Аудиторная работа. Лабораторная работа: Определение активности трансаминаз

Процесс переаминирования (трансаминирования), то есть перенос ами­но­группы на кетокислоту катализируют ферменты с общим наименованием трансаминазы. Трансаминирование наиболее интенсивно протекает в печени, мышцах, сердце и семенниках. Активность органоспецифичных трансаминаз в сыворотке крови – дополнительный, но существенный элемент диагностики некоторых заболеваний: при повреждении отдельных органов, содержащиеся в их тканях трансаминазы поступают в кровоток с интенсивностью, более высокой, чем в условиях нормы. В силу этого трансаминазная активность крови увеличивается (например, при инфаркте миокарда, вирусном гепатите, циррозе печени, раковом поражении печени).

Определение активности аспартатаминотрансферазы (аст).

Ход работы: 1. Приготовить субстратный раствор: 29,2 мг ά-кетоглутаровой кислоты и 2,66 аспарагина растворить в 1 н растворе NaOH, добавляя его малыми порциями до pH = 7,4, затем раствор перелить в мерную колбу на 100 мл и довести до метки 0,1 М фосфатным буферным раствором с pH = 7,4 (добавление 1 капли хлороформа позволяет хранить в рефрижераторе). Раствор для работы представлен.

2. 0,1 мл сыворотки крови смешать с 0,5 мл нагретого до 37ºС субстратного раствора, инкубировать 60 мин при 37ºС; прибавить 0,5 мл динитрофенилгидразинового реактива и экспонировать 15 мин при комнатной температуре. Прибавить 5 мл 0,4 N раствора NaOH и через 20 мин колориметрировать против контроля (кювета – 10 мм, фильтр зеленый). Контроль – те же реактивы + 0,1 мл H₂O. Определить активность по таблице.

Таблица для вычисления активности АСТ

Экстинкция	Е по Врублевскому	IE
0,020 0,040 0,060 0,080 0,100 0,120 0,140 0,160 0,180 0,200 0,220 0,240 0,260	8 16 24 32 40 49 59 71 83 100 118 140 167	4 8 12 15 19 24 28 34 40 48 57 62 80

Решите следующие задачи:

1.Аланин с рационом поступает в организм в трехкратном избытке. Возможные превращения избыточного аланина? Изобразите в виде схемы.

2. Известно, что потребление 1 г белка сопровождается образованием 0,16 г азота в форме мочевины. Энерготраты пациента составляют 3500 ккал в сутки, выделение мочевины - 20 г за сутки. Определить долю белка в энерготратах (калорийность белка - 4,1 ккал/ г).

3. Глутаминовая кислота в процессе окислительного дезаминирования превращается в α-кетоглутаровую. Рассчитать энергетический эффект полного окисления 1 М глутаминовой кислоты (в молях АТФ).

4. При инкубации с переживающей тканью печени аспарагиновой кислоты, содержащей радиоизотоп углерода в α-положении, в составе какого соединения обнаружится радиометка (другими словами, в состав какого соединения войдет α-углеродный атом)?

5.В крови повысился уровень глутамина, увеличилось количество аммонийных солей и мочевины в моче, одновременно снизился уровень глутаминовой кислоты в крови. Оцените эти сдвиги.

6. Составить дифференциально-диагностическую таблицу: Врожденные нарушения обмена аминокислот:

Наименование патологии	Энзимдефект	Субстраты, обмен которых нарушен	Метаболиты, уровень которых изменяется

7. На схеме «Взаимосвязь углеводного и липидного обменов» (подготовленную на предыдущих занятиях) указать метаболические пути аминокислот, проиллюстрировав взаимосвязь всех обменных процессов.

ЗАНЯТИЕ 25. Обмен сложных белков. Метаболизм нуклеотидов и гема.

Цель занятия: Изучить метаболизм нуклеотидов и гема. Знать основные биохимические показатели, характеризующие состояние обмена; их значение, свойственные физиологической норме, и уметь сделать предположение о характере нарушений в обменных процессах.

Студент должен знать:

1. Функции нуклеотидов и их производные в организме.

2. Возможные источники нуклеотидов в организме.

3. Биосинтез пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов. Источники биосинтеза. Роль витаминов Вс и В12. Понятие «оротацидурия».

4. Катаболизм пиримидиновых и пуриновых нуклеотидов. Нарушения обмена. Понятие «гиперурикемии

5. Источники гема в организме. Функции гемоглобина.

6. Синтез гема и глобина. Нарушения: гемоглобинопатии, порфирии

7. Катаболизм гема. Образование и виды билирубина. Общие представления о желтухе и ее видах.

8. Диагностическое значение определения желчных пигментов в крови и моче.

Студент должен уметь:

1. Изобразить структурными формулами процесс образования мочевой кислоты. Указать на схеме ключевой фермент.

2. Составить схему биосинтеза пиримидиновых нуклеотидов. Уяснить причину оратацидурии.

3. Составить таблицу: Клинико-биохимическая характеристика желтух.

4. Количественно определить содержание общего билирубина, свободного связанного в сыворотке крови. Интерпретировать полученные результаты.

5. Качественно определить содержание мочевой кислоты.

6. Определение понятия « остаточный азот». Содержание в крови.