Тема 2 токсикология нитритов и нитратов

Работа 1. Токсическое действие нитритов

Материальное оснащение: лягушка, восковая пластинка, скаль­пель, ножницы, шприц, раствор натрия нитрита и 0,6%-ный раствор поваренной соли, фильтровальная бумага, пробирки.

Ход опыта. Лягушку фиксируют на восковой или пробковой пластинке, на которой растягивают перепонку задней конечности. В лимфатический мешок вводят 1 мл 10%-ного раствора натрия нит­рита. Через 5-10 мин наблюдают изменения сосудов плавательной перепонки, их количество и диаметр. Затем лягушку наркотизируют, разрушают спинной мозг, вскрывают грудную и брюшную полости, обращают внимание на окраску внутренних органов, сравнивают с окраской у контрольной лягушки. Сделав надрез верхушки сердца, набирают кровь в пробирку и разбавляют 0,6%-ным раствором натрия хлорида приблизительно в 10 раз. Несколько капель крови наносят на фильтровальную бумагу. Сравнивают цвет крови лягушки, которая по­лучила нитрит натрия и контрольной лягушки. Кровь в пробирке подвергают спектроскопическому анализу, сравнивая со спектром нор­мальной крови.

Сделать вывод о характере действия нитритов на кровь и просвет сосудов. Письменно объяснить механизм токсического влияния нитри­тов на организм.

Работа 2. Определение нитритов (качественные пробы)

Материальное оснащение: пробирки, диализат, 1%-ный раствор дифениламина в серной кислоте, реактив Грисса.

Ход опыта В пробирку наливают 1 мл диализата. Сюда же по стенкам осторожно прибавляют 1 мл 1%-ного раствора дифениламина в серной кислоте. На границе соприкосновения двух слоев образуется голубое кольцо. Чувствительность реакции 5 мг/л. В дальнейшем ани­оны дифференцируют следующим образом. К 1 мл диализата добав­ляют чистой пипеткой реактив Грисса. Нитриты дают красное окра­шивание, нитраты оставляют смесь без изменений. При оценке резуль­татов пробы следует принимать во внимание, что реакция на нитриты с реактивом Грисса очень чувствительная, только темно-красное или красное окрашивание может вызвать подозрение на отравление нитри­тами и поставить задачу дальнейшего более основательного исследо­вания присланного объекта на нитриты.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИТРИТОВ И НИТРАТОВ В СВЕКЛЕ

Материальное оснащение: чашка Петри, срез свеклы (картофе­ля), концентрированная серная кислота, дифениламин, пинцет.

Ход опыта. Несколько кристаллов дифениламина наносят на поверхность свежего среза свеклы (или картофеля) и смазывают их несколькими каплями концентрированной серной кислоты. Интенсив­ное синее окрашивание поверхности среза свеклы указывает на боль­шое количество нитритов и нитратов.

Работа 3. Количественное определение нитритов по методу Грисса

Принцип метода. Метод основан на способности раствора альфа-нафтиламина и сульфаниловой кислоты в присутствии нитритов да­вать красное окрашивание.

Материальное оснащение: 10 пробирок, стандартный раствор натрия нитрита дистиллированная вода, исследуемый фильтрат, реак­тив Грисса, пипетки на 1-2 и 5-10 мл.

Подготовка материала. 10,0 г измельченного материала встряхи­вают в течение часа в 50 мл дистилированной воды, затем доливают до 100 мл и фильтруют. Если фильтрат окрашен, то его обесцвечивают взбалтывая, окисью алюминия из расчета 0,1 г на 100 мл. Отстаивают 2 ч. Затем отстоявшуюся жидкость сливают и исследуют. Для отделе­ния белков смесь подвергают диализу общепринятым способом.

