Фазовоконтрастна мікроскопія

Звичайно пофарбовані препарати поглинають частина світла, яке проходить через них. Із-за цього амплітуда світлових хвиль знижується, і частинки препарату виглядають темніш за тло.

При прохожденні світла через нефарбований препарат, амплітуда світлових хвиль не змінюється. Відбувається лише зміна фази світлових хвиль, які пройшли через препарат. Людське око не здатне вловити ці зміни фази світла, тому нефарбований препарат буде невидимий навіть при правильній установці світла в мікроскопі.

Пристосування для фазовоконтрастної мікроскопії містить у собі конденсор з набором кільцевих діафрагм, що забезпечують освітлення препарату повним конусом світла, й фазовокнтрастні обьективи. Останні відрізняються від звичайних тим, що в їхньому головному фокусі розташовується напівпрозора фазова пластинка у вигляді кільця, яка викликає зрушення фази світла, що проходить через неї.

Світло, що пройшло через об'єкт дослідження, отримує деяку зміну фази й, крім того, розділяється на два промені – недифрагований й дифрагирований. Недифрагировані промені, які вподальшому проходять через кільцеподібну фазову пластинку в обьективі, отримують додаткове зрушення фази. Дифраговані промені проходять повз фазову пластинку, й їхня фаза не змінюється. У площині польової діафрагми окуляра відбувається інтерференція (накладання) дифрагованих й недифрагованих променів, а так як ці промені йдуть у різних фазах, відбувається їх взаємне часткове гасіння й зменшення амплітуди. Завдяки цьому об'єкт дослідження буде виглядати темним на світлому тлі.

Фазовоконтрастна мікроскопія допомагає виявить деталі структури живих об’єктів та бактерій, стадії їхнього розвитку, зміни в них під дією різних агентів (антибіотики, хімічні речовини й т.д.).

Аноптральная мікроскопія (амплитудноконтрастная,мфазовотемнопольная)

Аноптральная мікроскопія – різновид фазовоконтрастної мікроскопії, при якій застосовують обьективи зі специальними пластинками, нанесеними на одну з лінз у вигляді затемненого кільця.

Принцип аноптральної мікроскопії той же, що й фазовоконтрастної.

Широкий центральний отвір у шарі чи кіптяві міді, нанесених на лінзу об'єктива, є як би люком, що випускає з об'єктива головну масу дифрагованого світла, а широкий темний шар кільця, що покриває частину поверхні лінзи, відіграє роль пастки для небажаного периферичного дифрагованого світла. За рахунок цього в значній мірі усувається ореол навколо досліджуваного об'єкта. Тло поля зору набуває брунатно-сірого кольору, а самі об'єкти мають різні відтінки від ясно-брунатного до білого.

Цей метод має більшу дозволяючи здатність, при прижиттєвому ( вітальному) дослідженні об'єктів ( мікроорганізмів, клітин).

Інтерференційна мікроскопія

Інтерференційна мікроскопія вирішує ті ж задачі, що і фазовоконтрастна, але якщо остання дозволяє спостерігати лише контури об'єктів дослідження, то за допомогою інтерференційної мікроскопії можна вивчати деталі прозорого об'єкта і проводити їх кількісний аналіз. Це досягається завдяки роздвоєнню променя світла в мікроскопі: один із утворених променів проходить через частку об'єкта, а інший повз неї. В окулярі мікроскопа обидва промені з'єднуються і інтерферують між собою.

Різницю фаз, що виникають можна вимірити й таким чином визначити масу різних клітинних структур. Послідовний вимір різниці фаз світла й відомих показників зломлення дає можливість визначати товщину об'єктів, концентрацію в них води і сухої речовини і т.д.

На підставі даних інтерференційної мікроскопії можна побічно судити про проникність мембран, активність ферментів, клітинний метаболізм, біохімічні і фізико – хімічні зміни об'єктів дослідження.