц, затем мимических (risus sardonicus), ригидность мышц шеи, спины, живота, конечностей (опистотонус); через 1-2 дня начинаются клонические сокращения групп мышц в виде тетануса (длительное непрервыное сокращение скелетных мышц, обусловленное действием частых стимулов, мышцы не успевают полностью расслабиться от предыдущего сокращения или очередной стимул падает на фазу продолжающегося сокращения). Во время клонических судорог могут быть вывихи суставов, переломы конечностей, сопровождающиеся сильными болями. Приступы повторяются через 10 минут-1 час, могут провоцироваться звуковыми, световыми, тактильными раздражителями; может быть спазм мышц глотки, диафрагмы, дыхательных мышц (смерть наступает в результате асфиксии). Поражается симпатическая нервная система: повышается артериальное давление, тахикардия, спазм сосудов, гемолиз.

Столбняк новорожденных: заражение происходит в возрасте 3-10 дней через пупочную рану, заболевание протекает по типу генерализованной инфекции (нарушение сосания, поза «лягушонка» – запрокинутая голова, согнутые конечности, страдальческое выражение лица).

При послеродовом (послеабортном) столбняке возможно молниеносное течение, связанное с параличом.

Иммунитет. Постинфекционный иммунитет не создается, т.к. микродозы токсина, вызывающие заболевание, недостаточны для выработки иммунитета;

Поствакцинальный иммунитет (после введение анатоксина) – прочный, длительный (4-5 лет).

Микробиологическая диагностика. Диагностика столбняка имеет второстепенное значение. Токсин в крови не определяется, нарастания титров антител не происходит, так как нет иммунного ответа.

Исследуемый материал – гной, кусочки ткани, выделения из матки, отделяемое из пупочной раны новорожденных, кровь, перевязочный и шовный материал, смывы с хирургических инструментов.

1. Бактериоскопический метод.

2. Бактериологичекий метод (основной). (включает микроскопию мазков-отпечатков тканей и посев раневого отделяемого в анаэробных условиях, что позволяет обнаружить микроб в месте входных ворот инфекции.)

3. Биологический метод – определение экзотоксина в РБН., определение столбнячного токсина-применяется РН на белых мышах и РНГА с Ig-столбнячным диагностикумом.

4. Экспресс-диагностика-постановка РИФ с мазками и раневым отделяемым

Профилактика. Неспецифическая: предупреждение травматизма, своевременная обработка ран, автоклавирование перевязочного материала.

Специфическая: * плановая иммунизация (активная):

• вакцинация с 3-х месяцев жизни трехкратно с интервалами в 30-45 дней (3- 4,5-6 мес.) АКДС (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина);

• 1-я ревакцинация в 18 месяцев однократно АКДС;

• 2-я ревакцинация в 7 лет АДС или АДС-М для ослабленных детей однократно;

• 3-я ревакцинация в 14 лет, а затем через каждые 10 лет до 56-летнего возраста однократно АДС.

* экстренная:

• пассивная – введение противостолбнячной антитоксической сыворотки или иммуноглобулина;

• активно-пассивная – введение анатоксина (АС) + сыворотка или иммуноглобулин.

* по эпидемиологическим показаниям (военнослужащим, работникам сесльского хозяйства):

• секстанатоксин;

• вакцина TАБТе.

Лечение. Неспецифическое: первичная обработка раны, противосудорожные препараты, антибиотики, борьба с нарушением водно-электролитного баланса.

Специфическое: антитоксическая противостолбнячная лошадиная сыворотка (50-100 тыс. МЕ) или иммуноглобулин (900 МЕ) дробно на 2-3 инъекции.

71. Возбудитель ботулизма: название возбудителя по-латыни, морфология, окраска по Граму, культивирование, токсинообразование, серологические типы экзотоксина, условия возникновения болезни, материал для исследования и методы лабораторной диагностики, диагностические препараты, лечебные и профилактические препараты.

Таксономия: Сем.Bacillaceae Род Clostridium Вид Cl. botulinum

Морфология: С. botulinum — грамположительная палочка с закругленными концами размерами 4—8 мкм в длину и 0,6—0,8 мкм в поперечнике. Спора располагается субтерминально, отчего под микроскопом С. botulinum выглядит в форме теннисной ракетки. Перитрих, число жгутиков от 3 до 20.

Культуральные и биохимические свойства: Строгий (облигатный) анаэроб. Температурный оптимум 35 "С. На среде Китта—Тароцци образует муть с последующим выпадением осадка, культура издает запах прогорклого масла. На кровяном агаре формируются колонии неправильной формы с отростками, окруженные зоной гемолиза. На желатине возбудители ботулизма образуют круглые прозрачные колонии, окруженные зонами разжижения, в дальнейшем колонии становятся мутными с отростками в виде шипов.

Антигенная структура Серотипы возбудителя ботулизма сходны по морфологическим, культуральным свойствам и действию на организм человека. Каждый тип токсина отличается друг от друга по антигенной структуре. Поэтому выделяют 7 антигенных вариантов возбудителя ботулизма (A, D, C, D, E, F, G). Специфичность каждого варианта выявляют в реакции с антитоксическими сыворотками. В вегетативных клетках возбудителя ботулизма выявляют соматический Оантиген и жгутиковый Н-антиген. Эти антигены идентифицируются в реакции агглютинации. Соматический О-антиген является групповым, общим для протеолитических штаммов С. botulinum сероваров А и В. Жгутиковый Н-антиген является типоспецифическим. Он идентичен у бактерий, различающихся по варианту экзотоксинов.

Факторы патогенности Главный фактор патогенности С. botulinum — экзотоксин (один из самых сильных ядов, известных человечеству), поскольку в организме возбудитель практически не размножается. Смертельная доза для человека I мкг. Токсин состоит из двух субъединиц: одна отвечает за адсорбцию на рецепторах чувствительных клеток, другая — за проникновение внутрь путем эндоцитоза. Проникнув из кишечника в кровь, токсин поступает в периферические нервные окончания, где блокирует слияние синаптических пузырьков с мембраной. Токсин термолабилен и легко разрушается при кипячении.

К факторам патогенности клостридий ботулизма относятся также ферменты агрессии: протеиназы, лецитиназы, декарбоксилазы.

Патогенез: Клинические проявления заболевания зависят от вида пищевого продукта, ставшего причиной отравления, и от резистентности млкроорганизма. Начало клинической картины протекает по типу пищевой интоксикации, в дальнейшем поражаются бульбарные нервные образования, нарушается зрение, возникает асфиксия. Летальность при ботулизме может достигать 60%. При попадании ('. botulinum в рану возникает раневой ботулизм, который проявляется по типу пищевой интоксикации. Различают также ботулизм новорожденных, когда возбудитель проникает через пупочный канатик.

Микробиологическая диагностика: Лабораторная диагностика в первую очередь направлена на обнаружение токсина и установление его типа. Выделение возбудителя является вторичным этапом исследований. Исследуемым материалом при диагностике ботулизма являются промывные воды желудка, кровь, рвотные массы, фекалии, моча, секционный материал, остатки пищевых продуктов. Пробы отбирают в максимально короткие сроки после заболевания в стерильную посуду, не обработанную дезинфицирующими средствами. Консерванты не добавляют. До поступления в лабораторию исследуемый материал хранят в холодильнике при температуре 4-6 ОС. Кровь исследуют на наличие токсина (биопроба на мышах), фекалии – на наличие возбудителя (посев на питательные среды), остальной материал – на наличие токсина и возбудителя.

