- •Одержання і застосування ферментних препаратів
- •1. З історії ензимології
- •2. Джерела сировини для одержання ферментів
- •Тваринні ферменти
- •Рослинні ферменти
- •3. Вибір і селекція продуцентів ферментів
- •4. Промислові методи культивування продуцентів ферментів
- •Поверхневий метод культивування
- •Технологічні етапи одержання ферментів поверхневим методом
- •Глибинний метод культивування
- •5. Одержання очищених ферментних препаратів
- •6. Імобілізація і стабілізація ферментів
- •Методи іммобілізації
- •Носії для іммобілізованих ферментів
- •7. Як працюють ферменти
- •Застосування ферментних препаратів Протеїнази
- •Глюкозоізомераза
- •Амілази і амілоглюкозидази
Рослинні ферменти
Це гідролітичні ферменти.
Папаїн — виробляють з незрілих плодів динного дерева («млечный сок»). На плодах роблять надсічки і збирають сік, потім його розмішують, білки випадають в осад. Висушують. Для використання в харчовій промисловості очищають. У США використовують для пом’якшення м’яса.
Бромелін – віджимають сік із стебел ананасу, осаджують білок органічними розчинниками (спирт, ацетон).
Фіцин (Ficus) – одержують із листя інжирного дерева, віджимають сік.
Традиційне наше джерело — солод. Дорога, дефіцитна сировина і містить в основному амілази, відносно термостабільні. Вихід здешевлення і забезпечення зростаючих потреб у ферментних препаратах знайдено. З мікроорганізмів можна виділити будь-які з відомих ферментів і ферментні комплекси, які краще відповідають потребам промисловості.
У наш час в літературі описано більше 2000 ферментів. Близько 200 з них застосовують у промисловому виробництві. Промисловість випускає зараз більше 50 індивідуальних ферментів і понад 100, так званих, ферментних препаратів. Останні являють собою суміші, що містять крім цільового ферменту значні кількості близьких за фізико-хімічними властивостями білків. Для виділення цих білків часто потрібні дорогі і трудомісткі операції. Тому чистий продукт використовують головним чином в медицині і наукових дослідженнях, а в промислових процесах звичайно застосовують ферментні препарати.
До недавнього часу ферменти одержували з тканин різних тварин, рослин і мікроорганізмів. Хоч деякі з них (підшлункова залоза, слизова оболонка шлунку) дуже багаті ферментами, але все ж кількість цієї сировини обмежена. Найбільш доступне і практично необмежене джерело для одержання ферментів в промисловому масштабі — мікроорганізми. У них містяться ферменти всіх відомих у наш час типів, а методи сучасної мікробіології дозволяють виробляти велику кількість ферментів за короткий час і з використанням дешевої сировини (див. табл.1)
Табл.1. Ферменти мікробного походження
Фермент |
Джерело |
Галузь застосування |
Зовнішньоклітинні ферменти
|
||
α- Амілаза |
Aspergillus oryzae Bacillus subtilis Bacillus liheniformic |
Гідроліз крохмалю для виробництва глюкози, глюкозо-фруктозного сиропу, спирту |
β- Глюканаза |
Aspergillus sp. Bacillus subtillis |
Виробництво пива |
Целюлаза |
Aspergillus sp. Trichoderma viride Penicillium sp. |
Гідроліз целюлозовмісної сировини |
Декстриназа |
Penicillium sp. |
Гідроліз декстринів при виробництві соків |
Глюкоамілаза |
Aspergillus niger Rhizopus sp. |
Оцукрювання крохмалю, виробництво спирту |
Геміцелюлаза |
Aspergillus niger |
Гідроліз полісахаридів |
Лактаза |
Aspergillus niger |
Гідроліз лактози в харчовій промисловості |
Ліпаза |
Aspergillus niger Candida cillindraccae Mucor miehei Mucor sp. |
Перетворення жирів, замість панкреатичної ліпази, приготування сиру |
Пектиназа |
Aspergillus sp. Rhizopus sp. |
Виробництво соків і вина |
Протеаза |
Aspergillus niger Aspergillus orusae Rhizopus sp. Bacillus subtillis Bacillus liheniformic Bacillus sp. alkalophilus |
Миючі засоби, гідроліз білків для харчування і кормів, обробка шкур, м’яса, гідроліз білків зерна у пивоварінні |
Протеаза, мікробний ренін |
Endothia parasitica Mucor miehei |
Зcідання молока |
Полуланаза |
Mucor pusillus Klebsiella aerogenes |
Гідроліз амілопектину при гідролізі крохмалю |
Внутрішньоклітинні ферменти
|
||
α- Аспарагіназа |
Escherichia coli |
Лікування гострого лейкозу |
Каталаза |
Aspergillus niger
|
Видалення пероксиду водню при стерилізації молока |
Холестеролоксидаза |
Nocardia rhodochrous |
Аналіз холестеролу |
β- Галактозидаза |
Kluy veromyces fragilis Saccharomyces lactis |
Гідроліз лактози |
Глюкозоізомераза |
Bacillus coagulans Streptomyces sp. |
Виробництво глюкозо-фруктозного сиропу |
Інвертаза |
Saccharomyces cerevizіae Aspergillus niger |
Гідроліз сахарози |
Глюкозооксидаза |
Penicillium notatum |
Видалення кисню, клінічні аналізи |
Пеніцилінацилаза |
Escherichia coli |
Деацилювання бензилпеніциліну |
Важливі особливості мікробіологічного одержання ферментів. Перші 11 ферментів в таблиці відносяться до так званих зовнішньоклітинних ферментів. Вони виділяються мікроорганізмами в навколишнє середовище і призначені в основному для розщеплення високомолекулярних сполук до легко проникаючих в клітину субстратів. Решта ферментів внутрішньоклітинні. Звичайно бажаніша перша група, так як ці ферменти легко відділяються від мікробної біомаси. Стадії відділення внутрішньоклітинних ферментів передує стадія дезінтеграції клітин, яка може проводитись як фізичними (механічними) так і хімічними та біохімічними методами.
Мікроорганізми дуже швидко розмножуються. Такі темпи зовсім недосяжні для рослин і тварин. Для вибору оптимального штаму мікроорганізму — продуцента певного ферменту — використовуються такі прийоми, як селекція, підбір умов культивування і одержання мутантів. Дуже великі надії покладаються на методи генної інженерії.