Получение антител в культуре клеток

Антитела представляют собой сложные белковые молекулы (иммуноглобулины), синтезирующиеся в клетках животных и их нельзя синтезировать химическим путем или в клетках бактерий. Их можно получать в больших количествах из сыворотки иммуни­зированных животных. Однако они содержат смеси молекул ан­тител в соотношениях сильно варьирующих у разных животных. Так как реактивность таких гормональных антител представляет собой сумму реакций отдельных молекул, то практически нель­зя добиться одинакового уровня специфичности между различ­ными препаратами. Эта проблема решена на основе технологии получения моноклональных антител, которая была предложена Келером и Милыптейном.

В результате экспериментов, проведенных этими авторами, была получена клеточная линия, которая способна вырабатывать антитела одного молекулярного состава (моноклональные анти­тела), что имело основополагающее значение в развитии нового научного направления - иммунобиотехнологии.

Клетки, способные продуцировать моноклональные антите­ла, получают в результате слияния клеток миеломы и лимфоцита, который вырабатывает один и тот же тип антител. Для промыш­ленного получения моноклональных антител культуры гибридомных клеток культивируют в системе in vitro в сосудах для куль­тивирования клеток.

Получение инсектицидов в культуре клеток

Инсектициды можно получить из вирусов, которые деталь­ны для насекомых. Вирусы специфически поражают отдельные виды насекомых, при этом не оказывают влияния на жизнедея­тельность других видов насекомых. Использование вирусных ин­сектицидов имеет еще одно преимущество - они не загрязняют окружающую среду по сравнению с химическими веществами. Показано, что около 80 % всех использующихся в сельском хо­зяйстве пестицидов могут быть заменены инсектицидами из бакуловирусов. При этом затраты на их производство почти на 50 % ниже стоимости пестицидов.

В настоящее время существуют два способа получения виру­сов насекомых, использующихся в качестве инсектицидов, один из них: - разведение насекомых и их инфицирование виру­сом с последующей очисткой вирусных частиц. Второй - это про­изводство вирусов в культуре клеток насекомых in vivo . Однако этот перспективный способ получения инсектицидов требует еще глубоких исследований, так как продукция вирусов в этих си­стемах пока не очень высокая. Культивирование клеток насеко­мых было начато в конце 30-х годов XX столетия В.Трагером. В на­стоящее время получены различные клеточные линии насекомых,

Получение интерферонов в культуре клеток животных

Интерферон - это белок, синтезирующийся лейкоцитами в от­вет на воздействие специфическихчужеродныхвеществ. Он был от­крыт в 1957 г. в клетках цыпленка, которые были заражены вирусом гриппа. Однако дальнейшие исследования интерферонов показали, что они могут синтезироваться не только лейкоцитами, но и други­ми клетками млекопитающих, а в ответ на вирусную инфекцию син­тезируется не один, а целое семейство интерферонов. Интерфероны ингибируют размножение вирусов в клетке. Интерфероны Р и у -являются гликопротеидами, а а - протеином.

Интерфероны - видоспецифичные белки, т.е. для каждого вида животного характерен свой интерферон. Однако они не вирус-специфичны, т.е. они подавляют размножение разных вирусов в клетке.

Индукторами интерферонов могут быть инактивированные температурой вирусы, двухнитевые молекулы РНК (например, реовирусная РНК), бактериальные эндотоксины, поликарбоновые кислоты, синтетические полирибонуклеотиды, в частности, поли-Ц, поли-У Механизм индукции интерферонов до конца еще не изучен.

Интерферон а получают из лейкоцитов крови человека. Лейкоциты выделяют и переносят в культуральную среду и инфи­цируют их вирусом (Сендай, или вирус Нью-Каслской болезни), инкубируют в течение ночи, после этого лейкоциты осаждают цен­трифугированием, вирус инактивируют. В супернатанте содержит­ся нативный интерферон. Его лиофильно высушивают и запаивают в стеклянные ампулы.

Интерферон Р получают из фибробластов, которые выращи­вают в монослойной культуре. Индукцию интерферона обеспечи­вают введением в культуру клеток фрагментов РНК, синтезиро­ванных из последовательностей цитозина (поли-Ц) в присутствии циклогексимида и актиномицина Д. Необходимо отметить, что ин­терфероны продуцируются в малых количествах (около 1 мг на 10 л культуральной жидкости).

В настоящее время выпускаются генно-инженерные интерфе­роны, т. е. интерфероны, полученные на основе технологии рекомбинантных ДНК.