• Основным методом диагностики ботулизма является выявление токсина. Для обнаружения токсина в исследуемом материале используют реакцию нейтрализации токсина на лабораторных животных (биопроба). Для обнаружения токсинов для каждой пробы используют 4 белых мышей. Первое животное подкожно заражают только исследуемым материалом, а остальных мышей - смесью материала с 200 МЕ антитоксической диагностической сыворотки типов А, В и Е. Предварительно смеси выдерживают при комнатной температуре в течение 40 минут дня нейтрализации токсина антитоксином. Наблюдение за животными проводят в течение 4 дней. При наличии в материале токсина в течение 4-5 часов погибают все животные, кроме той мыши, которой была введена смесь токсина и гомологичной антитоксической сыворотки

• Для идентификации токсина используют классическую реакцию нейтрализации на мышах и РИГА с антитсльным диагностикумом (РОНГА) и ИФА. Методы выделения культур С. botulinum принципиально сходны с таковыми при выделении других патогенных клостридий. Бактериологическая диагностика изложена в материалах диска.

Иммунитет: Постинфекционный иммунитет отсутствует.

Специфическая профилактика: Специфическая профилактика проводится с помощью ботулинического полианатоксина (трианатоксина, содержащего анатоксины типов А, В, Е) в составе секстанатоксина, который кроме ботулинических анатоксинов содержит анатоксины Cl. perfringens, Cl. novyi и Cl. tetani. Иммунизация трехкратная. Последующие однократные ревакцинации проводят через каждые 5 лет. Для специфической профилактики применяют также тетраанатоксин очищенный адсорбированный жидкий, формирующий иммунитет против ботулизма и столбняка продолжительностью не менее 5 лет. Этот препарат представляет собой смесь адсорбированных на геле гидроокиси алюминия ботулинических анатоксинов типов А, В, Е и столбнячного анатоксина (рисунок 28). Курс иммунизации состоит из 3 прививок.

Лечение Лечение больного ботулизмом проводится в стационаре. Первая помощь заключается в промывании желудочно-кишечного тракта 2-5%-ным раствором гидрокарбоната натрия. После промывания желудка больным вводят энтеросорбенты. Затем вводят лечебные противоботулинические сыворотки, которые выпускаются в жидком и лиофильно высушенном виде. До установления типа токсина, вызвавшего заболевание, больному вводят внутримышечно поливалентную антитоксическую сыворотку или смесь сывороток типов А и Е по 10000 МЕ и типа В 5000 МЕ. После установления типа токсина на белых мышах вводят соответствующую моновалентную антитоксическую сыворотку.

72. Возбудитель дифтерии: название по-латыни, морфология, отношение к окраске по Граму, культивирование, токсинообразование, источники инфекции, механизм заражения, локализация возбудителя в организме человека, формы инфекции, материал для исследования и методы лабораторной диагностики, определение токсигенности бактерий. Лечебные и профилактические препараты.

Семейство: Сorynebacteriaceae Род Corynebacterium Вид C.diphtheriae 3 биовара:gravis, mitis, intermedius

Прямые или слегка изогнутые палочки размером 0,3-0,8×1-6 мкм, спор не образуют, неподвижны, имеют микрокапсулу. Характерно взаимное расположение бактерий в мазке – под углом друг к другу в виде букв V, X, L, Y В толстых мазках располагаются в виде «пучка булавок». Булавидные утолщения на концах связаны с наличием зерен волютина (тельца Бабеша-Эрнста) – гранулы полиметафосфата. Могут образовывать фильтрующиеся и L-формы.

Грамположительные микроорганизмы. При окраске по методу Нейссера цитоплазма окрашивается в желтый цвет, а зерна волютина – в синий. По методу Леффлера (метиленовым синим) цитоплазма – голубая, зерна волютина – синего цвета. Также используется окраска флюорохромом – корифосфином с последующей люминисцентной микроскопией (цитоплазма дает желто-зеленое свечение, а зерна волютина – коричнево-красное).

Культуральные свойства. Возбудители дифтерии – факультативные анаэробы, оптимальная температура их культивирования 370С, рН 7,3-8,0.Требовательны к питательным средам. для роста необходимо наличие аминокислот, минеральных веществ и металлов. Для культивирования применяются следующие среды:

· Среда Ру (свернутая лошадиная сыворотка) и Леффлера (свернутая лошадиная сыворотка с добавлением глюкозы) – рост в виде серовато-кремовых сухих морщинистых колоний по типу «шагреневой кожи»

. · Среда Бучина с хинозолом – рост в виде плоские темно-синие колонии.

Дифференциально-диагностическими являются среды с теллуритом (растут медленнее – 24-48 часов):

· Наиболее часто используют глицериновокровяную среду с теллуритом (Клауберг II). · Сывороточно-теллуритовый агар с цистином (Тиндаль) и другие. На теллуритовых средах C. diphtheriae образует серовато-черные колонии, что обусловлено восстановлением теллурита до металлического теллура, имеющего черный цвет

. На основании комплекса культуральных, биохимических и патогенетических свойств вид C. diphtheriae разделяется на 4 биовара: mitis, belfanti, gravis, intermedius.

Биовар mitis (легкий) характеризуется свойствами:

• Не ферментирует крахмал, гликоген и декстрин;

• Восстанавливает нитраты в нитриты;

• На средах с теллуритом образует мелкие (1-2 мм) гладкие блестящие полупрозрачные черные колонии с ровным краем;

• На жидкой среде дает равномерное помутнение и порошкообразный осадок;

• На кровяных средах дает зону гемолиза;

• Малотоксичен;

• Вызывает легкую спородическую заболеваемость.

Биовар belfanti: Сходен с биоваром mitis, но не восстанавливает нитраты (однако этот тест необязателен для идентификации, поэтому редко выделяют данный биовар)

Биовар gravis (грубый) характеризуется следующими свойствами:

• Ферментирует крахмал, гликоген и декстрин;

• Восстанавливает нитраты в нитриты;

• На средах с теллуритом формирует крупные (2-3 мм) сухие матовые плоские серо-черные колонии, приподнятые в центре, с радиальной исчерченностью и неровным краем (напоминают маргаритку);

• На жидкой среде образуется пленка и крупнозернистый осадок (надосадочная жидкость прозрачная);

• На кровяных средах не дает гемолиз;

• Обладает выраженными токсигенными свойствами;

• Выделяется от больных с тяжелой формой дифтерии, вызывает групповые вспышки.

Биовар intermedius трудноотличим от gravis, т.к. по биохимическим и культуральным свойствам сходен с биоваром gravis:

• Не ферментирует крахмал (поэтому некоторые считают больше похожим на биовар mitis);

• Расщепляет гликоген и декстрин;

• На средах с теллуритом образует мелкие (< 1 мм) сухие матовые серо-черные колонии с неровным краем;

• На жидкой среде дает помутнение с последующим образованием мелкозернистого осадка;

• Гемолиз на кровяных средах отсутствует.

Антигенная структура.

• О-антиген – групповой, липополисахарид клеточной стенки, термостабильный.

• К-антиген – типовой (около 58 сероваров), представлен капсульными нуклеопротеидами, термолабильный.

Факторы патогенности. Токсины. Дифтерийная палочка выделяет мощный экзотоксин (гистотоксин), по силе занимающий 3-е место после ботулинического и столбнячного. Дифтерийный токсин оказывает цитотоксическое действие, а также обладает дермонекротическими и гемолитическими свойствами.

Ферменты: гиалорунидаза, нейроминидаза, фибиринолизин, лецитиназа – факторы инвазии.

Структурные и химические компоненты клетки:

пили I порядка (способствуют адгезии на чувствительных клетках), микрокапсула (обеспечивает устойчивость к фагоцитозу), Cor-фактор (нарушает фосфорилирование на митохондриях) бактериоцины (корицины) – синтез кодируется плазмидами.

Эпидемиология. Антропоноз. Источник инфекции – больной человек или бактерионоситель.

Механизмы передачи инфекции:

· Аэрогенный (пути – воздушно-капельный и воздушно-пылевой); · Контактный (путь – непрямой контактный); · Фекально-оральный (путь – алиментарный – чаще через молочные продукты).

