9. Культивирование микроорганизмов на питательных средах, культуральные свойства. Значение культуральных признаков в индефикации бактерий.

10.Споры и спорообразование

Особая форма существования или стадия развития отдель­ных видов бактерий в неблагоприятных условиях. У патогенных бактерий спорообразование происходит вне организма, например в конце развития культуры на искусственных питательных средах, когда в них накапли­ваются вредные продукты метаболизма, или же в окружающей среде, куда они попадают с выделениями человека и животных.

Формирование эндоспоры начинается с деления нуклеоида, уплотне­ния и обособления определенного участка цитоплазмы вегетативной клет­ки, а заканчивается образованием внутри бактерии круглого или оваль­ного тельца, покрытого плотной многослойной оболочкой, пропитанной большим количеством липидов, кальция, дипиколиновой кислоты. После полного созревания споры материнская бактерия лизируется, но если сохраняется, то внутри нее спора четко контурируется, напоминая блес­тящее зерно. Среди патогенных бактерий споры формируют только круп­ные палочки. По отношению к их длине у разных видов бактерий споры располагаются в центре, субтерминально или терминально. При этом ес­ли размер споры не превышает поперечника палочки, то последняя имеет правильную цилиндрическую форму и называется бациллой, а если она больше, то бактерии вздуваются и становятся веретенообразными –клостридиями. Патогенной бациллой является возбудитель сибирской язвы. Спора у нее круглая, находится в центре палочки. Клостридии анаэробной инфекции имеют типичную форму веретена, клостридии ботулизма с эллипсоидной спорой напоминают теннисные ракетки, а клостридии стол­бняка с круглой спорой – барабанную палочку (рис. 8).

Эндоспоры бактерий выдерживают дли­тельное кипячение, действие горячего возду­ха (140–150°С) и химических дезинфици­рующих веществ, многие годы сохраняются в почве, на растительности и предметах. По­падая в организм человека и животных, спо­ры патогенных бактерий прорастают в мате­ринские клетки за несколько часов.

Водным фуксином, водно–спиртовым метиленовым синим и по Граму эндоспоры не окрашиваются, так как их плотная много­слойная оболочка непроницаема для обыч­ных красителей. В мазках из патологических материалов, культур бацилл и клостридии, окрашенных простыми красителями, споры выглядят в виде бесцветных телец внутри окрашенных в соответствующий цвет вегетативных клеток или вне их. Окрашивать их можно по методу Циля–Нельсена, используя для обес­цвечивания мазков после обработки их фуксином Пиля не 5 %, а 1 % серную кислоту. При этом эндоспоры, так же как микобактерии тубер­кулеза, красятся в розовый цвет и будут хорошо видны на синем фоне бактерий. Чаще для окрашивания спор используют специальные методы по Пешкову или Шефферу–Фультону.

Способ Пешкова. На фиксированный мазок наливают метиленовый синий по Леффлеру. Препарат нагревают в средней части пламени, ки­пятят 15–20 с, не допуская высыхания. Остывший препарат промывают водой, докрашивают в течение 30 с 0,5 % раствором нейтрального крас­ного, затем снова промывают водой и высушивают. Споры окрашиваются в голубовато–синий цвет, тело бацилл и клостридии – в розовый.

Окраска спор по Шефферу–Фультону. Фиксированный мазок ок­рашивают 5 % водным раствором малахитового зеленого, 3–4 раза наг­ревая его до появления паров, промывают водой и докрашивают 0,5 % водным раствором сафранина. Споры окрашиваются в зеленый цвет, тело бактерий – в красный.