5. Нейро-эндокринная регуляция иммунного ответа.

Гипоталламо-гипофизарно-надпочечниковая система в регуляции иммунного ответа.

Стресс---черезмер активац гипот-гипоф сист, прив к повыш выдел АКТГ---возрастание продукции кортикостероидов ---повыш выдел кортикотропин-релизинг-фактора(CRH), воздействующего на рецепторы иммунокомпетентных клеток и стимулирующего продукцию нейропептидов---активация симпатической НС, вызыв повышение продукции катехоламинов в периферических лимфоидных органах. При длит возд –инволюция лимф орг, лимфопения

гормоны тимуса.

Функция тимуса регулирующее влияние на иммуногенез. Они влияют на процессы деференцир лимфоцитов как внутри так и на расстоянии регулирую окончательное созревание Т лимфоцитов. Гормоны тимопоэтин 1-2- деференцировка предшественников Т лимфоцитов в коре тимуса, 2 тимозин деференцировка т лимфоцитов, 3 -эпител клетки тимуса секретир интерлейкины и колониестимул факторы. Тимус специализирован исключительно на развитии Т-лимфоцитов. Морфологические особ-ти строения этого органа таковы, что в различных зонах сущ-ют разные условия микроокружения лимфоцитов. В результате эти клетки получают неодинаковые стимулы дифференцировки, что способствует: 1)созреванию Т лимфоцитов, появлен в них антеген распознающ рецепторов,2формир субпопуляций Т лимфоцитов 3 формир клонов Т лимфоцитов и отбор клонов способных расознать чужеродные пептиды

5. Оценка иммунного статуса человека. Нормальные показатели основных количественных и функциональных лабораторных тестов.

6. Принципы и основные этапы количественной оценки Т-лимфоцитов методом Е-розеткообразования.

Лабораторная оценка Т системы.

Метод розеткообразования (опр Т-лимфоцитов) осн на том, что на пов-ти Т-лимфоц содерж рецепторы к бараньим эритроцитам (белокСD2) Инкубируют взвесь лимфоцитов с бараньими эритроцитами, получ «розетки»-в центре Т-лимфоц, по периферии-бараньи эритроц. Е-РОК(Е-эритр, РОК-розеткообраз кл) моноклональные антитела к дифференцировоч антигенам (CD) в ИФ тесте. Для опр общег кол-ва Т-лимф прим Мон АТ к CD2,3, хелперной субпопуляции-CD4, киллерно-супрессорной-CD РБТЛ реакции бластной трансформации лимфоцитов основана на св-ве лимфоцитов в результате контакта с митогенами и Аг превращаться в лимфобласты – кл, готов – ся к делению и активно синтез-е ДНК. В кач-ве стимулятора в основном используют фитогемагглютинин ФГА. Результат оценивают 2-мя способами: 1) подсчет кол-ва кл, подвергшихся бласттрансформации, под микроскопом ( неточн.) 2) радиометрическое измерение:добав в культуру лимфоц меченый изотопом Н3 тимидин, необх для синтеза ДНК, измер кол-во включ изотопа. РТМЛ р-я торможения миграции лейкоцитов Смесь лейкоцитов, полученных из плазмы крови без примеси эритроцитов, смешивают в равных объемах со средой 199 и с ФГА-индуцированный вариант. Конц ФГА сост 10 мкг в 1 мл

5. Принцип и основные этапы количественной оценки в-лимфоцитов методом м- розеткообразования.

Определение количества В-лимфоцитов

Методы определения количества В-лимфоцитов основаны на наличии на поверхности этих клеток специфических рецепторов к иммуноглобулинам и комплементу (С3). Наиболее простым способом количественной оценки В-лимфоцитов является модифицированный метод розеткообразования с эритроцитами барана (Е), нагруженными антителами (А) — иммуноглобулинами класса IgМ, в среде комплемента (С). Это так называемый тест ЕАС-розеткообразования. Для проведения теста, помимо реактивов, используемых для определения Т-лимфоцитов, необходима: 1) антисыворотка, содержащая антитела к эритроцитам барана (IgМ), которую получают путем иммунизации кролика эритроцитами барана, и 2) свежая сыворотка мышей, содержащая комплемент. К эритроцитам барана добавляют антисыворотку иммунизированного кролика, содержащую антитела к эритроцитам (IgМ). При этом подбирается такая концентрация IgМ, которая не приводит к агглютинации эритроцитов и их гемолизу. К образовавшемуся комплексу ЕА (эритроциты-антитела) добавляют мышиную сыворотку, содержащую комплемент (С3), получая таким образом ЕАС-комплекс (эритроциты- антитела-комплемент).

Последующий ход реакции примерно тот же, что и при определении Т-лимфоцитов: выделенную взвесь исследуемых лимфоцитов смешивают с заранее приготовленной ЕАС-системой. Эритроциты барана с фиксированными на них IgМ и комплементом присоединяются к В-лимфоцитам, в результате чего образуются “розетки”. Подсчет количества “розеток” проводят в камере Горяева. При оценке результатов теста следует иметь в виду, что рецепторы к комплементу имеются на некоторых субпопуляциях Т-лимфоцитов, поэтому описанный метод дает лишь приблизительное представление о количестве В-лимфоцитов.

Более точные результаты можно получить при использовании метода иммунофлюоресценции с мембранными иммуноглобулинами. К исследуемым лимфоцитам добавляют антисыворотки против иммуноглобулинов человека, меченные флюорохромом. Лимфоциты, к рецепторам которых присоединяются соответствующие иммуноглобулины (IgM, IgG, IgА), можно легко обнаружить при микроскопии по характерной флюоресценции и провести подсчет как общего числа В-лимфоцитов, так и отдельных их субпопуляций.

В норме в периферической крови содержится 15–35% В-лимфоцитов (в среднем 25,0±1,2%).

Для характеристики состояния клеточного иммунитета важно оценить не только количество В- и Т-лимфоцитов и их субпопуляций, но и функциональное состояние иммунокомпетентных клеток. В клинической практике для этой цели используют в основном два теста: 1) реакцию торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) и 2) реакцию бластной трансформации лимфоцитов (БТЛ).