Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

immunologia_zachet_1

.pdf
Скачиваний:
828
Добавлен:
11.03.2016
Размер:
3.13 Mб
Скачать

параметры имеют существенное значение для реализации связывания

антител с антигенами, используемыми для тестирования. Поэтому каждая конкретная тест-система разработана строго для конкретного вида биоматериала и в 99% случаев - для сыворотки крови. Тест-системы для анализа компонентов сыворотки не могут быть использованы в опытах с другими биологическими жидкостям из-за высокой вероятности получения ложных результатов. Тест-системы, предназначенные для человека (за некоторыми исключениями), нельзя примененять на лабораторных животных и наоборот. Исключение составляют перекрестно-реагирующие агенты, например цитокин - трансформирующий фактор роста человека и свиньи.

Приведем несколько примеров технических приемов получения биоматериалов.

Сыворотка крови

Как правило, у человека или животных берут венозную кровь в чистую сухую пробирку. Оставляют при комнатной температуре на 20-30 мин для образования первичного сгустка фибрина. Затем пробирки центрифугируют на цитоцентрифугах при 1000-2000 об/мин в течение 10 мин. Супернатант и есть сыворотка крови. Если анализ выполняют не в тот же день и час, то сыворотку разливают по аликвотам в плотно закрываемые криопробирки (полипропиленовые) и замораживают. Для краткосрочного хранения можно заморозить до -18-20 °С, для более продолжительного хранения лучше использовать морозильные камеры с температурой -70-80 °С. Повторные оттаивания-замораживания нежелательны или недопустимы (в зависимости от конкретного вида анализа). Нежелательно или недопустимо также использовать в работе сыворотки с признаками гемолиза и липидемии.

Существуют приемы так называемого осветления мутного биоматериала, в частности центрифугирование при 14 000 об/мин в течение 10 мин. Однако следует иметь в виду: при этой процедуре возможна потеря искомого биопродукта. И все же данную процедуру принято применять для осветления проб мочи, цереброспинальной жидкости, бронхоальвеолярного лаважа,

синовиальной жидкости.

Плазма крови

Для получения плазмы крови следует позаботиться о том, чтобы не образовался сгусток фибриногена. Добиваются этой цели двумя способами: либо работают как можно быстрее, свежевзятую кровь

безотлагательно центрифугируют при 2000 g в течение 10 мин с охлаждением, супернатант быстро разливают по аликвотам в охлажденные полипропиленовые пробирки и морозят; либо кровь берут в пробирки с антикоагулянтами (гепарином, цитратом натрия или этилендиаминтетраацетатом - ЭДТА). Но в последнем случае следует учитывать, что присутствие антикоагулянта в биоматериале не повлияет на результаты иммуноанализа. В большинстве случаев антикоагулянты влияют на взаимодействие антител с антигенами, большинство тест-систем рассчитано на работу с сывороткой крови, а не с плазмой.

Слизистые секреты, сорбированные на пористые губки

Губки, предназначенные для сорбции выделений (из канала шейки матки, со слизистой рта, зубодесневых карманов, полостей носа и т.п.), имеют стандартные размеры и массу. По окончании процедуры сорбции губки помещают в пробирки с экстрагирующим буфером и оставляют, как правило, на ночь в холодильнике при 4 °С, после чего центрифугируют при 13 000 об/мин в течение 10 мин и супернатант используют в качестве материала для иммуноанализа.

Состав экстрагирующего буфера: 50 мМ HEPES, pH 7,5; 150 мМ

NaCl; 1 mM ЭДТА; 25 mM EGTA; 1 mM Na3VO4; 1 mM NaF; 0,1% Tween 20; 10% глицерол.

4.Центральные и периферический органы иммунной системы.Иммунопоэз и иммуногенез.

В иммунной системе различают центральные и периферические органы и ткани. К центральным органам иммунной системы относятся костный мозг и тимус.

Вцентральных органах происходит антигеннезависимая дифференцировка лимфоцитов(иммунопоэз). Из стволовых клеток,их селекция в отношении аутореактивности и

созревание.Т-лимфоциты развиватся в тимусе,а В-клетки в печени плода и после рождения в костном мозге. Втимусе и в костном мозге происходит очень важный процесс формирования репертуара специфических антигенраспознающих рецепторов Т- и В-лимфоцитов соответственно. Помимо этого,костный мозг как кроветворный орган содержит самоподдерживающуюся популяцию полипотентных гемопоэтических стволовых клеток. У птиц есть специализированный орган, где дифференцируются В-клетки-бурса Фабриция. Важную роль в созревании В-клеток, особенно направленных на синтез Ig A,выполняют пейеровы бляшки.

