5. Методы типирования антигенов НLA-­системы

6. Основы трансплантационного иммунитета. Роль клеточных и гуморальных механизмов в отторжении трансплантанта. Подбор донора и реципиента по антигенам гистосовместимости.

Подбор донора и реципиента по антигенам гистосовместимости Подбор донора. Подобрать донора, полностью совместимого с реципиентом по антигенам HLA, очень сложно, поскольку число комбинаций, составленных более чем из 100 антигенов этого семейства, чрезвычайно велико. Оценка совместимости донора и реципиента по антигенам HLA. Для оценки совместимости реципиента с предполагаемым донором определяют антигены HLA реципиента, исключают сенсибилизацию реципиента антигенами HLA, проводят пробу на индивидуальную совместимость. Помимо этого подбирают донора, совпадающего с реципиентом по антигенам системы AB0. Это особенно важно при трансплантации почки. Серологические методы Основной серологический метод типирования антигенов HLA — лимфоцитотоксический тест. Метод заключается в следующем: 1) к сывороткам против разных антигенов HLA добавляют по 2000 исследуемых лимфоцитов; 2) после инкубации добавляют комплемент (его источником может служить кроличья сыворотка); 3) лимфоциты, несущие антиген, против которого направлена сыворотка, под действием комплемента разрушаются; 4) затем к лимфоцитам добавляют краситель, который окрашивает только живые клетки. Результат оценивают по относительному числу погибших лимфоцитов. Резко положительный результат свидетельствует о том, что лимфоциты несут исследуемый антиген. Молекулярно-генетические методы. Эти методы основаны на исследовании ДНК. Генетическое типирование стало возможным после расшифровки нуклеотидной последовательности генов HLA и выявления различий между разными аллелями этих генов. ПЦР — метод, предназначенный для получения большого количества копий фрагментов ДНК с определенной нуклеотидной последовательностью. Основное достоинство метода — высокая чувствительность, он позволяет создать множество копий фрагмента ДНК при минимальном исходном ее количестве. Для проведения ПЦР необходимо синтезировать два олигонуклеотида, комплементарных 5'-концевым участкам цепей исследуемого фрагмента ДНК. Реакция включает следующие стадии: 1) денатурация ДНК с получением двух однонитевых фрагментов; 2) гибридизация олигонуклеотидов с 5'-концевыми участками этих фрагментов; 3) синтез комплементарной последовательности нуклеотидов. Полученные копии исследуют с помощью набора олигонуклеотидных зондов. Гибридизация зонда, который кодирует последовательность известного аллеля гена HLA, с исследуемым фрагментом ДНК свидетельствует о том, что в геноме исследуемого содержится данный аллель. Если гибридизации не происходит, данный аллель отсутствует. Отсутствие гибридизации со всеми олигонуклеотидными зондами не служит доказательством открытия нового аллеля, поскольку может быть обусловлен неполнотой использованного набора зондов. Разрабатывается молекулярно-генетическое типирование генов HLA класса I

5. Реакция «трансплантат против хозяина», меры профилактики. Условия, определяющие успешную трансплантацию в клинике.

В 1944 году Медовар установил, что повторная пересадка транс­плантата кожи от того же донора приводит к ускоренному его отторжению. На атом основании было сделано предположение, что в основе процесса отторжения лежат иммунологические механизмы, которые связаны с несовместимостью АГ донора и реципиента. Отторжение трансплантата тканей происходит в результате того, что иммунная система реципиента | распознает чужеродные тканевые АГ гистосовместимости на клетках | трансплантата и реагирует на них. Поэтому существует так называемый трансплантационный барьер, который обусловлен генетическим различием между донором и реципиентом. В трансплантологии различают 4 вида трансплантата:

1. аутотрансплантанты - это собственные ткани донора перенесен­ные из одного участка организма в другой. Не будучи чужеродным он не отторгается.

2 изотрансплантаты - это трансплантаты генетически идентичных индивид умов (однояйцовые близнецы, инбредные линии животных (родст­венные браки)).

3. аллотрансплонтаты - наиболее часто используются в медицин- ской практике, это орган или ткань пересаживаемая генетически отличному от донора реципиенту, относящиеся к одному виду. Трансплоктаты распознаются как чужеродные.

