Робота № 7. Визначення осмотичного тиску клітинного соку плазмолітичним методом (за де-Фрізом).

Мета роботи. Визначення величини осмотичного тиску у рослин різних екологічних груп.

Матеріали, реактиви, обладнання. Мікроскопи, предметні і накривні скельця, леза, бюкси, пінцети, препарувальні голки, піпетки, склограф, фільтрувальний папір, синя цибуля, листки традесканції; 1М розчин сахарози або 1М розчин NaCl, дистильована вода.

Основні відомості. Концентрацію клітинного соку, який являє собою розчин великої кількості різноманітних органічних і неорганічних сполук, можна визначити за його осмотичним потенціалом. Плазмолітичний метод визначення цього показника полягає в тому, що зрізи досліджуваної тканини занурюють в розчини різних концентрацій і проводять дослідження їх під мікроскопом для виявлення ізотонічного розчину. Виходячи з того, що плазмоліз відбувається лише в гіпертонічних розчинах, знаходять таку концентрацію, при якій спостерігається початкова стадія плазмолізу не менше ніж у 50% клітин досліджуваної тканини. Ізотонічний розчин матиме середнє значення між цим розчином і наступним, в якому плазмоліз ще не відбувався.

Хід роботи. Приготувати 7 розчинів NaCl або сахарози різної концентрації (від 0,1 до 0,7 моль/л) з вихідного 1М розчину, по 5 мл, згідно з таблицею:

Концентрація дослідного	На 5 мл розчину
розчину, моль/л	1 М розчину сахарози або NaCl, мл	Води, мл
0,1	0,5	4,5
0,2	1,0	4,0
0,3	1,5	3,5
0,4	2,0	3,0
0,5	2,5	2,5
0,6	3,0	2,0
0,7	3,5	1,5

Розчини наливають у бюкси або баночки з відповідними позначками і добре перемішують; закривають кришками, щоб не було випаровування. За допомогою леза готують 14 зрізів з опуклої сторони лусок синьої цибулі або інших об’єктів. Зрізи покласти у воду на предметному скельці, фільтрувальним папером видалити сік, що витікає з пошкоджених клітин. Потім занурити по два в приготовані розчини, починаючи з найконцентрованішого. Зрізи повинні бути повністю занурені в розчин.

Через 20 – 30 хвилин зрізи витягують з розчинів і розглядають під мікроскопом в порядку занурення.

Результати записують у вигляді таблиці:

Концентрація розчину, моль/л	0,7	0,6	0,5	0,4	0,3	0,2	0,1
Ступінь плазмолізу
Малюнок клітин

Знайти ізотонічну концентрацію, вирахувати величину осмотичного тиску клітинного соку за рівнянням Вант-Гоффа:

P=RTCi.

Де P – осмотичний тиск в мегапаскалях, Мпа; R – універсальна газова стала, 0,0083кДж/(градмоль); T – абсолютна температура, 273+C; C – концентрація, моль/л; i – ізотонічний коефіцієнт.

Зробити висновок про залежність ступеню плазмолізу від концентрації розчину.

Контрольні запитання.

1. Чому розчини електролітів мають більший, порівняно з неелектролітами, осмотичний тиск?

2. Чи можна визначити концентрацію клітинного соку плазмолітичним методом?

3. Чи можна відібрати воду від плазмолізованої клітини?