К периферическим органам иммунной системы относятся лимфатические узлы,селезенка и лимфоидная ткань,связанная со слизистыми оболочками и кожей, объединенные системой рециркуляции. В этих органах происходят антигензависимые этапы дифференцировки лимфоцитов(иммуногенез) и развивается иммунный ответ.

На территории периферических лимфоидных органов наивные лимфоциты распознают антиген и активируются. Обязательный процесс в адаптивном иммунном ответе-пролиферация клонов антигенраспознающих лимфоцитов и их дальнейшая дифференцировка в клетки-эффекторы.Действие Эффекторных клеток и молекул направоенно на элиминацию антигена из организма. В процессе иммунного ответа формирются клетки памяти.

Иммунная система - это совокупности всех лимфоидных органов и скоплений лимфатических клеток тела.

Синонимом иммунной системы является лимфатическая система.

Лимфоидные органы - это функциональные тканевые образования, в которых образуются иммунные клетки и где они пр иобретают иммунную специфичность.

Среди органов иммунной системы различают:

1. Центральые: вилочковая железа (тимус), костный мозг, бурса (у птиц).

2.Периферические: кров, лимфа, селезенка, лимфатические узлы.

3.Система лимфоэпителиальных образований: скопления лимфоидной ткани слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта, дыхательных и мочеполовых путей.

ЦЕНТРАЛЬНЫЕ ОРГАНЫ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ

Костный мозг является одновременно органом кроветворения и органом иммунной системы. Общая масса костного мозга равна 2,5 - 3 кг. Выделяют красный и желтый костный мозг.

По функциональному назначению в красном костном мозге различают миелоидную (гемоцитопоэтическую) и лимфоидную ткани, из которых идет образование клеток крови, моноцитов и В - лимфоцитов.

Желтый костный мозг представлен в основном жировой ткани, которая заместила ретикулярную. Кровеобразующие элементы в желтом мозге отсутствуют. Но при больших кровопотерях на месте желтого костного мозга могут вновь появиться очаги кроветворения за счет стволовых клеток, поступивших с кровью.

Тимус (вилочковая железа, зобная железа) расположен в грудной полости, позади верхней части грудины. Состоит из двух неодинаковых по форме и размеру долей, которые плотно прижаты друг к другу. Снаружи он покрыт капсулой из соединительной ткани. В глубь органа от нее отходят тяжи, перегородки. Они делят всю ткань, железы на маленькие дольки. В вилочковой железе различают наружное более темное корковое вещество, где господствуют лимфоциты, и центральное, светлое мозговое вещество, где располагаются железистые клетки. Клеточный состав тимуса полностью обновляется за 4 -6 дней. Из тимуса в периферические лимфоидные ткани мигрирует около 5 % новообразующихся лимфоцитов. Для большенства других клеток,

образующихся в тимусе, он же становится "могилой" клетки погибают в течение 3 - 4 дней. Причина гибели не расшифрована.

Бурса (сумка Фабрициуса) является централт~ым органом иммунной системы у птиц. У млекопитающих и человека этой сумки нет. Бурса представляет нечто подобное человеческому аппендиксу, слепому отростку кишечника. Только аппендикс располагается в середине кишечника, а Фабрициева сумка вблизи анального отверстия у птиц.

Основным структурным элементом сумки служит лимфоидный узелок с корковой и мозговой зонами. Корковая зона содержит несколько плотных слоев лимфоцитов. Под ними расположен базальный эпителиальный слой. В центральной части среди ретикулоцитов находятся преимущественно малые лимфоциты. По периферии мозговой зоны расположены менее зрелые базофильные клетки лимфоидного ряда.

