Робота № 14. Методи виділення пластидних пігментів з листків.

Мета роботи. Навчитися екстрагувати суміш пігментів з зелених листків.

Матеріали, реактиви, обладнання. Листки кімнатних рослин, етиловий спирт, чистий кварцовий пісок, фарфорові ступки, ножиці, лійки, фільтрувальний папір, штатив з пробірками, вазелін.

Основні відомості. Фотосинтез – процес утворення органічних речовин із диоксиду вуглецю і води з використанням енергії світла:

_{пігменти}

6 CO₂+ 6 H₂O  C₆H₁₂O₆ + 6 O₂.

^світло

Щоб детально вивчити хімічні і фізичні властивості пігментів, їх вилучають із зелених тканин рослин і відокремлюють один від одного. Пігменти зелених листків не розчинні у воді, але добре розчиняються в ліпоїдних розчинниках. Їх можна екстрагувати із свіжого і фіксованого матеріалу. Вибираючи розчинники, слід враховувати розчинність самих пігментів. Залежно від хімічного складу, розрізняють полярні (спирти, ацетон) і неполярні (бензин, петролейний ефір, гексан та ін.) розчинники.

Зелені і жовті є ліпофільними сполуками, а тому добре розчиняються у всіх розчинниках: спирті, ацетоні, бензині, ефірі, петролейному ефірі тощо. Найкраще зелені пігменти екстрагуються з листків полярними розчинниками або сумішшю полярних і неполярних розчинників. У навчальних лабораторіях найчастіше пігменти з листків вилучають спиртом або ацетоном. Пігменти доцільно вилучати з листків різних екологічних груп рослин, різних ярусів рослини тощо.

Хід роботи. Для вилучення пігментів листка можна використати такі способи:

1. Свіже листя нарізають ножицями (забирають середню жилку і черешок) і кладуть у ступку. До подрібненої маси додають трохи чистого кварцового піску і 5 мл 95%-го етилового спирту. Суміш старанно розтирають до утворення однорідної маси, поступово доливаючи етиловий спирт (5 мл). Розтирають, доки етиловий спирт не забарвиться в інтенсивний зелений колір. Носик ступки з зовнішнього боку змазують вазеліном і Для екстракції хлорофілу з сухого матеріалу беруть сухі листки, розти-рають їх у фарфоровій ступці в порошок, видаливши всі жилки. До порошку до-ливають міцного етилового спирту, знову розтирають. Розтерту масу відфільтро-вують через складчастий фільтр у суху чисту пробірку.

2. Свіже або сухе листя опустити у киплячу воду на 1-2 хвилини. Після того, як листочки будуть убиті, переносять їх у пробірку з етиловим спиртом. Пробірку ставлять на водяну баню і тримають на нагрітій водяній бані доки спирт не забарвиться в зелений колір, а шматочки листку не знебарвляться. Екстракт пе-реливають у сухий чистий посуд.

1. Свіжонарізане листя кладуть у банку зі спиртом, щільно закривають пробкою і дають настоятися (12-24 години), одержаний екстракт профільтрувати в чисту посудину і закрити.

Контрольні запитання.

1. Які пігменти містяться в хлоропластах зелених рослин?

2. Як вилучити пігменти з листка?

3. В якому стані знаходяться пігменти в розчині і в листку?

4. Чому у багатьох рослин верхній бік листків більш зелений, ніж нижній?

5. На які групи поділяють пігменти зеленого листка?