43. Культивирование м/о в лабораторных условиях

Культивирование - процесс выращивания м/о на питательных средах в определенных условиях, а развивающийся при этом организм называют культурой.

Рост - физиологический процесс в ходе которого увеличиваются размеры и масса оно популяции.

Рост культуры – не только рост одной клетки, но и общее увеличение числа клеток – биомассы, т.е. рост культуры м/о.

Способы культивирования: поверхностный/глубинный; периодический/непрерывный; в аэробных и анаэробных условиях.

Культивирование на поверхности жидких, плотных и сыпучих сред.

М/о кислород получают непосредственно из воздуха. При этом способе важно увеличить площадь соприкосновения среды с воздухом. Н сыпучих средах поверхностным методом получают ферментные препараты. В жидких средах аэробные м/о часто растут, образуя на поверхности пленку. Этот способ используется и в лабораториях и в промышленности.

44. Особенности культивирования облигатных анаэробов

Методы культивирования анаэробных микроорганизмов

• Посев уколом анаэробных бактерий в столбик сахарного агара

• Изолированные по методу Вейнберга колонии анаэробов в сахарном агаре

Метод Виньял-Вейона

• в расплавленный и остуженный до 50°С агар вносят исследуемую анаэробную культуру, перемешивают и засасывают в пастеровскую пипетку, конец которой запаивают. Через 24 — 48 часов столбике агара вырастают ясно видимые колонии микроорганизмов — анаэробов

• Анаэростат предназначен для культивирования в чашках Петри микроорганизмов группы облигатных анаэробов и микроаэрофилов.

• Анаэростат представляет собой цилиндрическую емкость, герметично закрываемую с помощью ленточного замка. В крышку вмонтирован вакууметр и вентиль для присоединения вакуумного насоса и внешней системы источника газа.

• Создание анаэробной или микрофильной атмосферы для культивирования микроорганизмов в анаэростате может производиться двумя способами:

• • с помощью газогенерирующих пакетов типа Газпак;

• • вакуумзаместительным заполнением бескислородными газами (газовыми смесями).

Аппарат Киппа

• Для выращивания анаэробов в бескислородной среде можно использовать водородную атмосферу, образующуюся в аппарате Киппа действием серной кислоты на металлический цинк. Водород перед поступлением в сосуд с культурами проходит для удаления остатков кислотыты и О, через промывные склянки с 10 % раствором азотнокислого свинца и с щелочным раствором пирогаллола.

СРЕДА КИТТА-ТАРОЦЦИ

Среда Китт-Тароцци — содержит кусочки печени, обладающие высокой адсорбционной способностью, 0.5% глюкозы. Перед посевом среду кипятят на водяной бане не менее 15 минут, сверху заливают слоем вазелиного масла, чтобы предохранить посев от проникновения кислорода.

Среда Вильсона — Блера

Содержит глюкозу, сернисто-кислый натрий, хлорид железа. Анаэробы образуют черные колонии за счет восстановления сернисто-кислого натрия в сернистый натрий, который, соединяясь с хлоридом железа, образуют осадок черного цвета -сернистое железо.

45. Рост и размножение бактерий. Факторы роста

РАЗМНОЖЕНИЕ БАКТЕРИЙ НА ЖИДКИХ И ПЛОТНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ. ФАЗЫ РАЗВИТИЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПОПУЛЯЦИИ

• Размножение бактерий определяется временем генерации, т. е. периодом, в течение которого осуществляется деление клетки.

• Продолжительность генерации зависит от вида бактерий, возраста, популяции, состава питательной среды, температуры и других факторов.

• В оптимальных условиях время генерации у разных бактерий колеблется довольно в широких пределах: от 20 мин у кишечной палочки до 14 ч у микобактерий туберкулеза, в связи с чем, их колонии образуются через 18—20 ч, либо через 3—5 нед. соответственно.

Особенности микробного роста на жидких питательных средах

• Рост бактерий с равномерным помутнением среды.

• Придонный рост бактерий, характеризующийся образованием осадка на дне пробирки с жидкой питательной средой.

• Пристеночный рост бактерий, выражающийся в образовании рыхлых хлопьев, прикрепленных к внутренней поверхности стенок сосуда.

• Поверхностный рост бактерий, характеризующийся появлением на поверхности жидкой питательной среды пленки.

Факторы роста бактерий:

• аминокислоты,

• пуриновые и пиримидиновые основания,

• липиды,

• витамины,

• железопорфирины (гем)

• и другие соединения.