ПЕРИФЕРИЧЕСКИЕ ОРГАНЫ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ

Селезенка - кроветворный орган, а также периферический орган иммунной системы, располагается слева от желудка, в левом подребертu, на пути тока крови по главным магистральным сосудам. Ежедневно через нее проходит около 800 мл крови. Это мощный фильтр для чужеродных белков, погибших форменных элементов и микроорганизмов, попавших непосредственно в кровоток. Селезенка является главным источником антител при внутривенном введении антигена. Именно в селезенке раньше, чем в каком-либо ином органе, в ответ на введение антигенных частиц начинается синтез JgM . Селезенка способна продуцировать факторы, стимулирующие фагоцитоз лейкоцитами и макрофагами.

Лимфатические узлы - выполняют роль биологических фильтров. Они расположены на пути следования лимфы по лимфатическим сосудам от органов и тканей к лимфатическим протокам. Они

находятся в хорошо защищенных местах и в области суставов.

ИСТЕМА ЛИМФОЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ ОБРАЗОВАНИЙ Лимфоидные образования глотки - это 6 миндалин

лимфоидного глоточного кольца. Каждая миндалина - это довольно крупное скопление лимфоидной ткани. Поверхность миндалин неровная, как будто изрыта оврагами. Эти складки называют криптами. Они задерживают частички пищи, пыли и т.д. Микроорганизмы попадая сюда, могут размножаться, что служит сигналом для запуска иммунологических реакций.

Лимфоидные образования пищевода

В толще складок слизистой оболочки пищевода, а также между ними, в глубине его борозд расположены лимфоидные узелки. Находясьна пути пищевых масс, а, следовательно, и антигенного воздействия, лимфоидные узелки осуществляют контроль и защиту стенок органа от генетически чужеродного материала. Лимфоидные узелки формируют цепочки на всем протяжении органа, повторяя извилистый ход складок. Кроме того, в стенках пищевода присутствуют так называемые диффузно рассеянные клетки лимфоидного ряда, залегающие между цепочками.

Лимфоидные образования желудка

В слизистой оболочке желудка обнаруживаются лимфоциты, относящиеся к В- и Т- популяциям, плазматические клетки и макрофаги. На разных этапах онтогенеза скопления лимфоидных узелков в различных частях желудка колеблется.

Лимфоидные образования кишечника

Лимфоидные образования в стенках толстой и тонкой кишок имеют анатомические особенности. Строение и имммунологическая функция этих органов соответствуют физиологическому назначению тонкой и толстой кишок.

Лимфоидный аппарат включает в себя: лимфоидные (пейеровы бляшки, рис.6), одиночные лимфоидные узелки, диффузно расположенные лимфоциты. У начала толстой кишки, располагается червеобразный отросток с его лимфоидными узелками.

Лимфоидные образования органов дыхания

В стенках органов дыхания, в которые вместе с воздухом попадают чужеродные частицы, имеется хорошо развитый аппарат иммунной защиты. Это скопления лимфоидной ткани расположенные в слизистой оболочке гортани, трахеи и бронхов под покровным эпителием, а также рассеянные в слизистой оболочке довольно многочисленные клетки лимфоидного ряда, получившие название лимфоидной ткани, ассоциированной с бронхами.

Скопления лимфоидной ткани (лимфоидные узелки) зависит от возраста, а также функционального состояния организма

Лимфоидные образования мочевыводящих путей

Лимфоидные скопления (узелки) в стенках мочевыводящих путей выполняют "сторожевые" функции по отношению к тем чужеродным веществам, которые попадают в них извне восходящим путем или образуются в верхних их отдела

Иммуногенез (антителообразование)

Фазы иммуногенеза. В иммуногенезе различают две фазы — индуктивную и продуктивную. Индуктивная протекает с момента введения антигена до появления антителообразующих клеток. Она продолжается не более 20 ч. В течение этого времени происходят распознавание антигена иммунокомпетентными клетками, кооперация между Т- и В-лимфоцитами, а также начальные этапы дифференцировки В-лимфоцитов в плазматические антителообразующие клетки (плазмоциты). Они образуются из

незрелых плазматических клеток — плазмобластов, которые делятся через каждые 6—9 ч.

Индуктивная фаза особенно чувствительна к изменениям, которым лимфоидная ткань может подвергаться в результате патологических процессов, а также при воздействии облучения, гипотермии, под влиянием кортизона и других факторов.

Продуктивная фаза иммуногенеза начинается через сутки после введения антигена. В этой фазе происходят пролиферация плазматичёскйх клеток лимфоидных органов (селезенки, лимфатических узлов, лимфоидных скоплений слизистых оболочек), прохождение ими завершающих этапов дифференцировки, синтез и секреция антител.

