- •Цели и задачи постановки биопробы на лабораторных животных
- •Инфекция и инфекционный процесс
- •Основные признаки, позволяющие отличать инфекционное заболевание от соматического:
- •Механизмы, пути и факторы передачи инфекции при различных формах инфекционных болезней (по л.В. Громашевскому)
- •Основные формы и классификации инфекционных процессов и заболеваний
- •I. Адгезии и колонизации.
- •II. Факторы вирулентности (агрессии и инвазии).
- •Ферменты и механизм действия
- •Характеристика бактериальных экзо- и эндо-токсинов
- •III. Факторы персистенции
- •Бактерицидная функция кожи
- •Бактерицидная активность лизоцима слюны
- •Бактерицидная активность сыворотки крови (баск)
- •Фагоцитоз
- •Иммуномодуляторы
- •1) Интерферон лейкоцитарный
- •1) Что изображено на схеме?
- •Классификация антительных препаратов
- •1) Что изображено на схеме?
- •Реакция агглютинации
- •Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (рпга, рнга) Методы постановки рнга
- •Самостоятельная работа
- •Реакция иммунного лизиса
- •Реакция связывания комплемента (рск)
- •Реакция иммунной флюоресценции (риф)
- •Иммуноферментный анализ (ифа)
- •Самостоятельная работа
- •1) Что изображено на схеме?
- •2) Что изображено на схеме?
Реакция иммунного лизиса
Антитела могут вызывать лизис, т.е. растворение клеток, только при участии комплемента (С). Следовательно, все реакции с участием С называются реакциями иммунного лизиса. К ним относят: РСК, р. гемолиза, р. бактериолиза.
Для реакции необходимы:
1. Антиген - микробы, эритроциты и другие клетки.
2. Антитела (лизины) - иммунная сыворотка, реже сыворотка больного. Бактериологическая сыворотка содержит антитела, лизирующие бактерии, гемолитическая - гемолизины, способствующие лизису эритроцитов, лизис спирохет вызывают спирохетолизины, клеток - цитолизины и т. д. Титр гемолитической сыворотки - ее наибольшее разведение, при котором происходит полный гемолиз 3% взвеси эритроцитов барана в присутствии комплемента 1:10.
3. Комплемент - неспецифический белок, содержащийся в сыворотке
человека и теплокровных животных. Больше всего комплемента в сыворотке морских свинок.
Эту сыворотку (смесь от нескольких животных) обычно используют в качестве комплемента. Свежий (нативный) комплемент нестоек и легко разрушается при нагревании, встряхивании, хранении, поэтому пользоваться им можно не позже 1-2-го дня после получения. Консервированный комплемент (на 10 мл сыворотки 0,2 г борной кислоты и 0,3 г сульфата натрия) сохраняется при 4°С до 2 недель. Чаще применяют сухой комплемент. Перед употреблением его растворяют изотоническим раствором хлорида натрия до первоначального объема, указанного на этикетке.
4. Изотонический раствор хлорида натрия.
Работа № 1
Реакция связывания комплемента (рск)
Реакция связывания комплемента протекает в 2 фазы. В первой (специфической) взаимодействуют антиген, антитело и комплемент. Если антиген соответствует антителу, они соединяются и образуют комплекс, который связывает комплемент. Образовавшееся соединение внешне не проявляется. Об его образовании узнают с помощью индикатора, которым является гемолитическая система, участвующая во второй (индикаторной) фазе реакции. Гемолитическая система состоит из эритроцитов барана и соответствующей гемолитической сыворотки. Гемолитическая сыворотка, реагируя с эритроцитами, делает их чувствительными (сенсибилизирует) к действию комплемента, в присутствии которого эритроциты разрушаются (лизируются). Если лизиса нет, комплемент связан первой системой и, следовательно, антиген в ней соответствует антителу. Отсутствие гемолиза регистрируют как положительный ответ. Если в испытуемой системе антиген не соответствует антителу, иммунный комплекс не образуется и комплемент остается свободным. Свободный комплемент участвует во второй системе, вызывая гемолиз эритроцитов, результат РСК при этом отрицательный.
Для постановки РСК требуется точное определение количественных соотношений всех ингредиентов, участвующих в реакции: исследуемой сыворотки, антигена, комплемента, гемолитической сыворотки кролика и эритроцитов барана. Поэтому, постановке основного опыта предшествует титрование гемолитической сыворотки и выбор ее рабочего разведения, титрование других ингредиентов.
В РСК используют:
1. Прогретую (инактивированную) сыворотку при 56°С в течение 30 мин, чтобы разрушить имеющийся в ней комплемент. Обычно сыворотку больного применяют в разведении 1:5-1:10, иммунные (диагностические) сыворотки – в разведении 1:50 и более.
2. Диагностикум.
3. Комплемент в рабочей дозе. Перед опытом С обычно титруют, т. е. определяют наименьшее его количество, при добавлении которого к гемолитической системе происходит полный гемолиз в течение 1 ч при 37°С. Титруют С по схеме.
4. Эритроциты барана. Используют 3% взвесь отмытых эритроцитов барана.
5. Гемолитическая сыворотка.
В РСК применяют гемолитическую сыворотку в тройном титре. Например, если титр гемолитической сыворотки составляет 1/200, то рабочее разведение сыворотки составляет 1/400, следовательно, к 0,1 мл гемолитической сыворотки следует добавить 39,9 мл изотонического раствора хлорида натрия.
Работа № 2