Входные ворота: слизистые оболочки носа, зева, гортани, трахеи, бронхов, конъюктивы, наружных половых органов, раневая поверхность. Инкубационный период – 2-10 дней.

Патогенез и клинические особенности. Возбудители адсорбируются на чувствительных клетках, колонизируют эпителий и секретируют дифтерийный экзотоксин, который инициирует развитие фибринозного воспаления: некроз эпителия, расширение сосудов с нарушением их проницаемости, отек тканей и выход фибриногена из сосудов. Фибриноген под влиянием тканевого тромбопластина, некротизированных тканей и атмосферного кислорода свертывается. На поверхности образуется фибринозная пленка. На многослойном плоском эпителии (слизистая зева, небных дужек, язычка, твердого и мягкого неба, миндалин) – плотная белая или серовато-белая, спаянная с подлежащими тканями, трудно снимается, обнажая кровоточащую поверхность. Процесс сопровождается регионарными лимфаденитами и повышением температуры до 38-400С. Системное действие токсина приводит к развитию токсический миокардита, поражению канальцевого аппарата почек, некрозу коркового слоя, в нервной системе – цитолиз нервных клеток с развитием параличей (мягкого неба, диафрагмы, сердца, блуждающего нерва). Смерть при дифтерии может наступить от раннего или позднего паралича сердца и диафрагмы, а также в результате истинного крупа (закупорка дыхательных путей оторвавшимися пленками).

Микробиологическая диагностика. Исследуемый материал – слизь из зева и носа, пленки с миндалин, раневое отделяемое, кровь.

1. Бактериоскопический метод. 2. Бактериологический метод (основной).

Определение токсигенности C. diphtheriae:

1. биологическая проба на животных – при внутрикожном введение морским свинкам культуры дифтерийной палочки – некроз в месте введения, последующая гибель животного;

2. заражение куриных эмбрионов (наблюдается гибель под действием токсина);

3. внесение в культуру клеток (оказывает ЦПД);

3. Серодиагностика – РПГА, ИФА, РИА, реакция ко-агглютинации, проба Шика.

4. Экспресс-диагностика – РИФ, ИФА, РПГА, реакция коагглютинации. 5.

Молекулярно-биологический метод – ПЦР (обнаружение tox-гена). Проба Шика – внутрикожное введение микродоз дифтерийного токсина (1/40 Dlm 0,2 мл). Через 48 часов появляется покраснение и инфильтрат, что свидетельствует об отсутствии антитоксических антител, при их наличии реакция не возникает.

Специфическая профилактика. Экстренная профилактика –дифтерийный анатоксин.полученный путм обработки дифтерийного токсина формалином, Ассоциированные вакцины: АКДС (абсорбированная коклюшно – столбнячная вакцина), АДС(абсорбированный дифтерийно - столбнячный анатоксин).

Специфическое лечение: Лечение. Основной метод терапии — немедленное введение специфической антитоксической противодифтерийной лошадиной жидкой сыворотки. Иммуноглобулин человека противодифтерийный для в/в введения. Ассоциированные вакцины: АКДС (абсорбированная коклюшно – столбнячная вакцина), АДС(абсорбированный дифтерийно - столбнячный анатоксин).

73. Возбудитель туберкулёза: название возбудителя по-латыни, морфология, способ окраски, культивирование, источник и механизмы заражения, материал для исследования и методы лабораторной диагностики, туберкулиновая проба, препараты для профилактики и лечения.

Таксономия. Порядок – Actinomycetales Семейство – Mycobacteriaceae Род – Mycobacterium

Виды – M. tuberculosis (92%), M. bovis (5%), M. africanum (3%)

Морфология Выраженный полиморфизм, имеют форму длинных, тонких(туберкулезис) или коротких, толстых (бовис), прямых или слегка изогнутых палочек с гомогенной или зернистой цитоплазмой; грам+, неподвижные, спор не образуют, имеют микрокапсулу, в клеточной стенке имеют миколовые кислоты, которые обеспечивают кислото- спирто- и щелочеустойчивость. Из-за большого количества липидов в клеточной стенке микобактерии плохо воспринимают анилиновые красители. Для их выявления используют окраску по Цилю-Нельсену(используют принцип термокислотного протравливания). В препаратах – скопления ярко – красных кислотоустойчивых палочек.

Культуральные с-ва Строгие аэробы (M. bovis – микроаэрофилы), оптимальная температура 370С, рН 6,4-7,2. Используют сложную среду Левенштайна-Йенсена (яично-картофельная среда с добавлением глицерина и малахитовой зелени для подавления сопутствующей флоры)

M. tuberculosis – глицеринзависим. На жидких – через 5-7 дней обр. морщинистая пленка. На плотных – на 3-4 неделе в виде светло-кремового, морщин. Чешуйчатого сухого налета с неров. Краями. Чувствительны к нему морские свинки.

M. bovis – микроаэрофил, устойчив к пиразинамиду, пируватзависим. На плотных – мелкие шаровидные, серо-белые колонии, на жидких – влажную пленку. Восприимчивы кролики.

M. africanum малопатогенный для человека, устойчив к тиоцетазону. В лаб. Не идент.

Факторы патогенности. Экзотоксины не вырабатывают.

Токсическими свойствами обладают химические компоненты клетки:

• Корд-фактор (высокотоксичен) – оказывает токсическое действие на ткани, блокирует окислительное фосфорилирование на митохондриях, тем самым нарушая функцию дыхания, защищает от фагоцитоза, подавляет миграцию лейкоцитов.

• Липиды (миколовая, фтионовая и туберкулостеариновая кислоты, фосфатидный фактор, мураминдипептид, воск Д) и полисахариды – стимулируют развитие специфического гранулематозного воспаления в тканях (образование эпителиоидных клеток, гигантских многоядерных клеток Пирогова-Лангханса).

• Туберкулопротеин – индуцирует развитие ГЗТ. Ферменты патогенности: лецитиназа, каталаза, пероксидаза

Источник и механизм заражения Антропозооноз. Источник инфекции – больной человек и животные.

Механизмы передачи:

· Аэрогенный (пути – воздушно-капельный, воздушно-пылевой);

· Фекально-оральный (путь – алиментарный);

· Контактный (путь – непрямой контактный);

· Вертикальный (путь – трансплацентарный, реализуется редко, т.к. микобактерии вызывают развитие тромбоза кровеносных сосудов плаценты).

Инкубационный период – 3-8 недель – 1 год (до 40 лет).

Методы лаб. Диагностики · Микроскопический

1.Окраска по Цилю-Нильсену;

2.Люминесцентная микроскопия с использованием акридинового оранжевого или aурамина – родамина - наиболее чувствительный и эффективный метод бактериоскопии, чувствительность- 500-1000 микобактерий / мл

· Бактериологический

Это посев на пит. Среды, используется до или в начале лечения.

По методу Прайса - материал помещают на предметное стекло, обрабатывают серной кислотой, отмывают физиологическим р-ром и вносят в питательную среду с цитратной кровью. Стекло вынимают через 3-4 суток и окрашивают по Цилю-Нильсену.

· Аллергический

Проба с туберкулином

· Серологический

· Биологический – проводят на морских свинках.

Исследуемый материал: мокрота, отделяемое свищей, промывные воды из бронхов, моча.

Профилактика спец. Плановая вакцинация в соответствии с национальным календарем прививок в возрасте 3-7 дней жизни живой аттенуированной туберкулезной вакциной БЦЖ (BCG – Bacille Calmette Guerin) – авирулентный штамм M. bovis (длительно культивируют на картофильно-глицериновом агаре с бычьей желчью).

Первая ревакцинация – в 7 лет при отрицательной пробе Манту.

