16. Методы определения ферментативной активности бактерий.

Протеолитические:

Протеазы расщепляют белки до аминокислот, мочевины, индола, сероводорода, аммиака.

На средах с белком по выделению этих продуктов выявляют протеазы.

• На средах с желатином – разжижение среды

• На свернутой сыворотке – по ее разжижению

• На молоке по его просветлению (разрушается казеин)

• На МПБ – по выделению газа индола и H₂S (выявляют с помощью индикаторных бумажек)

Сахаролитические:

Эти ферменты расщепляют углеводы до альдегидов, кислот, углекислого газа, и H₂.

У среде МПБ или МПА с углеводами (моносахара), добавляют индикатор кислотообразования и пополов газообразования. По такому принципу создают среды Гиса и Пестрый ряд.

Если цвет среды изменяется и выделяется газ, значит, происходит расщепление углеводов.

На этом принципе создаются: панели, планшеты, бумажные индикаторные системы (СИБ, БИС), энетротуба и приборы для учета ферментативной активности.

Липолитические ферменты:

Липазы выявляют на ЖСА (желточно-солевом агаре), в желтке много липидов, разрушение которых сопровождается просветлением среды.

17. Внутривидовая идентификация бактерий.

После выделения чистой культуры можно идентифицировать бактерии внутри вида по активности их ферментов и способности расщеплять углеводы, белки и жиры.

Например:

• Определение серотипа сальмонелл при брюшном тифе по способности расщеплять углеводы до кислоты и газа, или отсутствию одного или обоих признаков.

• Внутривидовая идентификация по способности расщеплять галактозу, глюкозу, сахарозу и мальтозу.

18. Питательные среды, их классификацию. Требования к пс.

1. По происхождению: Естественные – молоко, крахмал, картофельные, яичные и Искусственные

2. По составу:

• Простые – являются основой для других сред. На простых средах растет большинство бактерий.

– МПБ – мясо-пептоный бульон – готовится из мясного бульона, обрабатывается ферментом пепсином, в результате чего образуется продукт неполного расщеплении белков – пептоны и до 70% свободных аминокислот.

– МПА – мясо-пептоный агар – это МПБ и уплотнитель агар-агар.

• Сложные – содержат различные биологические добавки или сыворотки, химические соединения, антибиотики.

3. По консистенции: Жидкие, Плотные, Полужидкие

Уплотнителем питательных сред является агар-агар – полисахарид из водорослей, он не переваривается ферментами бактерий, уплотняется при температуре 36-40⁰С.

4. По назначению питательные среды могут быть

• Среды обогащения – магниевая среда, сахарный МПБ

• Элективные среды – это среды, на которых одни виды бактерий получают преимущество для развития (возбудитель холеры хорошо растет на щелочном пептоном бульоне).

• на них хорошо развиваются определенные виды м/о (для стафилококка – желточно-солевой агар, в присутствии соли он хорошо развивается, ).

• Дифференциально-диагностические среды – это среды, на которых может отдифференцировать один вид м/о от другого по определению у них биохимических свойств.

  • Гемолитические свойства у стафилококков, стрептококков и других бактерий определяют на кровяном агаре – α-гемолитический образует бесцветные колонии, а β-гемолитический – зеленые колонии.

  • Сахаролитические св-ва – определяются на ПС с углеводами и различными индикаторами:

– среды Гисса – содержат глюкозу, мальтозу, лак­тозу, сахарозу, маниит… и индикатор Андреде (кислый фуксин в растворе NaOH). При разложении субстра­та среда приобретает красный цвет.

– среда Эндо – лактозный агара с индикатором (основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия Na₂SO₃. Лактозо(+) – колонии красного цвета с металлическим блеском, лактозо(–) – бесцветные.

– Среда Левина – лактозный агар с индикатором (эозин и метиленовый синий), лактозо(+) – колонии красно-фиолетового цвета с металлическим блеском, лактозо(–) – бесцветные.

5. Консервирующие среды – предотвращают отмирание бактерий, например среды с глицерином