1)Цитология и эмбриология

1)Методы исследования в гистологии. Основные принципы и этапы изготовления гистологических препаратов.

И

Индифферентные. Имеют гидрофобную природу , водонерастворимые. Судан3,4 окрашивают жировые, липидные капли.

сследования с помощью окраски гистологических препаратов

К

Кислые(эозим, фуксин)окрашивают в ярко розовый цвет. Ст-ра (оксифильные) белки цитоплазматические, коллоген

Нейтральные .Смесь .Ст-ры нейтрофильные специальные гранулы нейтроф. лейкоциты

Основные (гематоксилин , азур2, карлим) Ст-ры базофильные.Ст-ры богатые орг. Кислотами , ядра, рибосомы, аморфные компоненты межклеточного в-ва

расители

Методы окраски:

1)Гематоксилином(фиолетовый цвет, ядра) и эозином (цитоплазма-розовый цвет) – смесь

2)Окраска по методу Романовского- для мазков крови и кр. Костного могзга

Азур2-окрашивает базофильные структуры (темно-синий цвет)

Эозин-оксифильные ст-ры в розовый

3)Окраска железным гематоксилином .

Предварительно препарат обрабатывают железноамиач. квасцами (ивасцами),потом красят гематоксилином. Видны ядро, гранулы клетки, мышечные волокна. Цвет-коричнево-серый.

Гистохимические методы:

1-Р.Броме на РНК. Смесь 2-ух красителей: метилового зеленого и пиронина (окр.стр-ры богатые РНК в малиновый цвет)

2-Р.Фельгина- на ДНК. Фуксин сернистая кислота окрашивает ДНК- в вишневый цвет, остальные в зелёный.

3-Р.на белки

• С бром феноловым синим(темно-фиолетовое окр.)

• Смесь нингидрин-реактив Шиффа(белки красные)

4-Шифф-периодная кислота (ШИК-р. На полисахариды) положительные компоненты (гранулы гликогена) фиолетовый цвет

5-Р.столуидиновым синим - на гликозамингликаны. При взаимодействие с веществами сод. ≥ кисл. гр. Измененяется окраска на фиолетов. и красную (метахромазия)

6-Р. С суданом3 – на нейтр. жир. Проникает в жировые клетки и окрашивает их в ярко- оранжевый цвет

Приготовление препарата:

Виды препаратов:

• Срезы тканей органов (толщина ≥5мкм)

• Мазки (крови)

• Отпечатки (селезенка)

• Тотальные (брюшина, мягкая мозговая оболочка)

Срезы 5 этапов:

1. Взятие и фиксация материала. Кусочек (0,5*1*1 см) в формалин,иметанол. Это проводится для предотвращения самопереваривания (аутолиз). Затем промывают Н2О(вода)

2. Обезвреживание и уплотнение материала. Обезвеживане-«проводят» по батарее р-рсв этилового спирта 70%,80%, 96%, 100% -24г

3. Приготовление срезов. Кубики в обьектодержатель микротома,он режет, затем на предметное стекло.

4. Окрашивание. Перед этим освобождают от парафина по батарее р-лей кислот, этиловым спиртом 100, 96, 80, 70, 60%, Н2О. для окрашивания помешается в краситель, затем промывают водой.

5. Заключение срезов в консервированную среду

• Обезвреживаниие (спиртовые реакции с возвратной конц.)

• Просветляют (ксиоле) для удаления краски

• Капля канадского бальзама и покр. стекло

Тотальные препараты и мази готовят также, но без уплотнения материала и собств. прилог среза. Есть фиксация окр., и заключается в консерв. среду . масло кедровое