клеток плода ограниченно применяется в связи с чрезвычайной дороговизной метода.

Инвазивная пренатальная диагностика

Суть современной инвазивной ПД состоит в том, что если существует маркер, на основании которого можно поставить диагноз в постнатальном периоде, то, используя тот же маркер, можно определить врожденную или наследственную патологию у плода.

Условия проведения инвазивной ПД:

Вероятность рождения ребенка с тяжелым наследственным заболеванием, лечение которого невозможно или малоэффективно.

Риск рождения больного ребенка выше риска осложнений от процедур взятия материала.

Наличие точного диагностического теста и оснащенной лаборатории для проведения диагностики.

Информированное согласие супружеской пары.

Показания к проведению инвазивных процедур:

Возраст матери старше 35 лет.

Структурные перестройки хромосом у одного из родителей.

Рождение предыдущего ребенка с МВПР, хромосомными заболеваниями.

Моногенные заболевания в семье.

Положительный пренатальный скрининг.

ОАА у беременной (2 и более выкидыша в раннем сроке,

регрессирующие беременности, мертворождения и пр.).

Методы взятия плодного материала

Биопсия ворсин хориона

Срок взятия: 8-11 недель.

Метод: трансабдоминальная аспирация хориона с помощью иглы под контролем УЗИ.

Диапазон диагностических возможностей: цитогенетическая,

биохимическая и молекулярно-генетическая диагностика наследственных

болезней.

Недостаток: высока вероятность «загрязнения» плодного материала материнским.

Осложнения: угроза прерывания, кровотечение, инфицирование.

Риск осложнений 1-1,5%

Амниоцентез

Срок взятия: 16-18 недель

Метод: трансабдоминальное извлечение амниотической жидкости под контролем УЗИ.

Диапазон диагностических возможностей: цитогенетическая,

биохимическая и молекулярно-генетическая диагностика наследственных

болезней.

Недостаток: малое количество клеток в образце требует их культивирования.

Возможные осложнения: травма плода, плаценты, крупных сосудов;

инфицирование полости матки; кровотечение; выкидыши.

Риск осложнений: 1-1,5%

Кордоцентез

Срок взятия: 22-24 недели.

Метод: трансабдоминальный амниоцентез, пункция пуповины, взятие крови.

Диапазон диагностических возможностей: цитогенетическая,

биохимическая и молекулярно-генетическая диагностика наследственных

болезней.

Возможные осложнения: травма плода, плаценты, крупных сосудов;

инфицирование полости матки; кровотечение; выкидыши.

Риск осложнений: 1,5-2%

Когда в результате ПД выявляется патология плода, не поддающаяся внутриутробной и постнатальной терапии, беременность может быть прервана с обязательной последующей верификацией данных ПД

(лабораторное и патологоанатомическое исследование плода).

Преимплантационная диагностика

В ряде случаев в семьях, отягощенных по наследственной патологии, есть шанс иметь здоровых детей, не прибегая к аборту, когда заведомо известно,

что имплантироваться и вынашиваться будет здоровый эмбрион. Это возможно благодаря внедрению технологии преимплантационной диагностики в цикле экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). На стадии

6-8 бластомеров забирают до 3 клеток. Зародыш сохраняют в условиях глубокой заморозки на время проведения исследования. С целью диагностики хромосомной патологии используют молекулярно-цитогенетические методы,

генной патологии – молекулярно-генетические. В полость матки подсаживают только здоровые эмбрионы, что способствует снижению риска невынашивания и многоплодия, увеличению шанса на удачную имплантацию.

10.7. Молекулярно-генетические методы диагностики

Молекулярно-генетические методы диагностики (ДНК-диагностика,

генодиагностика) – метод исследования структуры гена.

Показания для проведения ДНК-диагностики:

Подтверждение диагноза.

Диагностика носительства.

Пресимптоматическая диагностика (для заболеваний с поздним дебютом).

Пренатальная диагностика.

Преимплантационная диагностика.

Материалом для исследования могут служить любые ядросодержащие клетки. Геномную ДНК выделяют с помощью фенол-хлороформного метода, с использованием ион-обменных смол.

Методы ДНК-диагностики можно подразделить на прямые и косвенные.

Прямая ДНК-диагностика – метод выявления известной мутации,

являющейся причиной заболевания. Косвенная ДНК-диагностика –

определение хромосомы, несущей поврежденный ген, при семейном анализе.

Прямая ДНК-диагностика

Условием проведения прямой ДНК-диагностики является точное знание структуры и расположения гена.

Методически подходы к прямой ДНК-диагностике сводятся либо к поиску

известных мутаций (ПЦР и ее модификации, блот-гибридизация), или к выявлению неизвестных мутаций (мутационный скрининг гена,

секвенирование гена, параллельный молекулярно-генетический анализ).

Большинство вышеуказанных методик используют единый метод анализа структуры фрагментов ДНК, осуществляющийся с помощью различных способов электрофореза ДНК в агарозном или полиакриламидном геле.

Отрицательно заряженные фрагменты ДНК способны перемещаться в электрическом поле, создаваемом в геле. При этом скорость продвижения молекул определяется их величиной: чем меньше фрагменты ДНК, тем быстрее они продвигаются в геле и наоборот. После проведения электрофореза результат идентифицируется путем сравнения скорости прохождения мутантных и нормальных аллелей, которые отличаются по длине.

Косвенная ДНК-диагностика

Косвенную ДНК-диагностику возможно проводить, когда структура гена