Часть I. Общая нозология

надобятся R-логические, ультразвуковые, оф­тальмоскопические и некоторые другие паракли­нические методы исследования. Однако оконча­тельная диагностика и выявление более тонких генетических вариантов исследованной патоло­гии осуществляются с применением специаль­ных лабораторных методов диагностики.

Лабораторные методы диагностики. Ла­бораторная диагностика наследственных болез­ней (фено- или генотипирование индивидов) в основе своей может быть направлена на иденти­фикацию одной из трех «ступеней» болезни. Во-первых, это выявление этиологической причи­ны наследственной патологии, или характерис­тика генотипа, т.е. определение конкретной му­тации у индивида (генной, хромосомной, геном­ной). Эти цели достигаются с помощью цитоге-нетических или молекулярно-генетических ме­тодов. Во-вторых, лабораторные методы позво­ляют регистрировать первичный продукт гена (биохимические, иммунологические методы). В-третьих, возможна регистрация специфичес­ких метаболитов измененного обмена, возник­ших в процессе реализации патологического дей­ствия мутации (биохимические, иммунологичес­кие, цитологические методы регистрации на уровне жидкостей - кровь, моча, секрет или кле­ток).

Патогенетические методы. Они предназна­чены для изучения структуры хромосомного на­бора или отдельных хромосом. Объектом цито-генетических наблюдений могут быть делящие­ся соматические, мейотические и интерфазные клетки. Чаще исследования выполняются на соматических клетках: наиболее удобный объект - культура лимфоцитов периферической крови, но также и культура клеток из кусочков кожи (фибробласты), костного мозга, эмбриональных тканей, хориона, клеток амниотической жидко­сти.

Специальным образом полученные препара­ты из культуры клеток затем окрашиваются. Все методы окраски препаратов можно разделить на три группы: простые, дифференциальные, флю­оресцентные.

Простая окраска (метод окраски по Гимзе или в русскоязычной литературе - «рутинная окрас­ка») используется для ориентировочного опре­деления числовых аномалий кариотипа. Струк­турные хромосомные аномалии (делеции, транс­локации, инверсии), выявленные при простой ок-

раске, должны быть идентифицированы с помо­щью дифференциальной окраски. Под этим ме­тодом понимают способность хромосом к изби-рательному окрашиванию по длине с фиксаци­ей в виде чередования эу- и гетерохроматичес­ких районов (темные и светлые полосы).

Благодаря успехам в молекулярной генетике человека разработан принципиально новый ме­тод изучения хромосом - метод флюоресцентной гибридизации in situ (FISH). Он основан на ис­пользовании однонитевого специфического уча­стка ДНК («зонда»), специальным образом «по­меченного» и способного, после присоединения к участку анализируемой хромосомы, присоеди­нить флюоресцентные красители (красный, зе­леный и другие цвета). С помощью люминесцен­тного микроскопа окрашенные хромосомы ви­зуализируются на фоне неокрашенных. Метод позволяет расшифровать сложные хромосомные перестройки, а также локализовать ген.

Биохимические методы. Эти методы направ­лены на выявление биохимического фенотипа организма - от первичного продукта гена (поли­пептидной цепи) до конечных метаболитов в моче или поте. Поэтому существует огромное разно­образие методов. Но для целей диагностики на­следственных болезней оправданными являют­ся две биохимические стратегии, которые позво­ляют определить дальнейший ход обследования и выбор соответствующих биохимических мето­дов и тестов: массовые и селективные програм­мы первичной биохимической диагностики на­следственных болезней.

Массовые просеивающие программы приме­няются в диагностике фенилкетонурии, врож­денного гипотиреоза, адреногенитального синд­рома, врожденных аномалий нервной трубки и болезни Дауна. Селективные диагностические программы предусматривают проверку, уточне­ние биохимических аномалий обмена для паци­ентов, у которых подозреваются генные болез­ни, используя простые качественные реакции или более точные методы (тонкослойная хрома­тография мочи и крови, газовая хроматография, флюорометрические методики и др.).

Молекулярно-генетические методы. Это большая и разнообразная группа методов, пред­назначенных для выявления вариаций в струк­туре исследуемого участка ДНК (аллеля, гена, региона хромосомы) вплоть до расшифровки пер­вичной последовательности нуклеотидных осно-