15. Периодические и хемостатные культуры.

16. Биология и морфология вирусов. Их взаимоотношения с клеткой хозяина.

В! – не облад собственным обменом в-в нуждается в живой. Причём, чем моложеи чем интенсивнее протекают в ней обменные процессы, тем лучше и быстрее репродуцируется В! (эмбриональные, раковые).

КЛСФ и МОРФОЛОГИЯ:

1. в зависимости от -хозяина: р!, ж!, б!, чка.

2. от локализации в : в цтпл, в яд.

3. от НК: ДНК– и РНК–овые.

4. от строения: простые, сложные

ПРОСТЫЕ В! состоят из НК, покрытой белковой оболочкой (КАПСИД), к/я защищает НК от разл воздействий. Она состоит из отдельных субъединиц (КАПСОМЕРОВ), их кол-во разл у разн В!!.

СЛОЖНЫЕ – т/же им НК, капсид, СУПЕРКАПСИДНАЯ ОБОЛОЧКА, в состав которой кроме белка входят липиды и углеводы. У нек сложных в!! на поверхности есть выросты – нейраминидазы и гемагглютинины (ГРИПП).

Взаимодействие с  хозяина:

1. АДСОРБЦИЯ в! на поверхности . Она м.б. обратимой и необратимой. При приближении в! к, происходит взаимодействие его специфических рецепторов с комплементарными структурами. Если взаимодействие по типу хим реакции – НЕОБРАТИМОЕ, если слабое взд – ОБРАТИМОЕ.

2. ПРОНИКНОВЕНИЕ в! в . Некоторые в!! (бактериофаги) вводят только НК, другие – полностью проникают всо всеми своими оболочками.

3. «РАЗДЕВАНИЕ». Собственные ферменты , принимая в! за чужеродное в-во, начинают расщеплять оболочки, помогая ему освободить свою НК.

4. НК в! БЛОКИРУЕТ ГЕНОМ ХОЗЯИНА, выключает его из работы и берёт управление всеми БХ процессами под свой контроль.перестаёт выполнять свою работу и начинает производить новые в! частицы, причём на рибосомах синтезируются капсомеры, в ядре (или цтпл) ген материал.

5. САМОСБОРКА ВИРУСА.

6. ВЫХОД В!. Если вирус простой, то покидает взрывоподобно, все в! частицы выходят одновременно, аЛИЗИРУЕТСЯ. Если сложный – то выходит плавно, отпочковываясь, достраивая при этом суперкапсид.не погибает, какое-то время она сохраняет свою жизнеспособность, но в полной мере выполнять свои функции уже не может. Т/е больные клетки округляются, сливаются в многоядерный синцитий…

Т.о., в результате взаимодействия ИНФЕКЦИОННОГО ВИРУСА с она либо погибает, либо остаётся живой, но больной.

НЕИНФЕКЦИОННЫЕ ВИРУСЫ проходят те же стадии, но их НК не блокирует, а встраивается в геном , мирно с ней сосуществует и ни чем себя не проявляет. Материнскаяделится, а генетический материал вируса попадает в дочерние. Т/е в!! называются ЛАТЕНТНЫМИ (или СКРЫТОЙ ИНФЕКЦИЕЙ), т.е. происходит персистенция в!. Активизация начинается обычно при ослаблении организма, НК выходит из генома и начинает вести себя как вирулентный инфекционный вирус. Интегрированный с клеточным геномом хозяина вирус наз ПРОВИРУСОМ, а процесс объединения в! с хр (НК) наз-ся ВИРОГЕНИЯ.

Исходы взаимодействия вируса с клеткой:

1. гибель или болезнь хозяина

2. персистирование, затем в! может активироваться или станет опухолевой.

3. Абортивный исход. Вирус проникает в , но погибает и дальнейшего процесса не происходит.

17. Клеточные культуры, их происхождение. Способы выявления вирусов в клеточных культурах.

Впервые культуры были использованы в 50-х гг. Клетки клсф-ся на:

1. ПЕРВИЧНО ТРИПСИНИЗИРОВАННЫЕ. Их получают из эмбриональной тк чка, обезьян и т.д. Тк помещают в спец пит среду, освобождают от разл ненужных эл-тов, измельчают, а затем заливают р-ром трипсина в сосуде. Помещают на магнитную мешалку, сосуд встряхивается, а трипсин разрушает межсвязиразъединяются. Затем проводят центрифугирование: живыеоседают, а мёртвые – всплывают. Надосадочную жидкость с мёртвымисливают, осадок заливают пит средой, взбалтывают и получают взвесь, а затем подсчитывают кол-вов камере Горяева. Взвеси помещают в разл ёмкости и добавляют спец ростковую среду, прчём на 1 мл пит среды должо быть2 млн. Они крепятся к поверхности стекла, омываются средой и начинают размножаться, покрывая пов сосуда МОНОСЛОЕМ. Затем ростковую среду сливают и добавляют поддерживающую (не погибают, но и не размножаются) и ВИРУСЫ и культивируют 3-4 суток. По св составу поддерживающие среды должны приближаться к тк жидкости МК. В их основе лежит солевой р-р Хэнкса, содержащий в необх конц мин соли. К нему добавляют АК, витамины, пуриновые и пиримидиновые азотистые основания, углеводы и индикатор (метиловый красный). При рН=7 цв КРАСНЫЙ (неживые), при сдвиге в кислую сторону – ЖЕЛТЕЕТ (еслиживые, то выделяются кислые продукты их жизнедеятельности). При накоплении большого кол-вапродуктов обмена, нужно менять среду.

Если к поддерживающей среде добавить СЫВОРОТКУ КРОВИ, в к/й содержится спец белок ПЕТУИН, стимулирующий размножение (чаще всего исп сыв эмбрионов КРС), то получают ростковую среду.

Первично трипсинизированные культуры используются ТОЛЬКО 1 РАЗ.

2. ПОЛУПЕРЕВИВАЕМЫЕ КЛЕТКИ. Их можно перевивать 50-100 раз. В основном это диплоидные .

3. ПЕРЕВИВАЕМЫЕ (БЕССМЕРТНЫЕ) – это раковые клетки: Hela, Hep-1, Hep-2 – были получены в 50-х гг, затем их постоянно пересеивали. В этом случае из старой пробирки выливают пит среду и добавляют ВЕРСЕН, под его влиянием отлипают. Взвесь клеток с этим в-вом центрифугируют,оседают, версен сливают и добавляют поддерживающий пит раствор. Т.о., снова получают готовую культуру.