Вторая ревакцинация – в 14 лет при отрицательной пробе Манту и не получившим прививку в 7 лет

Лечение Группы противотуберкулёзных препаратов

1. Группа А - изониазид и рифампицин, а также их производные.

2. Группа В -стрептомицин, канамицин, этионамид (протионамид), этамбутол, пиразинамид, флоримицин, циклосерин, производные фторхинолонов.

3. Группа С- ПАСК и тиоацетозон (тибон).

74. Возбудитель сифилиса: название по-латыни, морфология, метод окраски, источник, механизмы и пути заражения, клинические проявления (периоды), материал для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для лечения.

Сифилис – это хроническое инфекционное венерическое заболевание, характеризующееся волнообразным течением – чередованием периодов клинического проявления болезни с длительными латентными периодами.

Таксономия. Порядок – Spirochaetales Семейство – Spirochaetaceae Род – Тreponema (от греч. trepo – вращаться, nemo – нить) включает 10 видов Вид – Тreponema pallidum Подвид – pallidum

Морфология. Имеют удлиненное штопорообразное извитое гибкое тело размером 0,09-0,5х5-20 мкм, первичные завитки (от 8 до 12), расположенные на равном расстоянии друг от друга. От каждого конца клетки отходят три периплазматических жгутика, обуславливающие плавное движение трепонемы. Спор и капсул не образуют, но при неблагоприятных условиях могут превращаться в цисты и L-формы.

Тинкториальные свойства. Грамотрицательные, но плохо окрашиваются анилиновыми красителями, по Романовскому- Гимзе – в слабо-розовый цвет (от лат. pallidum – бледная), осуществляют метод серебрения по Морозову (окрашиваются в коричневый или почти черный цвет) и негативное контрастирование по Бурри, наиболее эффективное изучение в темнопольном или фазовоконтрастном микроскопе.

Культуральные свойства. Микроаэрофилы (непатогенные трепонемы – строгие анаэробы), оптимальная температура – 35-370С, рН 7,2. Бледную трепонему не культивируют на питательных средах, хотя при добавление к питательным средам почечной, мозговой ткани или асцитической жидкости на 3-5 сутки вырастают мелкие колонии, но “культуральные” штаммы трепонем изменяют свою морфологию (становятся более грубыми, короткими, полиморфными), утрачивают иммуногенность и патогенность. Трепонемы хорошо растут, не теряя своих иммунногеных и патогенных свойств в тестикулах кроликов, в куриных эмбрионах (“тканевые” штаммы), что используется для выделения и изучения возбудителя от больных.

Биохимические свойства. Малоактивны: могут разлагать некоторые сахара (глюкозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, маннит) с образованием кислоты, образуют индол и сероводород, разжижают желатин, восстанавливают нитрат серебра в металлическое серебро, что придает тканям черную или темно- коричневую окраску.

Антигенная структура. Сложная, выделяют белковые, полисахаридные и липопротеидные антигены. Липопротеидные антигены являются перекрестно-реагирующими антигенами, идентичны липидам сердечной мышцы человека и крупного рогатого скота (быков).

Факторы патогенности. Токсины – эндотоксин (ЛПС клеточной стенки).

Ферменты патогенности не выявлены;

Структурные и химические компоненты клетки: высокая подвижность за счет жгутиков, адгезины (белки наружной мембраны) и фактор, противостоящий фагоцитозу.

Эпидемиология. Антропоноз. Введением заразного материала экспериментально удается воспроизвести сифилис у обезьян, кроликов и хомяков.

Источник инфекции – больной человек. Бактерионосительства при сифилисе не бывает.

Механизмы передачи инфекции:

· Контактный (пути – половой, непрямой контактный и трансфузионный);

· Вертикальный (путь – трансплацентарный).

Входные ворота: слизистые оболочки половых органов, ротовой полости, кожа с нарушением целостности.

Инкубационный период – 3-4 недели (21-24 дня, max 90 дней). Возбудитель размножается во входных воротах и регионарных лимфатических узлах.

Патогенез и клинические особенности.

I. Первичный сифилис: в месте внедрения образуется твердый шанкр (от франц. chancre – язва)

– безболезненная язва с плотным основанием, отмечается регионарный лимфаденит. Первичные период длится 6-7 недель и делится на 2 фазы:

· 1 фаза (первые 3 недели) – первичные серонегативный сифилис;

· 2 фаза (с 4 недели) – первичный серопозитивный сифилис.

II. Вторичный сифилис (фаза генерализованной спирохетемии): наступает через 6 недель после появления твердого шанкра и продолжается 3-6 лет, по лимфотическим сосудам попадают в кровь и поражают внутренние органы и нервную систему. Характерный симптом – розовато-красные папулезно-розеолезные и пустолезные высыпания (сифилиды) на коже (вторичный свежий сифилис). Больной в этот период особенно заразен – Тreponema pallidum находится в высыпаниях, слюне, сперме и т.д. На высоте иммунного ответа большинство спирохет погибает, что обуславливает периодическое исчезновение высыпаний (латентный период), а часть спирохет образует цисты, сохраняющиеся в стенке кровеносных сосудов, лимфатических узлах и внутренних органах. При снижении напряженности иммунитета возвращаются в вегетативные формы и высыпания появляются вновь (вторичный рецидивирующий сифилис).

III. Третичный период (висцеральный сифилис): развивается через 3-4 года при отсутствии лечения, во внутренних органах появляются специфические гранулемы – гуммы (от лат. gummi – камедь), склонные к распаду и рубцеванию. Поражается костно-

хрящевая ткань (например, перегородка носа), стенки крупных сосудов. Развивается ГЗТ. Продолжительность периода – 8-20 лет. Больной малозаразен для окружающих, и серологические реакции могут быть отрицательными.

IV. Четвертичный период (нейросифилис): через 8-15 лет развивается специфическое поражение ЦНС (прогрессирующий паралич, спинная сухотка, сифилис мозга). В этот период в спинномозговой жидкости обнаруживают высокие титры специфических антител.

Инфицирование плода от больной матери в 25% случаев приводит к выкидышам и в 75% – развивается врожденный сифилис.

Различают:

• ранний врожденный сифилис – клинические симптомы появляются сразу после рождения (папулезно-розеолезные высыпания, сифилитическая пузырчатка, остеохондриты, поражения внутренних органов и нервной системы (менингиты, энцефалиты);

• поздний врожденный сифилис (в возрасте 5 лет и старше) – характеризуется триадой Хетчинсона: поражение глаз (кератит), «бочкообразные зубы», глухота, искривление большеберцовых костей в виде «саблевидных голеней».

Иммунитет. Постинфекционный иммунитет – клеточный и гуморальный, нестерильный, непродолжительный (возможны повторные заболевания), развивается ГЗТ.

Специфическая профилактика и лечение не разработаны. Неспецифическое лечение. Раньше применялись соли тяжелых металлов: препараты висмута (биохинол, пентабисептол), производные мышьяка (сальварсан, неосальварсан) и йода (йодит натрия и калия).

На сегодняшний момент в основном применяют антибиотики пенициллинового ряда.

75. Возбудитель эпидемического возвратного тифа: название по латыни, морфология, метод окраски, источник и механизм заражения, материал для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для лечения. Эпидемический возвратный (вшивый) тиф – это острая трансмиссивная инфекция, проявляющаяся рецидивирующими приступами лихорадки и общей интоксикацией.

Историческая справка. Названы в честь бактериолога А. Борреля. О. Обермейер открыл возбудителя в 1868 г., подтвердил заразность для человека Г.Н. Минх (1874 г.) и И.И. Мечников (1881 г.).

Таксономия. Порядок – Spirochaetales Семейство – Spirochaetaceae Род – Borrelia Вид – Borrelia recurrentis

Морфология. Спиралевидные бактерии размерами 0,3-0,6х3-18 мкм; имеют 3-10 неравномерных крупных первичных завитков; концы заострены; очень подвижны за счет 7-30 периплазматических жгутиков на каждом конце клетки, которые обвиваются вокруг тела; спор и капсул не образуют.

