- •Лабораторна робота №1 Тема: Визначення величин показників, що характеризують прооксидантно-антиоксидантний гомеостаз
- •Хід роботи:
- •Контрольні питання:
- •Література:
- •Лабораторна робота № 2 Визначення вмісту вторинних продуктів перекисного окиснення біополімерів
- •1. Місця протікання перекисного окиснення. Шляхи перекисного окиснення.
- •Хід роботи:
- •Контрольні питання:
- •Тестові питання:
- •Література:
- •Лабораторна робота № 3 Біоантиоксидантний захист. Визначення активності антиоксидантів ферменту супероксиддисмутази.
- •Хід роботи:
- •Контрольні питання:
- •Тестові завдання:
- •Контрольні питання:
- •Тестові питання:
- •Література:
- •Лабораторна робота №5 Роль вільнорадикального окиснення і ліпідної пероксидації в патогенезі захворювань серцево-судинної системи
- •Хід роботи:
- •Контрольні питання:
- •Тестові питання:
- •Література:
- •Лабораторна робота №6 Стрес. Окислювальний стрес
- •Хід роботи:
- •Методика визначення активності лдг
- •Контрольні питання
- •Тестові питання
- •Література:
- •Лабораторна робота №7 Роль вільнорадикального окиснення і ліпідної пероксидації у патогенезі захворювань мозку та онкологічних захворювань
- •Хід роботи:
- •Контрольні питання:
- •Тестові питання:
Контрольні питання:
-
АОЗ клітин.
-
Вказати і охарактеризувати ендогенні сполуки.
-
Антиоксидантний захист звязуванням іонів металів.
-
Класифікація антигіпоксантів.
-
Характеристика синтетичних препаратів.
-
АОЗ тканин.
-
Класифікація АО.
-
Склад і функції СОД.
-
Низькомолекулярні біоантиоксиданти, які синтезуються в організмі людини.
Тестові завдання:
-
Ліпофільним АО є:
-
ретинол;
-
фенол;
-
тіол.
-
Комплекси АО, що використовують фармакологічно:
-
мелатонін;
-
ебселен;
-
тріовіт, аскорутин.
-
Синтетичні АО:
-
токоферол;
-
тіол;
-
феноксан.
-
СОД – це:
-
реактант гострої фази, що має один поліпептидний ланцюг;
-
головний продуцент Н2О2 в клітині;
-
фермент, що дисмутує пероксид водню в воду і триплетний кисень.
-
У прокаріот СОД містить:
-
залізо і марганець;
-
мідь і цинк;
-
залізо і цинк.
-
АО, що забезпечує захист токоферола або відновлює його окислену форму після атаки вільних радикалів:
-
аскорбінова кислота;
-
ретинол;
-
убіхінон.
-
АО,що здатен зв’язувати АФК з утворенням стабільного феноксильного радикалу:
-
іонол;
-
фенбутол;
-
оліфен.
-
АО,що здатен відновлювати функції ендотелію у хворих на ішемію серця:
-
оліфен;
-
іонол;
-
пробукол.
-
АО фермент, що активує глутатіонпероксидазу:
-
селеніт натрію;
-
орготеїн;
-
ерісод.
-
До блокаторів утворення вільних радикалів відносять:
-
убіхінон;
-
аллопурінол;
-
ерісод.
Література:
-
Кольман Я., Рем К.Г. Наглядная биохимия: Пер. с нем. Мир, Москва, 2000, 469 с.
-
Ленинджер А. Основы биохимии: В 3-х томах. Т.2. Мир, Москва, 1985, 368 с.
-
Страер Л.С. Биохимия: Пер. с англ. В 3-х томах. Т.1. Мир, Москва,1984, 1232 с.
-
Уайт Л., Хендлер Ф., Смит Э., Хилл Р., Леман И. Основы биохимии: в 3-х томах.
