Тема 13. Обмен нуклеиновых кислот

Вопросы, выносимые для изучения

1. Азотистые основания, нуклеозиды, мононуклеотиды, динуклеотиды.

2. ДНК. Особенности строения, биологическая роль.

3. РНК: р-РНК, и-РНК, т-РНК. Строение, биологическая роль.

4. Нуклеопротеиды.

лабораторная работа

Опыт1. Кислотный гидролиз нуклеопротеида.

В колбу Кьельдаля внести 30мл раствора нуклеопротеида, полученного из дрожжей, и добавить 30мл 10% H₂SO₄. Колбу закрыть пробкой с обратным холодильником и осторожно кипятить в течение часа. После этого содержимое колбы охладить и профильтровать.

Небольшую часть полученного гидролизата (фильтрата) отлить в пробирку и использовать для определения фосфорной кислоты.

Оставшийся гидролизат нейтрализовать щелочью и использовать для обнаружения белков, пентоз, азотистых оснований.

1. Обнаружение фосфорной кислоты.

В пробирку внести 0,5-1 мл кислого гидролизата, добавить 0,5-1мл реактива на фосфор (ванадат-молибденовый реактив). Появление желтого окрашивания свидетельствует о наличии фосфорной кислоты.

2. Обнаружение пентоз.

В пробирку внести 0,5-1мл нейтрализованного гидролизата, добавить равный объемреактива Фелинга. Содержимое пробирки перемешать и нагреть до кипения верхний слой жидкости. Появление красно-желтого окрашивания свидетельствует о наличии пентоз.

3. Обнаружение пуриновых оснований.

В пробирку внести 0,5-1 мл нейтрализованного гидролизата и добавить равный объем аммиачного раствора серебра. Появление хлопьевидного осадка свидетельствует о наличии аденина и гуанина.

4. Обнаружение протеинов.

В пробирку 0,5-1мл нейтрализованного гидролизата, добавить равный объем 10% NaOH и 1-2капли 1% СuSO₄. Появление сине-фиолетового окрашивания свидетельствует о наличии белков.

Провести визуальные наблюдения и сделать вывод. Написать уравнение ступенчатого гидролиза нуклеопротеида, указать ферменты.

Контрольные задания

1. В чем сходство и различие в строении ДНК и РНК?

3. Используя таблицу кодов, написать участок ДНК, в котором хранится информация о синтезе ала-цис-лей-глу-асп.

4. Написать тетрануклеотид АТГЦ (ГУЦА, ТТАГ, УАГУ, ГЦЦТ)

Тема 14: Водно-солевой обмен

Вопросы, выносимые для изучения

1. Элементарный состав животного организма.

2. Биохимическая роль макро- и микроэлементов.

3. Антагонистические и синергические отношения между элементами.

4. Методы определения минерального состава кормов, органов и тканей.

Лабораторная работа № 12

Опыт 1. Определение кальция в сыворотке крови.

В колбочку для титрования налить 3мл Н₂О_дист., 2мл 10%NaOH и внести несколько кристаллов индикатора мурексида до появления фиолетовой окраски. Перемешать и добавить 0,2мл сыворотки крови (раствор становится розовым). Оттитровать из пипетки 0,05М трилоном Б до восстановления окраски.

Содержание кальция в сыворотке крови рассчитать по формуле:

Х = а∙ 0,12  100

где: Х – содержание кальция в сыворотке крови, мг%;

а – объем трилона Б, пошедшего на титрование, мл;

0,12 – мг кальция, эквивалентное 1мл трилона Б;

100 – пересчет на мг%.

Опыт 2. Определение неорганического фосфора

в безбелковом фильтрате сыворотки крови.

1. Приготовление исследуемого раствора.

В пробирку внести 2,5 мл дист. воды, 0,5 мл сыворотки крови и 2 мл 5%ТХУ. Содержимое пробирки энергично перемешать и через 5 минут профильтровать.

В чистую пробирку внести 2,5 мл полученного фильтрата (раствор 1)

2. Приготовление стандартного раствора.

В пробирку внести 0,5 мл раствора, содержащего 5 мг% фосфора и добавить 2,5мл дист. воды и 2 мл ТХУ. Содержимое пробирки перемешать. Из полученной смеси отобрать в чистую пробирку 2,5 мл (раствор 2)

3. Цветная реакция.

В две пробирки, содержащие по 2,5мл раствора 1 и 2 добавить по 2,5мл реактива на фосфор (ванадат-молибденовый реактив). Содержимое пробирок перемешать и через 10 минут колориметрировать на ФЭКе с синим светофильтром (λ =440 нм) в кювете толщиною слоя 1см против дистиллированной воды.

Расчет произвести по формуле: А

Х = -----  5

Б

где, Х - содержание фосфора в сыворотке, мг%; А - экстинция образца сыворотки крови; Б - экстинция стандартной пробы, 5 - коэффициент перевода в мг%.

Контрольные задания

1. Классификация минеральных элементов.

2. Описать биохимическую роль, механизм всасывания и выделения минеральных элементов. (Сa, P, Mg, K, Na, Cl, S, J, F, Fe, Zn, Co, Cu, Br, B, Mn, Mo, Se)

3. В чем заключается токсическое действие (Cu, Zn, Hg, Cr, Ni, As, Cs, Sr, Cd, Pb, Al)

П Р И Л О Ж Е Н И Я

Таблица 1

ТАБЛИЦА ДЕСЯТИЧНЫХ ЛОГАРИФМОВ (двузначная)

Целое число	Десятые доли числа
	0	1	2	3	4	5	6	7	8	9
1	00	04	08	11	15	18	20	23	26	28
2	30	32	34	36	38	40	42	43	45	46
3	48	49	51	52	53	54	56	57	58	59
4	60	51	62	63	64	65	66	67	68	69
5	70	71	72	72	73	74	75	76	76	77
6	78	79	79	80	81	81	82	83	83	84
7	85	85	86	86	87	88	88	89	89	90
8	90	91	91	92	92	93	93	94	94	95

Таблица 2