Тинкториальные свойства. Граммотрицательны, хорошо окрашиваются анилиновыми красителями, особенно после протравки фенолом, по Романовскому-Гимзе – в синефиолетовый цвет.

Культуральные свойства. Строгие анаэробы, оптимальная температура 28-350С, рН 7,2-7,4. Требовательны к питательным средам – используются среды с добавлением крови, сыворотки, асцитической жидкости, свернутого яичного желтка и факторов роста (длинноцепочечные жирные кислоты, аминокислоты и витамины). Но при культивировании в питательных средах боррелии утрачивают патогенность. Поэтому используют культивирование в курином эмбрионе и в организме восприимчивых животных (сирийских хомячках)

Биохимические свойства: малоактивны.

Антигенная структура. Слабо изучена, во время заболевания строение антигенов изменяется за счет внутригеномных рекомбинаций. Выделяют: · Поверхностный белковый антиген (белки наружной мембраны) – встречается у всех боррелий. · Вариантоспецифические антигены – характерны только для Borrelia recurrentis.

Факторы патогенности. 1. Эндотоксин. 2. Адгезины (белки наружной мембраны). 3. Высокая подвижность.

Резистентность. Во внешней среде малоустойчивы. Чувствительны к нагреванию (при 500С погибают в течение 20-30 мин), УФО, антибиотикам (пенициллинового ряда, тетрациклин, левомицетин). В почве и воде при низкой температуре могут сохраняться до 2 месяцев.

Эпидемиология. Антропоноз. Источник инфекции – больной человек. Переносчики – платяная, реже головная вошь. Механизм передачи инфекции: · Трансмиссивный (пути – через поврежденную при укусе кожу или контаминационный – при втирании гемолимфы раздавленной вши в ранку от укуса). Инкубационный период – 3-10 дней.

Патогенез и клинические особенности. Через кожу боррелии попадают в лимфатическую систему, захватываются мононуклеарными фагоцитами, размножаются, затем поступают в кровь, где частично погибают с высвобождением эндотоксина, который обуславливает общую интоксикацию, озноб, лихорадку (первичный лихорадочный период длительностью 7-10 дней), а также действует на клетки эндотелия сосудов (геморрагические инфаркты в печени, селезенке, возможен менингит). Через несколько дней вырабатываются антитела (лизины), боррелии гибнут, и лихорадка прекращается (период нормализации температуры длительностью 4-10 дней). Часть боррелий сохраняется и дает новое поколение, нечувствительное к образовавшимся лизинам. При их выходе в кровеносное русло начинается вторичный лихорадочный период. Но одновременно образуются лизины, растворяющие боррелии второй генерации. Такие приступы, вызванные новыми генерациями боррелий, могут повторяться до 7-10 (и даже 20) раз.

Иммунитет. Постинфекционный иммунитет – гуморальный, нестойкий, непродолжительный.

Лабораторная диагностика: У больного возбудитель обнаруживается в крови. Исследуют «толстые капли» и мазки крови, взятые во время приступа; окраска методом Романовского-Гимзы, по Бурри, фуксинов. При микроскопии в темном поле определяют подвижность боррелий. Для дифференциации эпидемического возвратного тифа используют заражение животных кровью больных. Морские свинки и белые мыши чувствительны к заражению эндемическим сыпным тифом, возбудитель может быть обнаружен в крови животных. Морских свинок заражают подкожно или в конъюнктиву глаза, они заболевают через 5-7 сут.; у мышей после внутрибрюшинного заражения боррелии в крови обнаруживаются через 48ч. К эпидемическому возвратному тифу эти животные нечувствительны.

Специфическая профилактика не разработана. Для лечения возвратного тифа используют пенициллин, левомицетин и мышьяковистые препараты (новарсенол).

76. Возбудитель эпидемического сыпного тифа: название возбудителя по-латыни, морфология, культивирование, источник инфекции, механизмы и пути заражения, болезнь Бриля (понятие), принципы и методы лабораторной диагностики, вакцина для профилактики.

Семейство –Rickettsiaceae Род-Rickettsia Вид- Rikettsia prowazekii

Морфология – полиморфны, могут иметь кокковидную, палочковидную и нитевидную формы. Неподвижны, не образуют спор, капсул, окрашивают обычно по Романовскому-Гимзе и Здродовскому.

Культивирование – культивируются в желточном мешке куриного эмбриона, на лабораторных животных (мыши, морские свинки) в культуре клеток. Характерно накопление микроорганизмов в больших количествах в отдельных клетках.

Источник инфекции – больной человек, переносчик платяной вши

Механизмы заражения – кровяной

Пути заражения – трансмиссивный

Болезнь Бриля – рецидив эпидемического сыпного тифа, проявляющийся через многие годы после первичного заболевания, характеризуется более лёгким течением, но типичными для сыпного тифа клиническими проявлениями. Впервые болезнь была описана американским исследователем Натаном Бриллем в Нью-Йорке в 1898 и 1910 годах.

Принципы и методы лабораторной диагностики – основным методом диагностики является серологический: применяют комплекс серологических реакций (РА, РСК, РНГА, РНИФ, ИФА); выделение возбудителя можно проводить только в специализированных риккетсиологических лабораториях.

Для исследования переносчиков можно применять экспресс-методы – метод флюоресцирующих антител (МФА), РНГА с иммуноглобулиновым диагностикумом для выявления риккетсий группы сыпного тифа. ДНК возбудителя можно выявлять в ПЦР с последующей идентификацией путем определения неклеотидных последовательностей ампликона.

Вакцина для профилактики – живая вакцина из штамма Е, комбинированная с растворимым антигеном (ЖКСВ-Е), и неживая вакцина из поверхностного антигена риккетсий Провачека.

77. Возбудитель бешенства: таксономическое положение возбудителя, структура, источники инфекции, пути заражения, клинические проявления, материал для исследования и методы лабораторной диагностики. Вакцины, показания к вакцинации.

Таксономия: Семейство – Rabdoviridae (от греч. rhabdos – прут, палка) Род – Lyssavirus

Тип – один тип – вирус бешенства

Геном вируса бешенства представлен однонитевой линейной нефрагментированой негативная (-) РНК.

Тип симметрии нуклеокапсида – спиральный.

Морфология. Пулевидная форма, размеры – 60-85×100-400 нм. Организация – сложная:

• РНК, покрытая капсидом, состоящим из белка N (от англ. nucleocapsid, нуклеопротеин, тесно связанный с РНК) и белков полимеразного (транскриптаза) комплекса – L (от англ. large) и NS;

• белок М (от англ. matrix);

• дополнительная двухслойная липидная оболочка (суперкапсид) с выступающими шипами – гемагглютининами гликопротеидной

Химический состав вируса. РНК – 2-4%, белки – 76% (капсидные, матриксные, РНК-полимераза=транскриптаза, гликопротеиды), липиды – до 20%.

Бешенство – зоонозная инфекция.

Источник инфекции – больные животные (на территории РФ, в основном, среди диких животных – это лисы; «городское» бешенство передают в 90% случаев собаки, а так же, кошки, КРС, лошади).

Вирус выделяется со слюной инфицированного животного во внешнюю среду в последние 7-10 дней инкубационного периода и на протяжении всего заболевания.

Пути передачи инфекции:

• Прямой контактный – заражение происходит при укусе и ослюнении раны.

• Редко воздушно-капельный (в пещерах, населенных летучими мышами, которые многомесячно выделяют вирусы со слюной), алиментарный (при употреблении в пищу мяса больного животного) и при трансплантации инфицированных тканей (например, роговицы глаза).

Входные ворота – поврежденные кожные покровы и слизистые оболочки.

Человек относительно устойчив к бешенству: при укусах бешеными дикими животными заболевает около 50% людей, при укусах собак – около 30%.

Инкубационный период – варьирует от 5 до 90 дней (крайний срок – до 1 года, но описаны примеры инкубационного периода продолжительностью 10 и более лет): наиболее короткий инкубационный период (10-14 дней) бывает при укусе головы и кистей рук, более длительный (1,5 месяца) – при укусе нижних конечностей.

Патогенез и клинические особенности. Первичная репродукция вируса происходит в мышечной ткани на месте укуса. Затем вирус внедряется в рецепторы периферических чувствительных нервов и по периневральным пространствам достигает головного и спинного мозга. Там вирус репродуцируется в нейронах гиппокампа, продолговатого мозга, черепных нервов, симпатических ганглиев. В результате этого возникают воспалительные, дистрофические и некротические изменения нервной системы. В цитоплазме пораженных клеток (чаще в нейронах аммонова рога, продолговатого мозга, клетках Пуркенье) образуются ацидофильные тельца-включения (Бабеша-Негри). Далее вирус проникает в слюнные железы и выделяется во внешнюю среду.

В развитии заболевания выделяют 3 стадии:

1. Предвестников (длительность 3-5 дней) – появляются головная боль, неприятные ощущения в области укуса (жжение, зуд, боль), беспокойство, страх, тревога, бессонница (явления депрессии).

2. Возбуждения (длительность 2-3 дня) – характерны агрессивность, буйство, пена у рта, слуховые и зрительные галлюцинации, судороги, появляется выраженная боязнь воды (гидрофобия), света и других раздражителей.

3. Параличей – параличи мышц конечностей, языка, лица, через 5-7 дней от начала болезни наступает смерть от паралича сердечного и дыхательного центров. Заболевание в 95% случаев заканчивается летально.

Иммунитет. Так как заболевание заканчивается летально, то постинфекционный иммунитет не изучен, хотя во время заболевания вырабатываются вируснейтрализующие антитела.

Лабораторная диагностика. Исследуемый материал: кровь, парные сыворотки, секционный материал, материал животного

Посмертный диагноз бешенства может быть подтвержден с помощью нескольких методов. Исследованию подлежит ткань мозга подозрительных на бешенство животных и умерших больных. Гистологический метод экспресс-диагностики основан на обнаружении телец Бабеша-Негри в мазках-отпечатках и гистологических срезах. Тельца окрашиваются кислыми красителями, а их зернистость - основными. При отрицательных результатах гистологических исследований применяют РИФ для обнаружения вирусов и их антигенов, а также биологическую пробу на мышах-сосунках. Окончательную идентификацию вирусов проводят в РН, РИФ и ИФА. С диагностической целью используют также ПЦР для обнаружения РНК вируса в биоптате мозга.

Для прижизненной диагностики исследуют: отпечатки роговицы, биоптаты кожи, взятые из заушной области, волосяные фолликулы с помощью РИФ; выделяют вирус из слюны, цереброспинальной и слезной жидкости путем внутримозгового заражения мышей-сосунков. Возможно определение антител у больных в сыворотке крови и цереброспинальной жидкости с помощью ИФА, непрямой РИФ, РСК, РН, РНГА.

ВАКЦИНЫ: 1. «Рабивак» (РФ) – антирабическая инактивированная УФО культуральная вакцина, изготовленная из культуры почек сирийского хомячка, зараженную аттенуированным штаммом Внуково-32.

2. КОКАВ (РФ) – антирабическая культуральная очищенная концентрированная инактивированная вакцина сухая (представляет собой культуру штамма Внуково-32, очищенную и концентрированную методами ультрацентрифугирования и ультрафильтрации).

3. Антирабическая вакцина Рабипур (Германия) – содержит инактивированный вирус бешенства, выращенный на культуре куриных фибробластов.

4. Создана генно-инженерная вакцина, содержащая гликопротеиды G вируса бешенства.

Антитела появляются через 2 недели после вакцинации. Поствакцинальный иммунитет длится от 6 месяцев до 1 года. Механизм иммунитета также связан с феноменом интерференции – фиксированный вирус значительно быстрее достигает клеток нервной системы, репродуцируется в них и препятствует внедрению уличного вируса.

Экстренная профилактика. При укусах или ослюнении необходимо промыть рану мыльным раствором и прижечь спиртовым раствором йода. Затем начинают экстренную специфическую профилактику антирабической вакциной и антирабическим гамма-глобулином (получен путем иммунизации лошадей фиксированным вирусом бешенства). Схема определяется степенью тяжести укуса, его локализацией, временем прошедшим после укуса, информацией об укусившем животном и т.д.

Лечение. Применяют антирабический гамма-глобулин в больших дозах с первых часов болезни.

ПОКАЗАНИЯ К ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ БЕШЕНСТВА Общую вторичную профилактику (вакцинопрофилактику) начинают немедленно при: - всех укусах, царапинах, ослюнении кожных покровов и слизистых оболочек, нанесенных явно бешеными, подозрительными на бешенство или неизвестными животными; - при ранении предметами, загрязненными слюной или мозгом бешеных или подозрительных на бешенство животных; - при укусах через одежду, если она повреждена зубами; - при укусах через тонкую или вязаную одежду; - при укусах, ослюнении и нанесении царапин здоровым в момент контакта животным, если оно в течение 10-дневного наблюдения заболело, погибло или исчезло; - при укусах дикими грызунами; - при явном ослюнении или повреждении кожных покровов больным бешенством человеком.

78. Возбудитель полиомиелита: таксономическое положение, структура, серологические типы, источники и механизмы заражения, материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для специфической профилактики.

Таксономия: семейство Picornaviridae, род Enterovims, вид Poliovirus.

Структура. По структуре полиовирусы — типичные представители рода Enterovirus. РНК-содержащие вирусы.

Морфология: мелкие, просто организованные вирусы, сферической формы, состоят из одноцепочечной РНК и капсида.

Культивирование: Хорошо репродуцируются в первичных и перевариваемых культурах клеток из тканей человека и сопровождается цитопатическим эффектом. В культуре клеток под агаровым покрытием энтеровирусы образуют бляшки.

Антигенные свойства: Различают 3 серотипа внутри вида: 1, 2, 3, не вызывающие перекрестного иммунитета. Все серотипы патогенны дл человека.

Патогенез и клиника. Естественная восприимчивость человека к вирусам полиомиелита высокая. Входными воротами служат слизистые оболочки верхних дыхательных путей и пищеварительного тракта. Первичная репродукция вирусов происходит в лимфатических узлах глоточного кольца и тонкой кишки. Из лимфатической системы вирусы проникают в кровь, а затем в ЦНС, где избирательно поражают клетки передних рогов спинного мозга (двигательные нейроны). Инкубационный период продолжается в среднем 7—14 дней. Различают 3 клинические формы полиомиелита: паралитическую, менингеальную (без параличей), абортивную (легкая форма). Заболевание начинается с повышения температуры тела, общего недомогания, головных болей, рвоты, болей в горле.

Иммунитет. После перенесенной болезни остается пожизненный типоспецифический иммунитет. Иммунитет определяется наличием вируснейтрализующих антител, среди которых важная роль принадлежит местным секреторным антителам слизистой оболочки глотки и кишечника (местный иммунитет). Пассивный естественный иммунитет сохраняется в течение 3—5 недель после рождения ребенка.

Микробиологическая диагностика. Материал для исследования - кал, отделяемое носоглотки, при летальных исходах — кусочки головного и спинного мозга, лимфатические узлы.

