2.2.Изучение инструкции к выполнению практической работы

ПРИЛОЖЕНИЕ№ 3

Инструкция по выполнению практической работы № 79 (44) по теме:

«Водно-минеральный обмен.

Определение содержания калия в сыворотке крови»

Цели занятия:

1. Закрепить и углубить теоретические знания по теме: «Водно-минеральный обмен»

2. Изучить метод определения содержания калия в сыворотке крови

Исходный уровень знаний и умений

Учащийся должен знать:

1. Водный и электролитный баланс;

2. Патологию обмена калия;

3. Метод лабораторного исследования содержания калия в сыворотке крови;

Учащийся должен уметь:

1. Организовать рабочее место для проведения исследования;

2. Практически выполнять определение фосфора в сыворотке крови колориметрическим методом;

3. Проводить дезинфекцию лабораторной посуды, биологического материала, рабочего места, перчаток, рук;

4. Заполнять бланк исследования;

5. Интерпретировать полученные результаты.

Структура занятия

1. Теоретическая часть:

0. 1.1 Повторение теоретического материала по теме: «Водно-минеральный обмен».

1. 1.2 Вводное слово преподавателя

2. Указания к занятию. Методические рекомендации:

1. 2.1.Внимательно изучите инструкцию.

2. 2.2.Приготовьте всё необходимое оборудование, реактивы для проведения анализа.

3. 2.3.Соблюдайте меры предосторожности при работе с биологическим материалом.

4. 2.4. По окончании работы провести дезинфекцию использованного биологического материала, посуды.

3. Практическая часть:

3.1 Лабораторная работа №1. Определение содержания калия в сыворотке крови

Принцип: ионы калия в безбелковой щелочной среде реагируют с тетрафенилборатом натрия с образованием суспензии тетрафенилбората калия. Степень помутнения реакционной смеси пропорциональна концентрации калия.

Оборудование и реагенты:

1. спектрофотометр, центрифуга

2. центрифужные пробирки, штатив для пробирок

3. пипетки вместимостью 0,1 мл, 1 мл; дозаторы – 100 мкл, 1000 мкл

4. набор реактивов для определения калия фотометрическим методом «Анализ плюс»

5. дезаствор: 0,5% р-р «Полидеза»

Исследуемый материал: сыворотка и гепаринизированная плазма крови

А. Приготовление реагентов

Приготовление рабочего реагента

смешайте необходимое количество реагента 2 (тетрафенилборат натрия 0,2 моль/л) с реагентом 3 (NaOH – 2,0 моль/л) в соотношении 1:1

Б. Проведение анализа

поместить в центри-фужные пробирки	опытная проба (мл)
сыворотка крови	0,05
осадитель	0,5

Тщательно перемешать, центрифугировать при 3000 об/мин в течении 5-10 мин

Пипетировать в кюветы	Опытная проба (мл)	Стандартная проба (мл)	Холостая проба (мл)
стандарт	-	100 мкл (0,1 мл) добавить в центральную часть рабочего реагента	-
осадитель	100 мкл (0,1 мл)	-	-
рабочий реагент	1,0 мл	1,0 мл	1,0 мл
Надосадочная жидкость	0,1 мл	0,1 мл	0,1 мл

Добавлять в центральную часть поверхности рабочего реагента. Перед добавлением тщательно перемешать содержимое каждой кюветы.

В течении 5-30 мин измерьте Е стандарта и Е пробы против холостой пробы. λ – 578 нм, d = 1 см

Расчёт:

С(ммоль/л) = 5 . Eпробы

Ест

Референтные величины:

сыворотка крови: 3,6-5,5 ммоль/л

плазма крови: 4,0 – 4,8 ммоль/л

ПРИЛОЖЕНИЕ № 4

Закрепление знаний, умений и навыков