22. Культивирование и методы выделения чистой культуры аэробов и анаэробов.

Культивирование м/о – это получение большого числа бактерий на питательной среде.

Цель культивирования: Изучение микробиологических свойств, Для диагностики инфекций и Для получения биопрепарата из бактерий или полученные с помощью бактерий.

Условия культивирования бактерии:

• Наличие полноценной питательной среды.

• Оптимальная t (≈37 ⁰C)

• Атмосфера культивирования (есть O₂ или без него).

• Время культивирования – видимый рост через 18-48 часов, или для некоторых 3-4 недели (tbc)

• Освещенность питательной среды для фотосинтезирующих (растут только в присутствии света).

Аэробы.

Способы культивирования:

• Стационарный – на поверхности агара

• Метод глубинно культивирования с аэрацией среды для растворения в ней кислорода

• Непрерывное культивирование – используют проточные питательные среды.

Этапы выделения ЧК.

1. Изучение смеси – мазок окраска по Грамму.

2. Разобщение бактериальных клеток в смеси и получение колоний:

• По Дригальскому – штрихами по поверхности агара (петлей с материалом делают штриховые движения по пластинчатому агару, к последних штрихах выросту единичные колонии).

• Метод серийных разведений Пастера в физ растворе.

• Метод серийных разведений Коха в расплавленном агаре.

3. Проверка частоты колоний (мазок → окраска по Граму → микрокопирование).

4. Пересев колоний на скошенный агар для накопления чистой культуры.

5. Идентификация микроорганизма по:

• Морфологическим свойствам

• Тинкториальным свойствам

• Культуральным свойствам

• Ферментативным свойствам

• Патогенным свойствам

• Антигенными свойствам

• Чувствительность к антибиотикам…

Анаэробы.

Особенности культивирования:

Для культивирования анаэробов создаются бескислородные условия, что достигается:

1. Регенерацией ПС – питательная среда кипятится и растворенный O₂ выходит из нее.

2. Использование специальных приборов:

• Анаростаты – O₂ удаляется откачиванием воздуха и заполняется инертным газом.

• Эксикаторы – O₂ поглощается химическими поглотителями или выжигается лучиной.

3. Добавление в среду редуцирующих веществ – которые быстро окисляются (углеводы, цистеин, кусочки паренхиматозных органов, аскорбиновая кислота), на этом принципе создана среда для анаэробов – Китт-Тароцци – среда для анаэробов (МПБ, 0,5% глюкозы, кусочки печени).

4. Специальные методы посева:

• Посев под масло

• Посев в трубке Вейон-Веньяла

• Посев по Фортнеру – на чашку заселяют аэробы и анаэробы, аэробы поглощают кислород и получается анаэробная среда.

Выделение чистой ЧК:

1. Накопление анаэробов: смесь засевают на среду Китт-Тароцци и прогревают при t 80 ⁰С 10 мин, спорообразующие анаэробы споры сохраняются, а прочие вегетативные формы м/о погибают. Затем питательная среда культивируется, споры прорастают, и анаэробы размножаются и накапливаются и накапливаются.

2. Получение колоний:

• по Цейслеру – колонии анаэробов получают на поверхности агара в анаэростате

• по Вейнбергу – колонии получают в трубках Вейон-Веньяла.

3. Проверка частоты (мазок → окраска по Граму → микрокопирование) – все анаэробы Гр(+).

4. Пересев Колоний на среду Китт-Тароцци и накопление чистой культуры анаэробов.

5. Идентификация, определение вида анаэроба.