Раздел 2. БиологическаЯ химия

Тема 7. Ферменты

Вопросы, выносимые для изучения

1. Классификация ферментов. Номенклатура.

2. Строение ферментных систем. Биологическая роль.

3. Механизм действия ферментов.

4. Специфические свойства ферментов.

Лабораторная работа № 7

Цель работы: Изучить основные свойства ферментов.

В данной работе каждому звену необходимо приготовить раствор амилазы (разбавленной слюны, содержащей фермент амилазу). Для этого после двукратного полоскания рта, набрать в рот 15-20мл Н₂О_дист., полоскать 1,5-2 минуты. Смесь воды и слюны вылить изо рта в пробирку или колбочку. Раствор амилазы готов.

Опыт 1. Термолабильность ферментов.

Оборудование: Штатив с пробирками, спиртовки.

Реактивы: 1% крахмал, раствор Люголя (J₂+KJ)

Ход работы:

В две пробирки внести по 1-2мл раствора амилазы . Содержимое первой пробирки прокипятить. Затем в обе пробирки добавить по 2-3мл 1%крахмала. Инкубировать 10 минут при температуре 37⁰С.

После инкубации на предметное стекло нанести по 1 капли содержимого из каждой пробирки и добавить по 1 капли раствора йода (раствор Люголя).

Провести визуальные наблюдения и сделать вывод.

№ пр-ки	Температура, 0С	Реакция с йодом (+, -)
1	100
2	37

Опыт 2. Влияние рН среды на активность ферментов.

Оборудование: Штатив с пробирками.

Реактивы: 1% крахмал, раствор Люголя, буферные растворы с рН=5,0, 6,8, 8,0.

Ход работы:

В три пронумерованные пробирки внести по 1-2мл буферных растворов с рН 5,0; 6,8; 8,0. В каждую пробирку добавить по 2-3мл раствора амилазы и по 2 мл раствора крахмала. Содержимое каждой пробирки перемешать и инкубировать 10 минут при температуре 37⁰С.

После инкубации на предметное стекло нанести по 1 капли содержимого из каждой пробирки и добавить по 1 капли раствора йода (раствор Люголя).

Провести визуальные наблюдения и сделать вывод.

№ пр-ки	рн среды	Реакция с йодом (+, -)
1	5,0
2	6,8
3	8,0

Опыт 3. Специфичность действия амилазы.

Оборудование: Штатив с пробирками, спиртовки.

Реактивы: 1% крахмал, 1% сахароза, р-р Люголя,

Ход работы:

В две пробирки внести по 1-2 мл амилазы. Затем в первую добавить 2-3мл 1% крахмала, а во вторую– 2-3мл 1% сахарозы. Содержимое каждой пробирки перемешать и инкубировать 10-15 минут при температуре 40⁰С.

После инкубации на предметное стекло нанести по 1 капли содержимого из каждой пробирки и добавить по 1 капли раствора йода (раствор Люголя).

После проведения реакции с йодом в пробирки добавить жидкость Фелинга и нагреть верхний слой до кипения.

Провести визуальные наблюдения и сделать вывод.

№ пр-ки	Фермент	Субстрат	Реакция с йодом (+,-)	Реакция Фелинга (+,-)
1	Амилаза слюны	Крахмал
2	Амилаза слюны	Сахароза

Опыт 4. Влияние активаторов и ингибиторов на активность ферментов.

Оборудование: Штатив с пробирками.

Реактивы: 1% крахмал, р-р Люголя, 1% NaCl. 1% CuSO₄.

Ход работы:

В три пробирки внести по 1-2мл амилазы и по 2-3мл 1% крахмала. Затем в первую добавить1-2мл воды, во вторую - 1-2мл 1% NaCl, а во вторую – 1-2мл 1% CuSO₄.Содержимое пробирок перемешать и инкубировать 5 минут при температуре 37⁰С.

После инкубации на предметное стекло нанести по 1 капли содержимого из каждой пробирки и добавить по 1 капли раствора йода (раствор Люголя).

Провести визуальные наблюдения и сделать вывод.

№ пр-ки	Содержимое пробирки	Реакция с йодом (+, -)	Активатор или ингибитор
1	Крахмал, амилаза, Н2О
2	Крахмал, амилаза, NaCl
3	Крахмал, амилаза, CuSO4

Контрольные задания

1. Строение ферментов. Центры и их роль.

2. Показать механизм действия ферментов на примере гидролиза крахмала.

3. Охарактеризовать основные свойства ферментов.

4. Назвать по 3 фермента из каждого класса ферментов и написать реакции, которые они катализируют: