1. Закрепить теоретические знания по теме «Химия белка».

2. Провести цветные реакции на белок и аминокислоты.

Исходный уровень знаний и умений.

Учащийся должен знать:

1. Строение, значение белков, аминокислот.

2. Свойства белков и аминокислот, лежащих в основе биохимических методов определения.

Учащийся должен уметь:

1. Выполнять цветные реакции на белок, аминокислоты.

Структура занятия.

1. Теоретическая часть:

1. Повторение теоретического материала по теме «Химия белка».

2. Вводное слово преподавателя.

Для обнаружения и изучения химического состава белков существуют 2 группы реакций: цветные и реакции осаждения.

Цветные реакции – применяются для установления белковой природы вещества, идентификации белков и определения их аминокислотного состава в различных биологических жидкостях. В клинической лабораторной практике эти методы используются для определения количества белка в плазме крови, аминокислот в моче и крови, для выполнения наследственных или приобретенных нарушений обмена веществ у новорожденных.

Существуют два типа цветных реакций:

1. универсальные – биуретовая (на все белки) и нингидриновая (на все аминокислоты и белки);

2. специфические – только на определенные аминокислоты – ксантопротеиновая реакция на циклические аминокислоты (тирозин, фенилаланин, триптофан); реакция Миллона на тирозин; реакция Фоля на серусодержащие аминокислоты.

2. Указания к занятию:

1. Внимательно изучите инструкцию.

2. Прочитайте и осмыслите ход выполнения лабораторных работ.

3. Соблюдайте меры предосторожности в работе с реактивами, спиртовкой.

4. При работе с пипетками пользуйтесь резиновой грушей с переходником.

3. Практическая часть.

1. Лабораторная работа № 1. Универсальные цветные реакции: биуретовая и нингидриновая.

Провести цветные реакции: биуретовую и нингидриновую. Заполнить таблицу, зарисовать результаты. Сделать выводы.

Реактивы: 1) 1% раствор яичного белка; 2) 10% раствор NаОН; 3) 5% раствор СuSО₄; 4) 0,5% раствор нингидрина.

Название реакции	Принцип	Метод проведения	Наблюдаемое окрашивание	Какие группы открываются в белке
1. Биуретовая	В основе лежит способность пептидных свя-зей образовывать с СuSО4 в щелочной среде окрашенные соединения	5 кап. 1% яичного белка + 5 кап. NаОН + 2 кап. СuSО4	Сине-фиолетовое окрашивание	Пептидные
2.Нингидриновая	Из нингидрина и продуктов гидро-лиза аминокислот образуются окра-шенные соедине-ния	5 кап. 1% яичного белка + 5 кап. 0,5% раствора нингидрина, нагреть до кипения	→ Розово-фиоле-товое, перехо-дящее в сине-фиолетовое	Амино-группы в α-положении, которые присут-ствуют в природ-ных аминокисло-тах и белках.

2. Лабораторная работа № 2. Специфические реакции на аминокислоты.

Провести специфические цветные реакции на некоторые аминокислоты. Заполнить таблицу, зарисовать результаты. Сделать выводы.

Название реакции	Принцип	Метод проведения	Наблюдаемое окрашивание	Какие группы открываются в белке
1.Ксанто-протеино-вая	Метод основан на способности амии-нокислот и амино-кислотных остат-ков полипептидов, содержащих арома-тическое кольцо, образовывать при взаимодействии с конц. НNО3 динит-ропроизводные же-лтого цвета, ко-торые в щелочной среде переходят в хиноидные струк-туры оранжевого цвета.	5 кап. 1% яичного белка + 3 кап. НNО3 и (осторожно!) нагревают. После охлаждения на остаток + 10 кап 10% раствора NаОН.	+ NаОН →	Реакция открыва-ет тирозин, фенил-аланин, трипто-фан; содержащие ароматическое кольцо аминокис-лот.
2. Реакция Миллона на тирозин	Раствор нитратов и нитритов ртути (I и II) в конц. азотной кислоте (р-в Мило-на) взаимодейству-ет с фенольной группой тирозина при нагревании. При этом образует-ся ртутная соль тирозина красного цвета.	5 кап. 1% яичного белка + 3 кап. реактива Миллона. Содержимое нагреть.	+ р-в Миллона → Осадок белка окрашивается в кирпично-красный цвет	Реакция открывает тирозин, имеющий фенольную группу.
3. Реакция Фоля	Аминокислоты, содержащие группу –SН подвергаются щелочному гидро-лизу с образова-нием Nа2S, кото-рый взаимодейст-вуя с солями свинца, образует осадок черного или бурого цвета – PbS.	2 мл раствора яичного белка + 1,5 мл NаОН. Нагреть до кипения, кипя-тить 1-2 минуты. Затем добавить 3 кап. уксуснокис-лого свинца	Черный или бурый осадок. или	Реакция открывает цистеин, метионин, цистин, содержащие сульфгидрильные группы –SН.

3. Оформление результатов. Выводы.