Ход опыта. В 10 пробирок из бесцветного стекла наливают пи­петкой стандартный раствор нитрита натрия в количествах, указанных в таблице:

№ пробирок	Количество раствора	Содержание натрия нитрита, мг
1	0,2	0,0015
2	0,4	0,0030
3	0,6	0,0045
4	0,8	0,0060
5	1,0	0,0075
6	1,2	0,0090
7	1,4	0,0105
8	1,6	0,0120
9	1,8	0,0135
10	2,0	0,0150

Объем жидкости в каждой пробирке доводят до 10 мл дистил­лированной водой. Одновремено в опытную пробирку наливают 10 мл исследуемого фильтрата, затем во все 11 пробирок прибавляют по 0,5 мл реактива Грисса. Через 15 мин сравнивают окраску исследуе­мого раствора со стандартной шкалой растворов натрия нитрита и на­ходят количество нитритов в исследуемом фильтрате Вместо 10 пробирок можно брать 5 (меньшее количество разве­дении). Содержание натрия нитрита в исследуемом материале в мг/кг находят по формуле:

где М-содержание нитритов в 10 мл исследуемого фильтрата, мг (находят при колориметрировании по стандартной шкале в опытной пробирке);

А - общее количество фильтрата, мл;

Я - навеска исследуемого материала, г; 1 мл стандартного раст­вора содержит 0,0075 мг нитрита натрия.

Работа 4. Антидотная терапия приотравлении нитритами

Задание. Выписать рецепт, приготовить раствор, содержащий 0,6 г метиленового синего, 5 мл спирта этилового и 60 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида. Свинье на одно внутривен­ное введение. Обосновать применение метиленового синего при отрав­лении животных нитритами.

Ориентировочные разовые токсические дозы нитратов и нитритов для с.-х. животных (внутрь г/кг):

Вид животных	Нитраты	Нитриты
Крупный рогатый скот	30,0-50,0	10,0-15,0
Овцы	60,0-100,0	13,0-20,0
Лошади	60,0-70,0	3,0-5,0
Свиньи	60,0-90,0	4,0-7,0
Птицы	90,0-130,0	13,0-20,0

Задание по фармакотерапии

Выписать в рецептах и объяснить действие препаратов: 1.10 коровам - раствор метиленового синего.

2. Корове - аскорбиновую кислоту для внутривенного введения.

3. Овце - молочную кислоту.

4. Свинье - средство для устранения тканевой аноксии.

5. Быку - средство для восстановления функций желудочно-ки­шечного тракта.

6. Рассчитать потребность в аскорбиновой кислоте для 50 коров при отравлении их нитритами.

Вопросыпрограммированного контроля

I. С какой целью используют соединения азотной и азотистой кислот в сельском хозяйстве.

I. Инсектициды. 2. Фунгициды. 3. Гербициды. 4. Минеральные удобрения. 5. Минеральная подкормка для животных.

II. Указать растения, накапливающие при определенных условиях нитраты.

1. Свекла. 2. Брюква. 3. Кукуруза. 4. Овес. 5. Ячмень. 6. Горох. 7. Люцерна. 8. Клевер. 9. Подсолнечник.

Ш. Какое количество нитритов предельно допустимо в зеленой массе?

1) 0,5%; 2) 1%; 3) 1,5%; 4) 3%.

IV. Указать животных, наиболее чувствительных к нитритам.

1. Крупный рогатый скот. 2. Овцы. 3. Свиньи.

V. Отметить изменения в организме животных, характерные для действия нитритов.

1. Повышение тонуса сосудов. 2. Понижение тонуса сосудов. 3. Тахикардия. 4. Брадикардия. 5. Одышка. 6. Замедление дыхания. 7. Образование карбоксигемоглобина. 8. Образование метгемоглобина.

VI. Отметить, при каком количестве метгемоглобина насту­пает тканевая аноксия

1) 1/4 гемоглобина превращена в метгемоглобин; 2) 1/3 гемо­глобина превращена в метгемоглобин.

VII. Укажите метод количественного определения нитритов.

Метод Грисса. 2. Проба с дифениламином.