1.2 Питательные среды, используемые для культивирования молочнокислых бактерий, бифидобактерий и дрожжей.

1.2.1 Питательные среды для определения молочнокислых бактерий.

1. Стерильное молоко. Обезжиренное молоко (кислотность 16 - 18 °T) разливают в пробирки (1/3 часть их емкости) и затем стерилизуют при (121 +/- 1) °C в течение (10 +/- 1) мин.

2. Гидролизованное молоко. Обычное или восстановленное обезжиренное молоко кипятят и охлаждают до (45 +/- 1) °C. После установления активной кислотности 7,6 - 7,8 ед. pH к 1 куб. дм молока добавляют 0,5 - 1,0 г порошка панкреатина или 2 - 3 г поджелудочной железы, пропущенной несколько раз через мясорубку (порошок панкреатина предварительно разводят в небольшом количестве теплой воды). Затем к молоку добавляют 5 куб. см хлороформа. Колбу закрывают корковой пробкой и выдерживают при 40 °C в течение 18 - 24 ч. В течение первых часов молоко несколько раз перемешивают (пробку после встряхивания приоткрывают для удаления паров хлороформа). Через 18 - 24 ч колбу вынимают из термостата, гидролизованное молоко фильтруют через бумажный фильтр, разводят в 2 - 3 раза водой, устанавливают активную кислотность 7,0 - 7,2 ЕД pH и стерилизуют (15 +/- 1) мин. при (121 +/- 1) °C.

3. Агар с гидролизованным молоком. К приготовленному гидролизованному молоку добавляют 1,5% агара. Смесь расплавляют при (121 +/- 1) °C (15 +/- 1) мин., фильтруют через вату (в теплом автоклаве), разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при (121 +/- 1) °C (10 +/- 1) мин.

4. Капустный агар для определения молочнокислых бактерий в плодовоягодных наполнителях. 200 г размельченной свежей капусты добавляют в 1 куб. дм воды, смесь кипятят в течение (10 +/- 1) мин., фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Полученный фильтрат разводят в 2 раза водой, добавляют к нему 20 г глюкозы, 10 г пептона, 10 г углекислого кальция. Добавляют 15 - 20 г агара. Устанавливают активную кислотность среды 7,0 - 7,4 ЕД pH. Разливают в колбы и стерилизуют при (121 +/- 1) °C в течение (20 +/- 1) мин.

1.2.2 Питательные среды для учета количества бифидобактерий.

Для учета количества клеток бифидобактерий используют кукурузно-лактозную и гидролизатно-лактозную среды.

1. Приготовление кукурузно-лактозной среды.В небольшом количестве дистиллированной воды расплавляют агар в количестве (2,5 +/- 0,5) г на 1 куб. дм приготовляемой среды. К остальному количеству дистиллированной воды добавляют (10 +/- 1) г пептона, (40 +/- 1) куб. см водного раствора кукурузного экстракта, разбавленного 1:6, (6 +/- 0,5) г натрия лимоннокислого трехзамещенного, (0,12 +/- 0,02) г магния сернокислого, (2 +/- 0,1) г калия фосфорнокислого однозамещенного, (1,0 +/- 0,1) г натрия фосфорнокислого двухзамещенного, смесь нагревают до температуры (80 +/- 2) °C, после чего соединяют с расплавленным агаром, добавляют (10 +/- 0,5) г лактозы и (0,15 +/- 0,05) г солянокислого цистина или (0,5 +/- 0,1) г кислоты аскорбиновой.

Цистин предварительно растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, в которой устанавливают активную кислотность среды (8,5 +/- 0,5) ЕД pH с помощью 10% раствора NaOH, и нагревают на водяной бане до полного его растворения.

Смесь доливают горячей дистиллированной водой до заданного объема и устанавливают активную кислотность среды (7,1 +/- 0,2) ЕД pH с помощью 40% раствора NaOH или 25% раствора аммиака. Среду разливают в пробирки высоким столбиком по (10 +/- 0,5) куб. см и стерилизуют при (112 +/- 1) °C в течение (30 +/- 2) мин.

Среду проверяют на стерильность путем выдержки при температуре (37+/- 1)°C в течение 2-х суток.

Хранят среду не более месяца при температуре (20 +/- 2) °C и не более 2-х месяцев при температуре (6 +/- 2) °C.

2. Приготовление гидролизатно-молочной среды. Гидролизованное молоко, приготовленное по п. 1.6.7.2, разводят питьевой водой в соотношении 1:1.

В небольшом количестве разведенного гидролизата расплавляют агар в количестве (2,5 +/- 0,5) г на 1 куб. дм приготовляемой среды (в случае приготовления селективной среды с неомицином - (17 +/- 2) г агара на 1 куб. дм). К остальному количеству гидролизата добавляют (20 +/- 1) г пептона и (3,5 +/- 0,5) г хлористого натрия, смесь нагревают до температуры (80 +/- 2) °C, после чего соединяют с расплавленным агаром. В смеси устанавливают pH 7,5 +/- 0,1, кипятят ее в течение (15 +/- 1) мин., дают отстояться, сливают с осадка не фильтруя, доливают горячей дистиллированной водой до заданного объема и добавляют в нее (10,0 +/- 0,5) г лактозы и (0,15 +/- 0,05) г солянокислого цистина. Среду разливают в пробирки высоким столбиком по (10 +/- 0,5) куб. см и стерилизуют при температуре (112 +/- 1) °C в течение (30 +/- 1) мин. с предварительным подогревом автоклава паром в течение (30 +/- 2) мин., pH готовой среды 7,1 +/- 0,2.

3. Приготовление селективных сред для определения количества бифидобактерий в продуктах, в микрофлоре которых присутствуют молочнокислые бактерии. В составе кукурузно-лактозной (по п. 1.6.8.1) или гидролизатно-молочной среды (по п. 1.6.8.2) массовую долю агара увеличивают до (17 +/- 2) г на 1 куб. дм питательной среды. Среды разливают в пробирки по (20 +/- 0,5) куб. см.