Лабораторна робота №4
Особливості дії природних антиоксидантів. Визначення аскорбінової кислоти
Мета: з’ясування особливості дії природних антиоксидантів, визначити в експерименті концентрацію аскорбінової кислоти
Основні поняття: біоантиоксиданти, вітаміни, ферменти
Питання для теоретичної підготовки:
-
Аскорбінова кислота
-
Вітамін Е
-
Каротиноїди
-
Вітаміни А, К, кретиноїди
-
Фенольні сполуки
-
Показники ПАС в організмі
Хід роботи:
Принцип методу: даний метод заснований на екстракції дегідроаскорбінової кислоти (ДАК) та аскорбінової кислоти (АК) за допомогою трихлороцтової кислоти (ТХО), окисненні АК до ДАК за допомогою 2,6-дихлорфеноліндофеноляту натрію (2,6-ДХФІФ), визначенні суми (АК+ДАК) та ДАК. Вміст АК визначається за різницею (АК+ДАК)-ДАК. ДАК при реакції з 2,4-динітрофенілгідразином (2,4-ДНФГ) утворює забарвлений продукт, який фотометрується.
Хід визначення: готували центрифужні пробірки по кількості проб та стільки ж центрифужних пробірок для 6% розчину ТХО. У центрифужні пробірки наливали по 10 мл 6% ТХО. Наважку серця 0,2 г розтирали у ступці, добавляли спочатку 2-3 краплі ТХО із набраної пробірки, продовжували розтирати, поступово додаючи невеликі порції ТХО. Переносили вміст ступки у пусту центрифужну пробірку, добавляли, змиваючи ступку, залишок з 6% ТХО. Таким чином, у пробірці виявилася розтерта наважка та 10 мл 6% ТХО. Гомогенат центрифугували при 3000 об/хв. 10 хв. Для кожної проби готували 4 хімічні пробірки та дві пробірки для контролю (загальні для всіх проб). Пробірки 1, 2 – паралелі для сумарного визначення ДАК+АК. Пробірки 3, 4 – для визначення ДАК. В усі пробірки приливали по 2 мл центрифугату, у контроль – 2 мл 6% ТХО. У 1, 2 пробірки додавали по 0,05 мл 0,2% дихлорфеноліндофеноляту натрію (ДХФІФ) для окиснення АК до ДАК. В усі 4 пробірки додавали по 0,1 мл 5% розчину тіосечовини у 6% ТХО (проби знебарвлювалися). У 3, 4 пробірки додавали по 1 краплі 0,2% ДХФІФ. В усі пробірки (крім “контроль”) додавали по 0,5 мл 2,4-ДНФГ. Всі пробірки інкубували у термостаті 3 години при 37°С. Після інкубації пробірки охолоджували за допомогою льоду, у кожну пробірку обережно, по стінках приливали 2,5 мл 85% сірчаної кислоти. У пробу “контроль” приливали 0,5 мл 2,4-ДНФГ (2 г у 100 мл 9 н сірчаної кислоти). Після додавання сірчаної кислоти витримували 1 год. Коли розчин набував жовто-червоного кольору, проби фотометрували при 540 нм у кюветі 10 мм проти контрольної проби. Екстинкцію АК визначали як різницю 3, 4 пробірок та 1, 2 пробірок: Е(АК)=Е(ДАК+АК)-Е(ДАК). Вміст АК визначали за калібрувальною кривою (5-30 мкг АК у 2 мл). При прямій пропорційній залежності концентрація–екстинкція знаходили коефіцієнт пропорційності К.
де: Аст – вміст АК у стандартному розчині, мкг (кожна крапка графіку);
Ест – екстинкція, яка відповідна стандартному розчину.
Розрахунок:
де: АК – вміст аскорбінової кислоти у тканині, мкг/г (мг/кг);
К – вміст аскорбінової кислоти на одиницю екстинкції;
ЕАК – екстинкція аскорбінової кислоти у колориметруємої пробі;
25 – коефіцієнт перерахунку на г тканини (0,2 г : 5=0,04 г – наважка тканини, що бере участь у замірі екстинкції: 1 : 0,04=25).
Коефіцієнт переводу у систему СІ 56,7859.