Вирусы полиомиелита выделяют путем заражения исследуемым материалом первичных и перевиваемых культур клеток. О репродукции вирусов судят по цитопатическому действию. Идентифицируют выделенный вирус с помощью типоспецифических сывороток в реакции нейтрализации в культуре клеток. Важное значение имеет внутривидовая дифференциация вирусов, которая позволяет отличить патогенные штаммы от вакцинных штаммов, выделяющихся от людей, иммунизированных живой полиомиелитной вакциной. Различия между штаммами выявляют с помощью ИФА, реакции нейтрализации цитопатического действия вируса в культуре клеток со штаммоспецифической иммунной сывороткой, а также в ПЦР.

Серодиагностика основана на использовании парных сывороток больных с применением эталонных штаммов вируса в качестве диагностикума. Содержание сывороточных иммуноглобулинов классов IgG, IgA, IgM определяют методом радиальной иммунодиффузии по Манчини.

Лечение. Патогенетическое. Применение гомологичного иммуноглобулина для предупреждения развития паралитических форм ограничено.

Профилактика. Основной мерой профилактики полиомиелита является иммунизация. Первая инактивированная вакцина для профилактики – создавала общий гуморальный иммунитет, не формировала местной резистентности слизистых оболочек ЖКТ, не обеспечивала надежную защиту.

Пероральная живая культуральная вакцина из трех серотипов штаммов. Используют для массовой иммунизации детей, она создает стойкий общий и местный иммунитет.

Неспецифическая профилактика сводится к санитарно-гигиеническим мероприятиям.

79. Возбудитель гриппа: таксономическое положение, структура, антигены, серологические типы и подтипы, источники и механизм заражения, материалы и методы лабораторной диагностики, препараты для профилактики и лечения.

Таксономия: Семейство – Orthomyxoviridae, род Influenzavirus. Различают 3 серотипа вируса гриппа: А, В и С.

Структура: Возбудитель гриппа имеет однонитчатую РНК, состоящую из 8 фрагментов. Подобная сегментарность позволяет двум вирусам при взаимодействии легко обмениваться генетической информацией и тем самым способствует высокой изменчивости вируса. Капсомеры уложены вокруг нити РНК по спиральному типу. Вирус гриппа имеет также суперкапсид с отростками. Вирус полиморфен: встречаются сферические, палочковидные, нитевидные формы.

Антигены: Бывают внутренние и поверхностные антигены. Внутренние антигены состоят из РНК и белков капсида, представлены нуклеопротеином (NP-белком) и М-белками. NP-и М-белки — это типоспецифические антигены. NP-белок способен связывать комплемент, поэтому тип вируса гриппа обычно определяют в РСК. Поверхностные антигены — это гемагглютинин и нейраминидаза. Их структуру, которая определяет подтип вируса гриппа, исследуют в РТГА, благодаря торможению специфическими антителами гемагглютинации вирусов. Внутренний антиген – стимулирует Т-киллеры и макрофаги, не вызывает антителообразования. У вируса имеются 3 разновидности Н- и 2 разновидности N – антигенов.

Серологические типы и подтипы: По антигенной структуре вирус гриппа типа А подразделяется на подтипы (субтипы, серотипы), а они, в свою очередь, на множество вариантов (сероваров).

В современной номенклатуре вирусов гриппа человека, предложенной ВОЗ в 1980 г., принято описывать серотип, происхождение, штамм, год выделения и подтипы поверхностных антигенов вируса гриппа - нейраминидазы (N) и гемагглютинина (Н). Например: вирус гриппа А/ Москва/10/99/НЗN2.

Источники и механизм заражения: Источником инфекции является больной человек или носитель. Передача возбудителя происходит воздушно-капельным путем.

Среди острых респираторных вирусных инфекций грипп является наиболее массовой и тяжелой. Возникновение пандемий и крупных эпидемий связано с антигенным шифтом и появлением нового подтипа, к которому у населения нет иммунитета. Эпидемические вспышки возникают в результате антигенного дрейфа вируса.

Вирус гриппа проникает в организм через верхние дыхательные пути, а также через конъюнктиву глаз. Размножается в эпителиальных клетках, попадает в кровь, вызывая вирусемию. Вирусы не содержат и не продуцируют токсины, но сами вирионы, их компоненты и, главным образом, продукты аутолиза клеток создают интоксикацию.

Инкубационный период при гриппе типа А от нескольких часов до 2 дней, при гриппе типа В - до 3 дней. Начало болезни острое. Клинические проявления: интоксикация, катаральные явления в виде ринита; ларингита, трахеита, фарингита. Нарушение факторов антиинфекционной защиты организма способствует возникновению бактериальных осложнений, вызванных условно-патогенной микрофлорой дыхательных путей.

Лабораторная диагностика и материалы для исследования: В эпителиальных клетках, в мазках-отпечатках со слизистой оболочки носа обнаруживают вирус с помощью РИФ со специфической антисывороткой и антиген вируса с помощью ИФА. В последнее время применяется метод молекулярной гибридизации РНК.

Для выделения вируса смывом из носоглотки больного заражают куриные эмбрионы в хорион-аллантоисную полость или же культуры клеток. Наличие вируса и его тип определяют по РСК, подтип гемагглютинина - с помощью РТГА.

Для серодиагностики необходимо исследовать парные сыворотки от больного, взятые в начале болезни и через 1-2 недели. Ставится РТГА с гриппозными диагностикумами. Диагностическим считается нарастание титра в 4 раза.

Препараты для профилактики и лечения: Для вакцинопрофилактики используют несколько вакцин:

Инактивированные цельновирионые вакцины содержат вирусы, выращенные в куриных эмбрионах (тип А-Н1N1, H3N2, тип В). Вакцины вводят внутрикожно с помощью безыгольного инъектора, применяют для проведения массовой вакцинации.

Вакцина из расщепленных вирионов (АГХ - адсорбированная гриппозная химическая) вводится подкожно, используется для имму-низации лиц, которым противопоказана вакцинация целыми вирионами и живыми вакцинами.

Живая аллантоисная (яичная) вакцина вводится интраназально, двукратно, с интервалом 20-30 дней, применяется для вакцинации небольшого числа людей.

Живая тканевая вакцина применяется перорально, используется для вакцинации детей, так как не вызвает побочных реакций.

Субъединичная вакцина "грипповак" содержит гликопротеиды (гемагглютинины) вирусов гриппа H3N2, H1N1 и В.

Состав вакцин меняется год от года, в соответствии с типами и подтипами вирусов, вызывающих эпидемические вспышки.

Для экстренной профилактики в период эпидемии применяют ремантадин по 100 мг в день, а также индукторы эндогенного интерферона.

Для этиотропного лечения назначают ремантадин, интерферон, в тяжелых случаях - противогриппозный иммуноглобулин. Антибиотики применяют только при наличии бактериальных осложнений

80. Возбудитель вирусного гепатита В: таксономическое положение, структура, антигены, источник инфекции и механизм заражения, материал для исследования и методы лабораторной диагностики, меры профилактики, вакцины.

Таксономия. Семейство – Hepadnoviridae Род – Orthohepadnovirus Вид – HBV (Hepatitis B virus)

Геном. Геном вируса гепатита В представлен двухнитевой кольцевой молекулой ДНК, причем одна нить – «плюс-цепь» на 30% короче другой – «минус-цепи». Тип симметрии нуклеокапсида –кубический.

Морфология. Форма вируса – сферическая, диаметр вириона – 42-45 нм, организация –сложная. В состав сердцевины (нуклеокапсида) помимо ДНК вируса и капсидных белков входит ДНК-полимераза. Снаружи вирус покрыт липопротеиновой оболочкой – суперкапсидом.

Антигенная структура. У вируса гепатита В выделяют четыре антигена:

1. HBs-Ag – поверхностный, белок внешней оболочки

2. HBcor-Ag – сердцевинный, белковой природы, находится, только в ядрах или цитоплазме

3. HBe-Ag– представляет собой секретируемую растворимую часть HBcor-Ag(показатель активной инфекции).

4. HBx-Ag – белковый сердцевинный антиген, малоизучен

Культивирование. Плохо культивируется в лабораторных условиях. Выращивают в:

-Культуре клеток, полученных из ткани первичного рака печени

-Восприимчивых животных (шимпанзе, гориллы, орангутанги);

-В куриных эмбрионах не культивтруется.