4. ксенотрансплонтаты - это пересадки между органами различных видов. Трансплантат отторгается, но если его обработать иммунодепрессантами, то такие реакции используются а пересадка сосудов, сердеч- ных клапанов и др.

66Трансплантационная иммунология. Роль клеточных и гуморальных механизмов в отторжении трансплантата.

При отторж-ии трансплантата набл гумор-ый и кл-ый иммун ответ. Трансплантаты м-т отторг-ся в 1-ые сутки в сверхостром отторжении (за мин и час) роль игр р-ции немедл гиперчувств. Предсуществующие АТ к АГ трансплантата провоцируют цитотоксич и иммунокомплексную р-цию против АГ. Это ведёт к васкулиту и ишемическому некрозу трансплантата. При остр отторжении предсуществующих АТ нет, но ИГ появл-ся после сенсибил-ии и направлены против паренхиматозных клеток трансплантата, обусловливая их некроз. Начавшись, процесс заканч-ся за неск-ко дней. Если отторжение происх-ит в сроки от неск недель до неск мес - то важн роль при таком подостром и хрон отторжении играют р-ции клет иммунитета. Решающее д-ие оказ Т-лимфоциты. Они сенсибилиз-ся в месте приживления трансплантата при участии АПК самого донора; оттуда по лимфат-им и кровеносн путям- в лимфоузлы, где из них обр клон эффекторн клеток, они проникают в кровоток, направл-ся к трансплантату и оказ поврежд. действие. При отторжении активны CD4 клетки. В хрон отторжении трансплантата роль играют ИГ. В р-ции отторжения прин участие специфич АТ к АГ транспл-та. Эти АТ обл-ют цитотокс активн-ю и вызыв антителозависимую клеточ цитотокс-ть (АЗКЦ). После пяти-шестидневного латентн периода вокруг трансплантата возн воспалит-ые процессы, кот и выз-ют его отторжение на 7-12 день после первичн пересадки (отторж по первичн типу). Если реципиенту повторно пересадить трансплантат -отторжение быстрее - по вторичн. типу. При первичн отторж разл 3 фазы гистол-их изм-ий: 1) приживл трансплантата к 5 дню. 2) начиная с 8-го дня, достиг-ся полная васкуляризация трансплантата. 3) с 11 дня восп-ие усиливается: увел-ся клеточная инфильтрация и разрастание мелких сосудов, усиливается некроз.

При отторж по первичн типу уч-ют в осн-ом мононуклеары и немного полиморфнояд-ых гранулоцитов, по вторичн типу - мононуклеары, и полиморфнояд-ые гранулоциты

Условия, определяющие успешную трансплантацию в клинике. Материальным субстратом несовместимости считают внутривидовые различия тканевых или гистолейкоцитарных антигенов (антигенов системы НLА). Таким образом, важнейшим в определении судьбы трансплантата фактором является подбор совместимой по НLА пары донор — реципиент. При пересадке трупного материала подбор совместимого по антигену НLА-А и В донора улучшает выживаемость трансплантата на 10—15 %. При этом большее значение имеет совместимость по НLА-В локусу, чем по НLА-А локусу. Подбор по НLА-С локусу несуществен для трансплантации. Показано, что НLА-011-совместимость увеличивает одногодичную выживаемость трансплантата на 15—20 % по сравнению с несовместимостью по двум ОЯ-антигенам. Наилучший эффект трансплантации наблюдается при отсутствии несовместимости по НLА-А, -В, -ОЯ или только по НLА-В и -ЭЯ. Иммунологическое обеспечение реципиента и донора подразумевает выполнение обязательных иммунологических исследований. 1. Тканевое типирование при аллогенной трансплантации как донора, так и реципиента, включающее серологическое типирование и постановку смешанной культуры лимфоцитов (для определения антигенов II класса).

2. Исследование иммунного статуса проводят как у донора, так и у реципиента. Обязательным для донора является контроль на носительство вируса СПИД или антител к нему, выявление антител к цитомегаловирусу и вирусу Эпстайна—Барра.