Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (рпга, рнга) Методы постановки рнга

РНГА с эритроцитарным антигенным диагностикумом

РНГА с эритроцитарным антительным диагностикумом

Реакция латекс-агглютинации

Реакция

Кумбса

РНГА с унитиолом

(выявление IgM и IgG)

В этой реакции микробный или растворимый антиген адсорбируется на поверхности эритроцитов, которые в таком «нагруженном» состоянии приобретают способность агглютинироваться иммунной сывороткой, специфичной для микробного антигена. Учитывается реакция по образованию агглютинированными эритроцитами осадка в виде зонтика на дне планшетов, в то время как в контроле, без иммунной сыворотки, они оседают в центре, образуя пуговку с ровными краями. Реакция гемагглютинации является более чувствительной, чем агглютинация бактерий, применяется для диагностики при многих инфекционных заболеваниях, особенно у детей, при необходимости выявления антител в более низких титрах. Эта реакция может быть использована и для обнаружения антигенов при применении специфических сывороток

Работа № 3. Реакция преципитации

РП ставят в тех случаях, когда приходится пользоваться растворимыми антигенами: лизатами, экстрактами, гаптенами. При взаимодействии такого антигена с антителом в присутствии электролитов (изотонический раствор хлорида натрия) образуется преципитат в виде мутного «кольца» или осадка.

РП обычно применяют для определения Аг при диагностике ряда инфекций (сибирская язва, менингит, пневмония и др.); в судебной медицине - для определения видовой принадлежности крови, спермы и т. д.; в санитарно-гигиенических исследованиях - при установлении фальсификации продуктов; с ее помощью определяют филогенетическое родство животных и растений.

Для этой реакции необходимы следующие компоненты.

1. А н т и т е л а (преципитины) - иммунная сыворотка с высоким титром антител (не ниже 1:100000). Титр преципитирующей сыворотки устанавливают по наибольшему разведению антигена, с которым она дает реакцию. Сыворотку обычно применяют неразведенной или в разведении 1:5-1:10.

2. А н т и г е н - растворенные вещества белковой или липоидно-полисахаридной природы (полные антигены, гаптены, экстракты или лизаты микробов или других клеток).

3. И з о т о н и ч е с к и й р а с т в о р х л о р и д а н а т р и я.

Внимание! Все компоненты, участвующие в этой реакции, должны быть совершенно прозрачными.

Основные методы проведения реакции преципитации: реакция кольцепреципитации и реакция преципитации в агаре (геле).

Методика

В преципитационную пробирку с помощью пастеровской пипетки вносят 0,2-0,3 мл (5-6 капель) сыворотки. На сыворотку осторожно наслаивают антиген в таком же объеме, наливая его тонкой пастеровской пипеткой по стенке пробирки. Пробирку при этом держат в наклонном положении. При правильном наслаивании между сывороткой и антигеном должна получиться четкая граница. Осторожно, чтобы не перемешать жидкости, пробирку ставят в штатив. При положительном результате реакции на границе антигена и антитела образуется мутное «кольцо» - преципитат. Реакция сопровождается рядом контролей.

Схема постановки РП (кольпреципитация по Асколи)

Объем ингредиентов, мл		Номер пробирки
		2 (контроль)	3 (контроль)
0,2	преципитирующая	нормальная	физиологический
	сыворотка	сыворотка	раствор
0,2	Аг из экстракта	Аг из экстракта	Аг из экстракта
	шерсти	шерсти	шерсти

Реакция преципитации в геле

Иммунодиффузия в агаровом геле растворов антигенов и антител, залитых в разные лунки, навстречу друг другу в случаях соответствия их специфичности приводит к образованию специфического преципитата в виде полосок и дуг в местах встречи реагентов.

Как правило, в центральную лунку заливают стандартный раствор антигена, а в периферические - испытуемые сыворотки. В одну из периферических лунок заливается стандартная иммунная сыворотка соответствующей специфичности, а в другую -нормальная сыворотка для контроля. Проводится инкубация во влажной камере при 37°С в течение 24 ч. Учитывают количество и ширину полос преципитации между центральной лункой с раствором антигена и лунками с исследуемыми сыворотками.