2.Люминсицентный анализ

Первое описание люминесценции как специфического свечения раствора оставил в 16 веке (1578 г.) испанский врач и ботаник Николас Монардес. В 1852 г. Стокс, изучив явление флуоресценции, предложил использовать ее как метод химического анализа. В 1867 г Гоппельшредер применил этот метод и ввел термин «люминесцентный анализ»

Люминесцентный анализ – метод исследования различных объектов с помощью (флюоресценции).

Люминесцентный анализ может быть выполнен либо путем визуального наблюдения, или проведен с помощью с помощью специальных приборов.

Принцип люминесцентного анализа основан на способности веществ люминесцировать под действием коротковолновых лучей, в частности под действием ультрафиолетового света но, при условии, что весь видимый свет, примешивающийся к ультрафиолетовому, будет удален при помощи подходящих фильтров.

Применяя для возбуждения свечения ультрафиолетовые лучи, можно получить свечение, обусловленное различными лучами видимого спектра: фиолетовыми, синими, голубыми, зелеными и т. д. При этом, если освещать объект синим светом, он будет испускать лучи красного, оранжевого, желтого и зеленого цвета.

При люминесцентном анализе изучают и измеряют как собственную, первичную, так и вторичную флюоресценцию

1.Первичная люминесценция или собственная флуоресценция –люминесцентное свечение вещества, возникающее под влиянием облучения без предварительной обработки препаратов.

Первичной люминесценцией обладают некоторые вещества, входящие в состав клеток и тканей: витамины А, В6, Е; гормоны; липопигменты; биологически активные вещества. Собственная люминесценция простых белков обусловлена наличием в них аминокислот триптофана и тирозина. В сложных белках люминисценцией обладают некоторые ко-ферменты, например флавицины, восстановленные пиридиннуклеотиды и др.

Так, витамин B, β-каротин, гормоны- эстрагены. Адреналин, при облучении ультрафиолетовым светом, дают желто-зеленую люминесценцию, витамин А – сине-белую, липопигменты (липофусцин) – красную л, а цероид— голубоватую люминесценцию. Серотонин и норадреналин при обработке препаратов парами концентрированной серной к-ты имеют желтую люминесценцию. Витамин B6 в щелочном р-ре переходит в трихром и дает синюю люминесценцию.

Вторичная люминесценция - люминесценция возникающая только после обработки веществ соответствующими люминесцентными красителями или флуорохромами. (Эти вещества еще называются люминисцентными зондами). С помощью зондов изучают взаимное расположение молекулярных компонентов и конформационные перестройки биол. мембран и белков, фазовые переходы клеток и веществ

Такие флюорохромы, как кофеин и родамин, могут быть использованы для определения гликогена. Фосфин, р-р 3,4-бензпирена в насыщенном р-ре кофеина применяют для определения липидов (липиды имеют голубовато-белую люминесценцию). С помощью р-ра морина в спирте, определяют кальций (зеленая люминесценция). При обработке препаратов р-ром солохрома черного удается выявить алюминий (желто-оранжевая люминесценция). Флюорохром акридиновый оранжевый; а также флюорохромы бромистый этидий (этидиум бромид) и йодистый пропидий (припидиум йодид), применяют для цитофлюориметрии ДНК.

Особенно активно в биологии и товароведении используется такой флюорохром, как акридиновый оранжевый. Комплексы, образованные этим флюорохромом с двуспиральной ДНК, обладают зеленой люминесценцией, а комплексы с РНК и односпиральной ДНК – красной люминесценцией.