Иммунопоэз

В отличие от миелопоэза лимфоцитопоэз в эмбриональном и постэмбриональном периодах осуществляется поэтапно, сменяя разные лимфоидные органы. Как отмечалось ранее, лимфоцитопоэз подразделяется на:

1)Т-лимфоцитопоэз;

2)В-лимфоцитопоэз.

Всвою очередь, они делятся на три этапа:

1)костномозговой этап;

2)этап антигеннезависимой дифференцировки, осуществляемый в

центральных иммунных органах; 3) этап антигензависимой дифференцировки, осуществляемый в

периферических лимфоидных органах.

Т-лимфоцитопоэз

Первый этап осуществляется в лимфоидной ткани красного костного мозга, где образуются следующие классы клеток:

1)стволовые клетки – I класс;

2)полустволовые клетки предшественники Т-лимфоцитопоэза – II

класс; 3) унипотентные Т-поэтинчувствительные клетки,

предшественницы Т-лимфоцитопоэза. Эти клетки мигрируют в кровяное русло и достигают вилочковой железы (тимуса) – III класс.

Второй этап – антигеннезависимая дифференцировка, которая осуществляется в корковом веществе тимуса. При этом происходит дальнейшее образование Т-лимфоцитов. Стромальными клетками выделяется тимозин, под влиянием которого происходит превращение унипотентных клеток в Т-лимфобласты. Они являются клетками IV класса в Т-лимфоцитопоэзе. Т-лимфобласты превращаются в Т-пролимфоциты (клетки V класса), а они в Т-лимфоциты – VI класс.

В тимусе из унипотентных клеток развиваются самостоятельно три субпопуляции Т-лимфоцитов – Т-киллеры, Т-хелперы, Т-супрессоры.

Образовавшиеся Т-лимфоциты приобретают в корковом веществе тимуса разные рецепторы к разнообразным антигенам, при этом сами антигены в тимус не поступают. Защита вилочковой железы от попадания чужеродных антигенов осуществляется за счет наличия гематотимусного барьера и отсутствия приносящих сосудов в тимусе.

В результате второго этапа образуются субпопуляции Т-лимфоцитов, которые обладают различными рецепторами к определенным антигенам. В тимусе также происходит образование Т-лимфоцитов, обладающих рецепторами к антигенам собственных тканей, однако такие клетки сразу же разрушаются макрофагами.

После образования Т-лимфоциты, не проникая в мозговое вещество тимуса, поступают в кровоток и заносятся в периферические лимфоидные органы.

Третий этап (антигеннезависимая дифференцировка) осуществляется в Т-зависимых зонах периферических лимфоидных органов – лимфатических узлах и селезенке. Здесь создаются условия для встречи антигена с Т-лимфоцитом (киллером, хелпером или супрессором), имеющим рецептор к данному антигену.

Чаще всего происходит не непосредственное взаимодействие Т-лимфоцита с антигеном, а опосредованное – через макрофаг. При поступлении в организм чужеродного антигена он вначале фагоцитируется макрофагом (завершенный фагоцитоз), частично расщепляется, а антигенная детерминанта выносится на поверхность макрофага, где концентрируется. Затем эти детерминанты передаются макрофагами на соответствующие рецепторы различных субпопуляций Т-лимфоцитов. Под влиянием специфического антигена происходит реакция бластотрансформации – превращение Т-лимфоцита в Т-лимфобласт. Дальнейшая дифференцировка клеток зависит от того, какая субпопуляция Т-лимфоцитов провзаимодействовала с антигеном.

В-лимфоцитопоэз

В процессе В-лимфоцитопоэза можно выделить следующие этапы.

Первый этап – осуществляется в красном костном мозге, где образуются следующие классы клеток:

1)стволовые клетки – I класс;

2)полустволовые клетки, предшественницы лимфопоэза – II класс;

3)унипотентные В-лимфопоэтинчувствительные клетки – предшественницы В-лимфоцитопоэза – III класс.

Второй этап – антигеннезависимая дифференцировка – у птиц осуществляется в специальном органе – фабрициевой сумке, у млекопитающих в том числе и у человек такой орган не найден.

Большинство исследователей считает, что второй этап (так же как и первый) осуществляется в красном костном мозге, где

Соседние файлы в предмете Иммунология