3. Методы выявления молока коров, больных субклиническим маститом, и его санитарная оценка.

Физико-химические исследования молока осуществ­ляют при маститах следующим образом.

Приготовляют водно-спиртовые рабочие растворы ин­дикаторов: 5 г димастина растворяют в 100 мл дистил­лированной воды; 2 г мастидина растворяют в 100 мл дистиллированной воды; 1 г кристаллической розоловой кислоты растворяют в 99 мл 60%-ного спирта-ректифи­ката и к 9 мл этого раствора прибавляют 80 мл 60%-но­го спирта-ректификата. Спиртовые реактивы сохраняют­ся годами, если флаконы плотно закрыты резиновыми или стеклянными пробками; водные растворы димасти­на и мастидина пригодны к использованию несколько недель.

Для исследования берут паренхимное молоко по 10— 15 мл в пробирки отдельно из каждой четверти вымени. По внешнему виду определяют его физические свойст­ва— цвет, запах, консистенцию. Хлопья, сгустки и дру­гие примеси устанавливают процеживанием через чер­ную марлю или специальное сито.

Пробирки с молоком ставят в холодильник (на лед­ник) при температуре 4—6° на 12—18—24 ч. Затем ос­матривают. В нормальном молоке осадка не образуется. При скрытом (субклиническом) мастите осадок имеет­ся. Если проба отстаивания дает сомнительные резуль­таты, то целесообразно провести дополнительные лабо­раторные исследования. Молоко исследуют на щелоч­ность разными физико-химическими методами (табл.7).

1. На небольшую фарфоровую (кафельную) белую плитку, тарелочку или кусок обычного оконного стекла, под которое подложен лист белой бумаги, наносят пи­петкой по 2—3 капли молока из каждого соска и при­бавляют по столько же капель рабочего раствора розо­ловой кислоты, отмечают изменение цвета.

2. На молочно-контрольную пластмассовую пластинку с луночками наносят 1 мл исследуемо­го молока и к нему до­бавляют специальным клювиком 1 мл рабочего растворе димастина или мастидина. Индикатор и молоко перемешивают стеклянной или деревян­ной палочкой и отмечают изменение цвета и образование желеобразного сгустка (рис. 81).

3. Полоски индикаторной бумажки погружают в исследуемое и нормальное (контроль) молоко, вынимают, стряхивают с них оставшиеся капли, при бромтимоловом тесте (Чехословацкое производство) молоко нано­сят пипеткой или непосредственно из пробирки прямо на индикаторную бумажку и смотрят изменение окраски. Смачивать молоком индикаторные бумажки можно и непосредственно под коровой. При надаивании проб мо­лока из вымени на молочно-контрольную пластинку по­следнюю держат отверстием по направлению к голове коровы (или наоборот), что позволяет легко ориентиро­ваться, из какой четверти взято молоко в ту или иную луночку. Иногда молоко коров, не больных маститом, а также перед запуском и в первые дни после отела содер­жит значительное количество различных клеток, в том числе и лейкоцитов. Такое молоко с димастином и мастидином дает сомнительную реакцию. Но в таких случа­ях реакция выражена слабее, чем при заболевании мас­титом, и она отмечается во всех четырех луночках.

Определение пигментов крови и гноя в молоке. Гото­вят рабочие растворы (по И. М. Беляеву): 5 г пирамидо­на растворяют в 95 мл 96%-ного спирта-ректификата; 50 мл уксусной кислоты растворяют в 50 мл дистилли­рованной воды; 5 г гваяковой смолы растворяют в 95 мл 90%-ного спирта-ректификата.

Проба с пирамидоном-к 5 мл молока прибав­ляют 1 мл 50%-ного раствора уксусной кислоты, взбал­тывают и добавляют 0,5 мл 5%-ного спиртового раство­ра пирамидона, 6—8 капель перекиси водорода. Если в молоке есть кровяные пигменты, жидкость окрашивает­ся в светло-фиолетовый (аметистовый) цвет.