Резистентность. Вирус гепатита В устойчив к низким и высоким температурам, химическим и физическим воздействиям.

Эпидемиология. Источник инфекции – больные люди острым и хроническим гепатитом В, носители

Механизм передачи инфекции: -Парентеральный (пути – трансфузионный, артифициальный – через медицинские инструменты, половой, контактно-бытовой – через предметы личной гигиены – зубные щетки, расчески, ножницы).

- Вертикальный (путь – трансплацентарный).

Иммунитет. У переболевших вырабатывается постинфекционный иммунитет – в основном клеточный, слабонапряженный, непродолжительный.

Микробиологическая диагностика. Используют серологический метод и ПЦР. Методом ИФА определяют в крови маркёры гепатита В: HBs-антиген и анти-HBs-антитела; IgM-HBc-антитела и анти-HBc-антитела; HBe-антиген и анти-HBe-антитела. С помощью ПЦР выявляют вирусную ДНК в крови и биоптатах печени.

Специфическая профилактика. -Пассивная с целью экстренной профилактики – введении донорского HВ-иммуноглобулина

-Активная для плановой профилактики – отечественная рекомбинантная дрожжевая вакцина

Вакцинация – проводят новорожденным в первые 12 часов жизни, в 1 месяц и 6 месяцев.

Спецефическое лечение – не разработано. Этиотропная терапия на современном этапе заключается в применении рекомбинантных интерферонов.

81. Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ): таксономическое положение, структура, антигены, источники инфекции и механизмы заражения, стадии болезни, материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, меры профилактики, лечебные препараты.

Таксономическое положение: Вирус иммунодефицита человека относится к порядку Ortervirales, семейству Retroviridae подсемейству Orthoretrovirinae, роду Lentivirus. Вирусы иммунодефицита человека 1 и 2 имеют название (Human immunodeficiency virus 1, HIV-1 и Human immunodeficiency virus 2, HIV-2).

Структура: РНК-содержащий вирус. Вирусная частица сферической формы Оболочка состоит из двойного слоя липидов, пронизанного гликопротеинами. Липидная оболочка происходит из плазматической мембраны клетки хозяина, в которой репродуцируется вирус. Гликопротеиновая молекула состоит из 2 субъединиц, находящихся на поверхности вириона и пронизывающих его липидную оболочку.

Сердцевина вируса конусовидной формы, состоит из капсидных белков, ряда матриксных белков и белков протеазы. Геном образует две нити РНК, для осуществления процесса репродукции ВИЧ имеет обратную транскриптазу, или ревертазу.

Геном вируса состоит из 3 основных структурных генов и 7 регуляторных и функциональных генов. Функциональные гены выполняют регуляторные функции и обеспечивают осуществление процессов репродукции и участие вируса в инфекционном процессе. Вирус поражает в основном Т- и В-лимфоциты, некоторые клетки моноцитарного ряда (макрофаги, лейкоциты), клетки нервной системы.

Антигены: Антигенными свойствами обладают поверхностные гликопротеины (gp160, gp120, gp41), внутренние белки (р24, р18 и др.) и нуклеопротеиды р7, р9.

В настоящее время выделяют две антигенные разновидности вируса: ВИЧ-1, ВИЧ-2. К основным антигенам у инфицированных людей образуются антитела. Вначале появляются АТ к gp120, gp41, затем к р24, которые длительно сохраняются в крови.

Интенсивная антигенная изменчивость ВИЧ дает возможность вирусу «скрыться» от специфических антител и факторов клеточного иммунитета, что приводит к хронизации инфекции. С другой стороны, повышенная антигенная изменчивость затрудняет создание вакцины для профилактики ВИЧ-инфекции.

Источники инфекции и механизмы заражения: Источником инфекции являются больной и вирусоноситель. ВИЧ выделяется со всеми биологическими жидкостями. В достаточной для заражения концентрации вирус содержится в сыворотке крови и в сперме.

Механизм передачи – парентеральный, через кровь и другие биологические жидкости.

Стадии болезни: Инкубационный период длится в среднем 1-3 мес, однако может быть 3-10 лет. В этот период скрытого вирусоносительства могут увеличиваться лимфоузлы и появляться антитела. Первичная реакция организма на внедрение ВИЧ обычно сопровождается выработкой антител. Однако от момента заражения до выработки антител обычно проходит в среднем от трех недель до трех месяцев, у 15-25% инфицированных появление антител к ВИЧ в организме совпадает с клиническими проявлениями. Выделяют несколько стадий болезни, переходящих одна в другую.

I. Острая инфекция. Чаще всего встречается между 6-12 неделей после инфицирования, но может появиться через 1 неделю, 8-12 месяцев и позже. Наблюдается мононуклеозоподобный синдром (лихорадка, моноцитоз). Эта стадия может протекать в субклинической форме.

II. Асимптомная инфекция (вирусоносительство). Характеризуется отсутствием каких-либо симптомов. Отнесение лиц к этой группе осуществляется на основании данных эпидемиологического анамнеза и лабораторных исследований. Доказательством служит наличие противовирусных антител.

III. Персистирующая генерализованная лимфаденопатия.

Характеризуется наличием выраженной лимфоаденопатии в течение трех и более месяцев у лиц с эпидемиологическими и лабораторными данными.

IV. СПИД-ассоциированный симптомокомплекс (пре-СПИД). Эта стадия характеризуется следующими признаками: потерей массы тела до 10% и более; необъяснимой лихорадкой на протяжении 3-х месяцев и более; диареей, длящейся более 1 месяца; синдромом

хронической усталости; грибковыми, вирусными, бактериальными поражениями кожи и слизистых; повторным или диссеминированным опоясывающим лишаем, саркомой Капоши; повторными или стойкими вирусными, бактериальными, грибковыми, протозойными поражениями внутренних органов.

V. СПИД. Нарастают оппортунистические инфекции и опухоли в результате развития глубокого иммунодефицита, истощения, что приводит к смерти через 5-10 лет. В ряде случаев заболевание развивается более быстро и уже через 2-3 года переходит в терминальную стадию.

Материалы для исследования и методы лабораторной диагностики: исследуют сыворотку больного на наличие АТ к антигенам вируса ВИЧ. У 90% больных антитела появляются в течение первых 3 месяцев после заражения, у 5-9% – через 6 месяцев, а у 1% – позже. Это исследование проводят в 2 этапа: на первом из них определяют АТ к вирусным белкам при помощи иммуноферментного анализа (ИФА). На втором этапе положительные сыворотки исследуют методом иммуноблотинга, в котором выявляют антитела против индивидуальных антигенов вируса. При выявлении антител не менее чем к трем антигенам (gp120, gp41, р24) человека считают ВИЧ-инфицированным.

Методом ПЦР определяют РНК вируса в плазме крови, что используется для контроля за лечением.

Меры профилактики: 1. Выявление ВИЧ-инфицированных лиц среди угрожаемых контингентов (лица, контактные с инфицированными, проститутки, наркоманы).

2. Предупреждение инфицирования медицинского инструментария, лекарств, препаратов крови.

3. Пропаганда знаний по предупреждению заражения ВИЧ при половых контактах (исключение случайных связей, применение средств индивидуальной защиты).

4. Предупреждение заражения медработников при контакте с больными и их биологическими жидкостями (кровь, секреты, экссудаты, моча и т.д.).

Лечебные препараты: применение ингибиторов обратной транскриптазы, действующих в активированных клетках. Препараты являются производные тимидина — азидотимидин и фосфазид.