Проба с гваяковой смолой. В пробирку на­ливают 1 мл 5%-ного спиртового раствора гваяковой смолы и 0,5 мл перекиси водорода или озонированного скипидара Смесь осторожно наслаивают на исследуе­мое молоко (предварительно налитое в пробирку — 5 мл). При содержании в молоке гноя или пигмента крови на границе соприкосновения жидкостей через 2— 3 мин образуется синее или темно-синее кольцо. При встряхивании вся жидкость окрашивается в темно-синий цвет.

Проба с бензидином. Для выявления в моло­ке пигментов крови в пробирку наливают 5 мл 3%-ного раствора перекиси водорода и 2 мл насыщенного раство­ра бензидина в ледяной уксусной кислоте. Смесь тща­тельно взбалтывают и прибавляют в нее 2—10 капель исследуемого молока. При положительной реакции жид­кость окрашивается сначала в зеленый цвет, а через 0,5—1 мин в темно-синий. При отрицательной реакции жидкость будет светлая с беловатым хлопьевидным осадком.

Определение титра лизоцима в молоке. Вымя коро­вы обмывают теплой водой, высушивают полотенцем или индивидуальной салфеткой, соски дезинфицируют 70%-ным спиртом, после сдаивания из каждой четверти берут в стерильные пробирки по 5—10 мл молока. В чаш­ку Петри (по одной на корову) на подсушенный МПА (рН 7,2) микропипеткой наносят 0,3—0,4 мл суточной бульонной культуры золотистого стафилококка штамма ВМ, предварительно разбавленной физиологическим раствором 1 : 10000, и, равномерно распределив на ага­ре, оставляют на 30—40 мин. Пробочником № 5 в агаре делают четыре луночки диаметром 10 мм. Затем в каж­дую луночку вносят стерильной пипеткой по 0,1 мл (2 капли) исследуемого молока. Чашки выдерживают при комнатной температуре (18—22°) 18 ч, после чего помещают в термостат на 5—6 ч и затем просматри­вают.

Если молоко содержит лизоцим молока (М), то во­круг луночки отмечается задержка роста стафилококков в виде кольца По диаметру кольца задержки роста мик­роба определяют титр лизоцима молока; задержка роста меньше 16 мм — молоко от коровы, больной субклиниче­ским маститом; 17—24 мм — сомнительное; 25 мм и бо­лее — молоко от здоровой коровы.

Определение лейкоцитов в молоке. В специальные пробирки до отметки 10 наливают молоко и центрифу­гируют 5 мин при 2000 оборотах в минуту. Определяют, есть ли осадок в узком конце пробирки. Если уровень осадка ниже отметки 1, молоко считается нормальным, если осадок достигает отметки 1 и выше, это служит по­казателем заболевания вымени и недоброкачественно­сти молока. Проводят подсчет лейкоцитов по методу Брида. В 1 мл молока здоровых четвертей содержится до 500 тыс. соматических клеток; при маститах количество их значительно увеличивается.

Определение каталазы с помощью всплывания дис­ка. Метод можно использовать при массовых исследо­ваниях проб молока непосредственно в хозяйстве.

Из хроматографической бумаги марки Ф-1 готовят диски диаметром 12 мм. Приготавливают (в день иссле­дования) 3%-ный раствор перекиси водорода на М/15-фосфатном буфере, рН 7,2. Бумажный диск погружают пинцетом в тщательно перемешанную пробу испытуемо­го молока, а затем переносят в раствор перекиси водо­рода, предварительно налитый в количестве 5 мл в про­бирку размером 60X16 мм. Время, прошедшее от мо­мента погружения диска и до его всплывания на поверхность, отмечают по секундомеру. При наличии клеток в молоке (до 100 тыс. в 1 мл) время всплывания диска равно 1—5 мин, свыше 200 тыс. в 1 мл — диск всплывает за 30—35 с. При маститах диск всплывает за 3—7 с или мгновенно.

Молоко с положительными или сомнительными реакциями в продажу не допускается, его уничтожают.